肺癌方聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌的臨床及作用機制研究.pdf

1、目的:通過觀測肺癌方聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌的臨床療效，探究肺癌方中主要藥物重樓的抗腫瘤作用機制，評估非小細(xì)胞肺癌的中西醫(yī)結(jié)合治療效果。
　　方法：本研究分為臨床研究及實驗研究兩方面。臨床研究中，將接受肺癌方治療看作干預(yù)因素，分為治療組與對照組。于2013年7月—2014年5月，采集符合納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的患者66例。肺癌方聯(lián)合化療為治療組，共33例；單純化療為對照組，共33例。化療方案采用TP方案（紫杉醇135mg/m2ivgttd

2、1，順鉑75mg/m2ivgtt d1），21天為1周期。治療組在化療前一周開始服用肺癌方湯劑，連用14天。治療3周期后，依據(jù)影像學(xué)等證據(jù)評價瘤體大小，運用EORTC QLQ-LC43量表評價生存質(zhì)量，KPS評分評價體力狀況，監(jiān)測腫瘤標(biāo)記物CEA，觀測骨髓抑制及體重等指標(biāo)，綜合評價中西醫(yī)結(jié)合治療非小細(xì)胞肺癌的臨床優(yōu)勢。依據(jù)臨床觀察結(jié)果，試圖尋找肺癌方中抗腫瘤的作用機制。在實驗研究中，以大細(xì)胞肺癌NCI-H661細(xì)胞株為研究對象，首先運用

3、WST-1法篩選肺癌方中各個中藥單體對腫瘤細(xì)胞的作用，發(fā)現(xiàn)重樓的抗腫瘤效力居于首位，故選擇重樓皂苷I(重樓主藥成分)作為干預(yù)藥物，研究其對腫瘤細(xì)胞的作用機制。WST-1法檢測重樓皂苷I及陽性藥物對照組（紫杉醇）抑制NCI-H661細(xì)胞的增殖行為，得到其IC50（半數(shù)抑制濃度）。依據(jù)IC50，設(shè)置1、5、10μM為重樓皂苷I低、中、高劑量組，隨機分為對照組、陽性對照組（紫杉醇IC50）、重樓皂苷 I低、中、高劑量組，描繪細(xì)胞生長曲線；流式

4、細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)檢測細(xì)胞周期及凋亡率；TUNEL檢測細(xì)胞凋亡形態(tài)；LDH試劑盒檢測藥物干預(yù)后細(xì)胞膜通透性；Western Blot法檢測caspase-3、caspase-8、caspase-9、p53、bim、bad、bax、bcl-2、cyclin D1、cytochrome C蛋白表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢驗阻斷劑干預(yù)后細(xì)胞凋亡率，顯微鏡觀測其細(xì)胞的形態(tài)改變。
　　結(jié)果：臨床研究中：（1）一般情況比較：

5、兩組患者在年齡、性別、TNM分期等方面均無顯著統(tǒng)計學(xué)差別；（2）瘤體大小變化比較：綜合影像學(xué)等資料分析，在腫瘤大小變化方面，治療組的穩(wěn)定率及有效率均明顯高于對照組，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；（3）生存質(zhì)量比較：EORTC QLQ-LC43量表提示，兩組患者的評分在某些項目上均較治療前有所提升，如社會功能、情緒功能、軀體功能、癥狀子量標(biāo)、肺癌特異性模塊、整體生存質(zhì)量評估等，且治療組在其中幾個項目的改善上更為顯著，主要體現(xiàn)在軀體功能、癥狀、肺癌

6、特異性模塊、整體生存質(zhì)量評估等方面；（4）體力提升比較：經(jīng)治療，兩組KPS評分均較前顯著提升，且較之于對照組，治療組的提升更為明顯；（5）癌胚抗原CEA監(jiān)測：經(jīng)治療，兩組的腫瘤標(biāo)記物均有顯著下降，治療組癌胚抗原CEA降低得更為顯著；（6）骨髓抑制情況比較：治療后，治療組骨髓抑制情況較對照組有所改善；（7）體重改變比較：治療后，治療組體重改變的有效率較對照組明顯增加。在肺癌方主要藥物重樓作用機制的實驗研究中，NCI-H661細(xì)胞經(jīng)重樓皂苷

7、 I干預(yù)后，其增殖能力明顯下降；流式細(xì)胞術(shù)分析顯示重樓皂苷I作用于該細(xì)胞后，其凋亡率明顯升高，但未出現(xiàn)明顯周期特異性；TUNEL檢測顯示，經(jīng)重樓皂苷I干預(yù)后的細(xì)胞發(fā)生凋亡的數(shù)量顯著高于對照組，并可見一系列凋亡特征，如核固縮、核碎裂等征象；LDH試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)經(jīng)重樓皂苷I干預(yù)后的細(xì)胞，其膜通透性明顯增大，且呈濃度依賴性；Western Blot檢驗提示，caspase-8、caspase-9、p53、bim、bcl-2蛋白水平下降，bad

8、、bax、cyclin D1、caspase-3蛋白水平變化不明顯，cytochrome C水平則似有升高，但不明顯；流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)阻斷劑Pifithrin作用后細(xì)胞凋亡率下降，而經(jīng)阻斷劑616452、LY294002作用的細(xì)胞，其凋亡率為可疑下降；顯微鏡觀察形態(tài)學(xué)，經(jīng)阻斷劑Pifithrin作用后的細(xì)胞暴露于藥物時，細(xì)胞數(shù)量未明顯下降，且大部分處于舒展?fàn)顟B(tài)，而經(jīng)阻斷劑616452、LY294002作用的細(xì)胞暴露藥物后，細(xì)胞數(shù)量明顯減

9、少。
　　結(jié)論:肺癌方聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌，能縮小瘤體、抑制腫瘤進(jìn)展、提高患者生存質(zhì)量及體力、降低腫瘤標(biāo)記物及骨髓抑制的發(fā)生率；其中的主要藥物重樓能有效抑制 NCI-H661的體外增殖，其作用機制與調(diào)節(jié) p53的功能，作用于線粒體，誘導(dǎo)凋亡有關(guān)。因此，與單純化療相比，肺癌方聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌具有明顯優(yōu)勢，提示中醫(yī)藥在腫瘤治療領(lǐng)域能夠降低放化療的毒副作用，且其本身具有殺傷腫瘤的功效。因此擴大了其在腫瘤治療中的應(yīng)用范圍，為其