猴B病毒血清學(xué)檢測(cè)方法的比較及表位研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 猴B病毒血清學(xué)檢測(cè)方法的比較
　　目的:
　　猴B病毒(Monkey B virus，BV)(也稱猴皰疹病毒Ⅰ型(Cercopithecine herpesvirus1))，是重要的人獸共患病原，屬一類病原，四級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室防護(hù)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)要求猴B病毒作為抗原，但由于生物安全問(wèn)題，其抗原制備受到很大限制，因此使用替代抗原進(jìn)行其血清學(xué)檢測(cè)并對(duì)其比對(duì)驗(yàn)證。
　　方法：

2、
　　應(yīng)用2種ELISA方法(抗原分別為BV和HVP2)、1種IEA方法（抗原為HSV-1）和1種IFA方法（抗原為HSV-1）對(duì)本實(shí)驗(yàn)室135份送檢恒河猴血液樣品進(jìn)行篩查，對(duì)陽(yáng)性及可疑樣品再用Western Blot（抗原為HSV-1）方法以及以HSV-1gC1純化糖蛋白為抗原的免疫印跡方法驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　HVP2-ELISA、BV-ELISA、HSV-1-IEA和HSV-1-IFA陽(yáng)性檢出率分別為36.3％

3、、38.5％、35.6％和34.1％;4種方法檢測(cè)結(jié)果一致的樣品占91.9％(124/135)，陽(yáng)性結(jié)果均可被WB和免疫印跡方法確證;可疑樣品11份，27.3％(3/11)的樣品經(jīng)驗(yàn)證檢驗(yàn)為陽(yáng)性。
　　結(jié)論：
　　幾種抗體檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果符合率較高，均可以作為初篩檢測(cè)方法;陽(yáng)性樣品及可疑樣品的確證檢驗(yàn)應(yīng)使用多種方法，避免漏檢;在ELISA法初篩檢測(cè)中，陽(yáng)性樣品的判定標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)降低，避免可疑樣品漏檢。
　　第二部分 猴B

4、病毒診斷表位的研究
　　目的:
　　鑒定B病毒特異的檢測(cè)抗原表位。
　　方法:
　　利用生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)分析技術(shù)對(duì)BV和HSV全病毒的序列進(jìn)行分析比對(duì)，選擇B病毒特異表位以及B病毒可能的線性表位肽段合成多肽;同時(shí)，利用跨疊多肽陣列技術(shù)，針對(duì)B病毒核心抗原蛋白gB和gD的氨基酸序列進(jìn)行跨疊陣列設(shè)計(jì)并合成多肽。再利用合成肽與B病毒標(biāo)準(zhǔn)血清樣品進(jìn)行ELISA驗(yàn)證，評(píng)價(jià)表位肽段的特異性和敏感性。
　　結(jié)果:

5、　　ELISA測(cè)定結(jié)果顯示，gD蛋白肽段（序列為AQLPPNWHVPEAS）和gB蛋白肽段（序列為YVRELLREQERRPGDAAATPKP SA）可檢測(cè)猴B病毒抗體，與傳統(tǒng)ELISA比較，二者的組合檢測(cè)敏感性為98％(49/50);然而，使用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)的B病毒特異表位在多次實(shí)驗(yàn)無(wú)法獲得證實(shí)。
　　結(jié)論:
　　多肽表位抗原，在ELISA實(shí)驗(yàn)中與病毒顆?？乖啾?，具有較為一致的準(zhǔn)確性，且檢測(cè)靈敏度高，此類抗原可以作為初篩