三黃益腎顆粒的藥學研究.pdf

1、目的:
　　在前期臨床工作的研究上，遵照中藥6類新藥和《中藥、天然藥物技術研究指導原則》有關技術要求，開展三黃益腎顆粒的制備工藝、質量標準及初步穩(wěn)定性，并進行制劑的初步藥效學研究，為最終開發(fā)成安全有效、服用攜帶方便的一種治療慢性腎臟病的中藥新制劑奠定基礎。
　　方法:
　　1.制備工藝研究
　　(1)工藝路線篩選:采用慢性腎衰竭(CFR)大鼠模型，結合文獻研究的結果，篩選三黃益腎顆粒提取物的制備工藝路線。

2、　　(2)提取工藝研究:采用單因素比較法，以揮發(fā)油得率為指標，優(yōu)化肉桂揮發(fā)油提取工藝;單因素比較結合正交試驗法，以固形物得率、結合蒽醌、丹參酮ⅡA的提取率為考察指標，優(yōu)化大黃、丹參藥材的乙醇提取工藝;以固形物總質量、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的提取率為考察指標，優(yōu)化大黃、丹參藥渣與黃芪等其余藥材的水提取工藝。
　　(3)濃縮、干燥工藝研究:以結合蒽醌、丹參酮ⅡA的保留率為指標，優(yōu)選乙醇提取液的回收乙醇（濃縮）方法及其浸膏的真空干

3、燥工藝;以黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的保留率為指標，優(yōu)選水提取液的濃縮方法及其浸膏的噴霧干燥工藝。
　　(4)制劑成型工藝研究:測定提取物的吸濕速率、臨界相對濕度和通過粉體學性質;以物料吸濕增重百分率、溶化率和成型率為指標，優(yōu)選填充劑種類;以顆粒得率為指標，優(yōu)選干式制粒工藝條件;以顆粒的臨界相對濕度為指標，確定制劑成型時的環(huán)境濕度要求;以顆粒吸濕增重百分率為指標，優(yōu)選直接接觸藥品的包裝材料的種類。
　　(4)依據小試優(yōu)選的

4、工藝參數，開展三批中試驗證試驗。
　　2.初步藥效學研究
　　以CFR大鼠模型血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)值為評價指標，初步評價所研制劑有效性。
　　3.質量標準研究
　　采用薄層鑒別法(TLC)，建立制劑中黃芪、大黃、丹參、熟地黃等的鑒別方法;采用高效液相法(HPLC)，建立制劑中黃芪甲苷和丹參酮ⅡA含量測定方法;依照《中國藥典》2015年版四部通則0104項下規(guī)定，建立制劑的性狀、水分、粒度、溶化性等

5、標準。開展制劑的常溫穩(wěn)定性和加速穩(wěn)定性試驗，初步評價所研制劑在上市包裝條件下的穩(wěn)定性，初步確定其有效期。
　　結果:
　　1.制備工藝研究
　　(1)優(yōu)選的制備工藝路線為:肉桂提取揮發(fā)油，大黃、丹參采用乙醇回流提取、濃縮、干燥制成提取物;肉桂、大黃、丹參藥渣與黃芪等其余藥材煎煮、濃縮、干燥制成提取物，合并提取物，加輔料制成顆粒劑。
　　(2)肉桂提取揮發(fā)油的優(yōu)化工藝為:無需浸泡，藥材加8倍水，蒸餾提取6h，其發(fā)油

6、提取率為0.92％。
　　(3)大黃、丹參優(yōu)選的提取工藝為:藥材回流提取2次，每次加8倍體積80％乙醇，回流提取2h，其丹參酮ⅡA與結合蒽醌的提取率分別為47.65％和54.63％，醇溶性固形物得率為18.48％;優(yōu)選的濃縮方式為減壓濃縮(濃縮條件為:-0.08 Mpa;55～65℃)，其丹參酮ⅡA和結合蒽醌的保留率分別為86.30％和84.30％;優(yōu)化的浸膏干燥方式為真空干燥(-0.08MPa，50～80℃)，鋪盤厚度不大于0.

7、7 cm;其丹參酮ⅡA和結合蒽醌的保留率分別為72.08％和69.12％。
　　(4)肉桂、大黃、丹參藥渣與黃芪等其余4味藥材優(yōu)選的水提取工藝為:煎煮2次，每次加10倍量水，煮沸提取2h，其黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的提取率分別為56.03％和68.18％，水溶性固形物得率為30.34％;優(yōu)化的濃縮方式為減壓濃縮(-0.08MPa，55～75℃)，其黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的保留率分別為85.92％和78.40％;優(yōu)化的浸膏

8、干燥方式為噴霧干燥(進風溫度為175±5℃，出風溫度為85±5℃，濃縮液的相對密度為1.06～1.10(60℃)，其黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷保留率分別為83.91％和77.64％。
　　(5)藥材提取物的吸濕率為22.61％，臨界相對濕度為58％，松密度為0.68g·mL-1，振實密度為0.73 g·mL-1，成型工藝優(yōu)選的填充劑為麥芽糊精，采用干式制粒法，物料水分控制在3.0～5.0％之間，所得顆粒的休止角為36.2°，吸濕

9、率為13.81％，臨界相對濕度為61％，松密度為0.78 g·mL-1，振實密度為0.85 g·mL-1;選用PET/AL/PE結構的純鋁藥用復合膜進行封裝;經三批中試驗證試驗證明，該制備工藝合理可行，黃芪甲苷的轉移率為66.12％～66.64％，丹參酮ⅡA轉移率為32.02％～32.23％。
　　2.初步藥效學研究
　　本工藝方法制備的三黃益腎顆粒對CFR大鼠模型的BUN值和Cr值有明顯的降低效果。2.質量標準及穩(wěn)定性研究

10、
　　3.所建立的制劑中丹參、黃芪、大黃、肉桂的TLC鑒別方法，經方法學考察表明，其方法穩(wěn)定無干擾;所建立的制劑中黃芪甲苷與丹參酮ⅡA的含量測定方法，方法學考察表明，其方法穩(wěn)定無干擾，同時規(guī)定了產品含量的最低限量。依據制劑通則（《中國藥典》2015年版四部通則0104）項下的要求，進行了制劑的性狀、裝量差異、粒度、溶化性、水分、微生學檢驗，均符合顆粒劑的相關要求。經6個月常溫穩(wěn)定性試驗和加速穩(wěn)定性試驗考察結果顯示，本品在上市包裝條