簡介：目的臨床部分對西醫(yī)診斷為病毒性肺炎的患兒進行中醫(yī)證候?qū)W研究通過對臨床表現(xiàn)與各證型之間關系的統(tǒng)計學處理建立判別函數(shù)協(xié)助辨證分型為該病辨證論治規(guī)范劃提供依據(jù)實驗部分通過對治療小兒病毒性肺炎痰熱閉肺證的有效中藥制劑清肺口服液對腺病毒3I、7B型攻擊后人胚肺成纖維細胞中FAS表達影響的研究探討開肺化痰解毒法治療小兒病毒性肺炎的分子學機理結(jié)論臨床部分在小兒病毒性肺炎的臨床辨證中要重視對發(fā)熱、咯痰痰鳴、氣促、鼻煽、肺部聽診、惡寒、面色、精神、汗、咽紅、扁桃體、指紋脈象、舌質(zhì)、舌苔等對辨證分型價值較大的指標進行綜合分析增加辨證的準確性在進行大規(guī)模的臨床調(diào)查中可通過小兒病毒性肺炎的辨證分型判別函數(shù)輔助判斷以減少辨證分型中主觀因素的影響實驗部分3I、7B型腺病毒對人胚肺成纖維細胞FAS的表達有一定的影響腺病毒可能通過此機制延長其在細胞內(nèi)的存活時間以利于自身復制清肺口服液含藥血清對FAS的表達具有一定的調(diào)節(jié)作用這一作用可能是其清除病毒在體內(nèi)的感染對機體起保護作用的機制之一

簡介：目的近些年，我國人間狂犬病報告病例數(shù)呈遞增態(tài)勢，狂犬病已成為當前重大的公共衛(wèi)生問題。我國關于狂犬病流行病學、病原學的深入研究較少，整體資料不全，福建省這方面的研究更是薄弱，尚不清楚我省狂犬病毒主要宿主的病毒攜帶情況和免疫情況，不清楚居民對狂犬病的認知程度及養(yǎng)犬情況等；國內(nèi)狂犬病毒街毒株的分離報道較少，尚未見在福建省境內(nèi)分離出狂犬病毒的報道，對福建省境內(nèi)狂犬病毒的流行毒株及其特征尚不清楚。因此，為了更好地預防和控制狂犬病，非常有必要開展系統(tǒng)的狂犬病流行病學研究，獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎資料，了解影響狂犬病發(fā)病率的主要因素；也很有必要進行狂犬病毒流行毒株的分離鑒定、病原生物學和遺傳學特征的研究。因養(yǎng)犬數(shù)的增加導致犬傷患者也不斷增加，推進和提高犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒的檢測方法也迫在眉捷。方法1、針對狂犬病高發(fā)的實際情況，通過系統(tǒng)的流行病學調(diào)查研究，以獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎資料；從生態(tài)學角度收集影響狂犬病發(fā)病率有關因素的資料，通過負二項回歸模型篩查出影響狂犬病發(fā)病率的主要因素。2、運用MIT和CIT法從疑似狂犬的腦組織中進行狂犬病毒街毒株的分離與鑒定，采取分段RTPCR的方法，對所分離的街毒株進行序列擴增、克隆、測序，拼接獲得全基因組序列，并運用生物學軟件對基因組結(jié)構(gòu)進行分析與比較；3、通過收集福建省不同時間、不同地區(qū)的犬腦組織，進行實驗室檢測診斷，對陽性標本進行N基因全長的擴增、克隆和測序，結(jié)合疫情資料進行狂犬病的分子流行病學研究。4、選取CTN株狂犬病毒糖蛋白富集表位基因片段進行克隆、表達和純化，人工獲得狂犬病毒糖蛋白抗原，為探索犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒檢測方法的提高奠定基礎。結(jié)果1、從2000～2006年福建省每年均有人間狂犬病疫情發(fā)生，平均發(fā)病率為00710萬。2002～2006年福建省人狂犬病報告病例，各地分布不一，夏秋季節(jié)發(fā)病相對較多，病例主要集中在30～60歲之間，男性多于女性，農(nóng)民發(fā)病人數(shù)最多。2、福建省3個調(diào)查地區(qū)的平均家庭養(yǎng)犬率約為4667％，人均養(yǎng)犬數(shù)約為013只，每家養(yǎng)犬數(shù)約為063只。家犬平均免疫率為554％。3、福建省普通群眾對狂犬病的認知情況較差，狂犬病專業(yè)技術(shù)人員，總體對狂犬病犬傷情況處理的知識水平較高。4、研究認為狂犬病的發(fā)病率與犬的免疫率及普通群眾狂犬病知識認知能力有關。犬免疫率每增加1％，5年累積發(fā)病率為原來的79％即下降了21％。普通群眾狂犬病知識認知能力平均每增加01分，5年累積發(fā)病率為原來的80％即下降了20％。5、本研究通過RTNESTEDPCR法從表觀健康犬腦組織中檢測出狂犬病毒，并經(jīng)基因測序證實表觀健康犬攜帶狂犬病毒，為狂犬病的預防和控制提供了有力的實驗證據(jù)。6、首次在福建省成功分離出狂犬病毒街毒株7株，并完成其中兩株FJ008、FJ009的生物學特性和全基因組序列測定。7、從福建省各地收集的犬腦組織標本共89份，通過RTNESTEDPCR擴增、純化、克隆，獲得19條包含N基因完整讀碼框的序列。根據(jù)核苷酸和推導的氨基酸的同源性高低，把19份含有RABVRNA的標本分為三個群組，A群組包括FJ001、FJ002、FJ003、FJ012、FJ013、FJ014；B群組包括FJ008、FJ009、FJ010、FJ011、FJ015、FJ016、FJ017、FJ018、FJ019；C群組包括FJ004、FJ005、FJ005、FJ007。各群組內(nèi)部RABVN基因的核苷酸同源性在9970～100％之間，群組間RABVN基因的核苷酸同源性在8643～8928％，各群組內(nèi)部RABVN基因的氨基酸同源性在9886～100％之間，群組間RABVN基因的氨基酸同源性在9533～9844％。結(jié)合標本來源地，證實福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征。8、福建省狂犬病的流行毒株與目前常用的各種疫苗株N基因序列比對同源性在8647～9889％之間，均屬于基因Ⅰ型，提示目前使用的疫苗能較好地保護福建省RABV流行毒株的感染。9、完成了重組質(zhì)粒PHTB624的高效表達和純化，獲得一批高純度的狂犬病毒糖蛋白重組抗原，應用于犬傷患者免疫后血清抗體的檢測，與市場上主流試劑盒檢測結(jié)果沒有明顯差異，提示該重組抗原具有較好的應用價值。結(jié)論1、福建省近些年狂犬病高發(fā)，居民養(yǎng)犬眾多，犬免疫率低下，普通群眾狂犬病相關知識薄弱。犬免疫率低下及普通群眾狂犬病相關知識薄弱是福建省狂犬病高發(fā)的主要影響因素。2、首次在福建省成功分離出7株狂犬病毒街毒株，并完成其中兩株街毒株FJ008、FJ009的生物學特性和全基因組序列測定。3、完成福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和分子流行病學研究。證實福建省存在表觀健康犬攜帶狂犬病毒的現(xiàn)象，為狂犬病的預防和控制提供了有力證據(jù)。雖然福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征，本研究發(fā)現(xiàn)福建省狂犬病的流行毒株與目前使用的各種疫苗株N基因序列比對同源性在8647～9889％之間，均屬于基因Ⅰ型，目前使用的疫苗還是可以較好地保護福建省流行毒株的感染。4、完成了重組質(zhì)粒PHTB624的高效表達和純化，獲得一批高純度的狂犬病毒糖蛋白重組抗原，應用于犬傷患者免疫后血清抗體的檢測與市場上主流試劑盒檢測結(jié)果沒有明顯差異，提示該重組抗原具有較好的應用價值。

簡介：目的分析中國主要疫區(qū)狂犬病毒的遺傳學特征，了解中國狂犬病毒的流行株與目前使用的人用、獸用狂犬病疫苗株的差異，為有效控制狂犬病疫情提供科學依據(jù)。方法對20042005年采自我國狂犬病主要疫區(qū)河南、江蘇、湖南、廣西、貴州等5省的1074份犬腦、貓腦及其它組織樣品，以免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、反轉(zhuǎn)錄一巢式聚合酶鏈式反應檢測狂犬病毒抗原；陽性樣品懸液接種鼠腦分離病毒；對病毒核蛋白、糖蛋白及偽基因克隆測序后以DNASTAR及MEGA生物信息學軟件進行遺傳學分析。結(jié)果分離到20株狂犬病毒，序列分析表明20株病毒均為基因1型狂犬病毒；其中具有代表性的6株病毒與我國現(xiàn)在使用的各種疫苗在基因和蛋白質(zhì)水平上均存在不同程度的差異，與我國人用疫苗株CTN同源性較高；系統(tǒng)發(fā)育樹表明，我國主要疫區(qū)的狂犬病毒與泰國、印度尼西亞、馬來西亞等東南亞狂犬病毒株處于同一分支。結(jié)論我國主要疫區(qū)宿主動物狂犬病毒攜帶率為21％～51％；我國的狂犬病毒仍為基因1型狂犬病毒，可以明確分為三個基因亞型當前狂犬病毒流行株與人用、獸用狂犬病疫苗株在基因和蛋白質(zhì)水平出現(xiàn)的多處變異可能會導致流行株毒力的增強以及疫苗對它們的保護效果降低。

簡介：點擊查看更多新生小鼠輪狀病毒腹瀉病理學及分子生物學致病機制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的病毒性心肌炎VMC是兒科的多發(fā)病近年來其發(fā)病率呈逐年升高趨勢故倍受醫(yī)學界的重視。目前中醫(yī)藥治療在提高機體免疫力、抗病毒、改善心臟功能、消除臨床癥狀等方面具有很大優(yōu)勢。本研究擬通過探討其治療VMC的確切作用機制為治療VMC及研制其它新藥奠定基礎。方法采用雄性BALBC小鼠心肌注射柯薩奇病毒造成病毒性心肌炎模型分別于1、3、5、7、10、14天取心肌病理組織HE染色后觀察病毒性心肌炎小鼠心肌細胞的損傷情況隨機分組給藥后采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫實驗測定各組小鼠血清IL4、IFNΓ細胞因子的水平觀察羚桂龍牡顆粒對病毒性心肌炎小鼠免疫平衡的影響。結(jié)果羚桂龍牡顆?？娠@著升高病毒性心肌炎小鼠IFNΓ水平7天時與正常對照組比較有顯著差異P005。結(jié)論羚桂龍牡顆粒對病毒性心肌炎患者有較好的治療作用在病毒性心肌炎小鼠急性期和恢復期時通過調(diào)節(jié)TH1和TH2型代表細胞因子水平使其達到動態(tài)平衡電鏡下觀察可顯著改善心肌損傷程度。由此可見羚桂龍牡顆粒能夠抑制病毒復制改善并修復損傷的心肌細胞有效治療病毒性心肌炎減輕患者痛苦從而達到治療病毒性心肌炎的作用。

簡介：本課題研究的目的觀察轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮生長因子VEGF基因?qū)σ浦驳慕幌荡笫笠葝u的再血管化程度和生物學功能的影響方法首先構(gòu)建攜帶血管內(nèi)皮生長因子165HVEGF165基因的重組腺病毒載體ADHVEGF165然后用其轉(zhuǎn)染新鮮分離、純化的大鼠胰島檢測在體外培養(yǎng)的條件下胰島表達HVEGF165的情況最后將經(jīng)ADHVEGF165轉(zhuǎn)染的LWEIS大鼠胰島經(jīng)門靜脈移植至同基因大鼠的肝臟內(nèi)根據(jù)對供體胰島的不同處理將接受胰島移植的糖尿病受體大鼠分三組即ADHVEGF165轉(zhuǎn)染組VEGF組、空載體ADGFP轉(zhuǎn)染的對照組GFP組和未轉(zhuǎn)染的空白對照組PBS組移植后監(jiān)測實驗動物血糖的變化三周以后進行經(jīng)靜脈糖耐量試驗IVGTT檢測增加糖負荷后不同組實驗動物血中胰島素水平的差異對受體動物的肝臟進行病理學檢查應用CD34抗體、胰島素抗體行免疫組化研究分析不同組動物肝臟內(nèi)胰島的再血管化程度及其產(chǎn)生胰島素功能的差異結(jié)果體內(nèi)實驗MILES試驗和體外實驗均證實經(jīng)ADHVEGF165轉(zhuǎn)染的HEK293細胞大鼠胰島可以表達標記蛋白GFP綠色熒光蛋白和HVEGF165其表達HVEGF165的量顯著高于對照組過表達HVEGF165的胰島在同基因移植后其再血管化的程度高于對照組胰島在機體糖負荷增加的情況下過表達HVEGF165的胰島使受體動物血糖下降的速度加快其產(chǎn)生、分泌胰島素的量高于對照組結(jié)論過表達HVEGF165的大鼠胰島在同基因移植后再血管化的程度提高其維持糖尿病受體糖代謝穩(wěn)態(tài)的能力增強

簡介：第一部分山東地區(qū)部分HIV感染者及獻血者人皰疹病毒8型感染的流行病學調(diào)查目的檢測山東地區(qū)部分HIVKS感染者及獻血者血清或血漿中抗人皰疹病毒8型HHV8IGG抗體的存在情況，并進一步對抗HHV8陽性標本中HHV8DNA的存在情況進行檢測；從而了解HHV8在我國山東地區(qū)HIV感染者及獻血者中的感染情況，并探討HHV8經(jīng)輸血傳播的可能性。方法86份HIVKS血清來源于山東地區(qū)HIV感染者及520份獻血者血漿主要來源于濟南地區(qū)中抗HHV8IGG抗體的檢測采用ELISA方法；抗HHV8陽性標本血清或血漿中HHV8DNA的檢測采用實時熒光定量PCR技術(shù)SYBRGREENⅠ熒光染料法。結(jié)果1血清學檢測結(jié)果1186份HIVKS血清中抗HHV8抗體檢出率為162751486，與對照組健康獻血者血漿比較有顯著性差異P12520份獻血者血漿中抗HHV8抗體檢出率為596231520，其中男性獻血者血漿中抗HHV8IGG抗體的檢出率為636717120，女性獻血者血漿中抗HHV8IGG抗體的檢出率為553414110。統(tǒng)計學分析表明，不同性別、年齡獻血者血漿中抗HHV8IGG抗體的檢出率無顯著性差異P005。13HBSAG、抗HCV以及抗梅毒螺旋體獻血者血漿中抗HHV8IGG抗體的檢出率分別為4065、4651及6579，統(tǒng)計學分析表明，抗HHV8抗體的檢出與HBSAG、抗HCV以及抗梅毒螺旋體的檢出相關性不大P005。2PCR檢測結(jié)果所有抗HHV8陽性標本血清或血漿中均未檢出HHV8DNA的存在。

簡介：背景乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染可引起包括無癥狀攜帶、慢性乙型肝炎CHRONICHEPATITISB，CHB、肝硬化和肝癌的一系列肝臟疾病譜。全世界大約有3億人已經(jīng)成為HBV慢性攜帶者，我國的HBV感染者約為11億，約有3000萬的乙型肝炎患者，全國每年死于與HBV感染相關肝病約30萬人。目前尚無徹底清除HBV的理想藥物，因此HBV感染已經(jīng)成為嚴重影響我國人民健康的公共衛(wèi)生問題。HBV是非常容易發(fā)生變異的DNA病毒，而基因型和亞型變異是最常見的HBV基因變異形式，可以影響HBV基因型間差異超過全長8％序列，而且基因型的分布存在明顯的地理分布特點和人種差異；還有YMDD變異、前C區(qū)變異、BCP變異等點突變可以影響HBV的生物學功能。因為特異性淋巴細胞表位EPITOPE是特異性細胞免疫應答得以激發(fā)的主要原動力，處于免疫識別和免疫激活的核心位置1。當變異位點涉及HBV表位序列時，可能會影響宿主針對HBV的免疫應答能力。因為目前HBV表位主要由歐美國家學者鑒定，這些國家的HBV基因型主要以A、D為主。以HLAA0201限制性HBCAG1827特異性CTL表位FLPSDFFPSVC1827V為例，它被認為是表位研究中的經(jīng)典序列，是從歐、美地區(qū)的主要流行病毒株基因型A、D中鑒定出來的；而在我國HBV基因型背景下，C1827的結(jié)構(gòu)可能發(fā)生了變化。鑒于HBV基因型和基因亞型之間的較大序列差異，鑒定適合我國病毒學背景研究的新表位，用合適的HBV表位序列探究我國HBV基因型變異與細胞免疫應答規(guī)律將有重要的研究意義。目的調(diào)查在我國HBV優(yōu)勢基因型中，C1827V／I變異體的分子流行病學特點和在細胞免疫學研究中的差異；通過B、C基因型特異性多肽池POOL調(diào)查研究我國HBV感染者T淋巴細胞免疫特點，并篩選適合HBV特異性T細胞表位鑒定的調(diào)查人群；比較HBV基因型間、熱點變異組間T淋巴細胞免疫功能差異。方法1通過GENBANK中上傳的30條HBV基因序列分析和本室測序的20條序列以DNASIS軟件對比分析，研究C1827V／I的分布特點；應用生物學軟件分析基因B、C型的C基因序列，并構(gòu)建C1827V／I變異體的PCRRFLP檢測方法；應用生物信息學網(wǎng)站預測并比較C1827V／I與HLA分子的結(jié)合力預測分值變化；2從我室保存的全國HBV基因型調(diào)查血清庫中，選擇160份血清，通過自行構(gòu)建的PCRRFLP法檢測，并調(diào)查C1827V／I變異體的流行病學特點；3在我國流行分布的C18271優(yōu)勢背景下，選取南方醫(yī)院住院的57例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細胞，應用四聚體染色技術(shù)、體外增殖培養(yǎng)技術(shù)、酶聯(lián)免疫斑點試驗，比較外周血中C1827I特異性淋巴細胞的頻數(shù)與C1827V特異性淋巴細胞頻數(shù)的差別，以及分析兩者間T淋巴細胞功能上的差異；4檢測57例慢性乙型肝炎患者臨床常規(guī)指標ALT、TBIL、HBVDNA以及HBV基因型，比較分析C1827V／I特異性淋巴細胞頻數(shù)與這些臨床指標的相關關系；5依據(jù)我國HBV基因型B、C中的特點，參考20條GENBANK序列，設計針對我國HBV基因型B、C重疊多肽；并且設計混合多肽POOL，以便在我國HBV基因背景下檢測淋巴細胞的特異性應答反應；6選取南方醫(yī)院感染內(nèi)科住院的38例HBV感染者的外周血淋巴細胞，以及10例健康對照者的外周血淋巴細胞，依據(jù)HBV感染的臨床特點將患者分成HBEAG陰性慢性乙型肝炎組、HBEAG陽性慢性乙型肝炎組、HBV感染肝衰竭組、肝硬化組等，通過多肽誘導IFNΓ分泌，酶聯(lián)免疫斑點實驗進行檢測，比較不同臨床組間特異性T淋巴細胞分泌功能的差異；7分析38例樣本的酶聯(lián)免疫斑點實驗的結(jié)果，比較本研究設計的不同基因型多肽POOL間在誘導HBV特異性淋巴細胞分泌的差異；8檢測38例HBV感染者HBV基因型，分析B、C基因型患者間特異性T淋巴細胞應答反應差異；9檢測38例HBV感染者前C區(qū)變異、BCP變異，分析變異陽性與陰性組間特異性T淋巴細胞應答反應差異；10收集38例HBV感染者臨床資料，分析臨床常規(guī)指標ALT、TBIL、HBVDNA與HBV特異性淋巴細胞功能的關系；結(jié)果1通過比對GENBANK序列發(fā)現(xiàn)C1827I在各國基因B、C型的流行株中有廣泛的分布，而C1827V則在其它基因型流行株廣泛分布；2我們成功構(gòu)建了一種PCRRFLP的方法，可以在基因B、C流行區(qū)簡便快捷的篩選C1827VI變異體；3通過來自全國8省市的160份血清調(diào)查，發(fā)現(xiàn)在我國主要流行的B、C基因型中，C18271毒株成為主要病毒學背景，陽性率9812％157／160；4C1827VI四聚體染色慢性乙型肝炎外周血淋巴細胞結(jié)果提示在C18271病毒學背景下HLAA2患者外周血C1827I特異性淋巴細胞較C1827V特異性淋巴細胞頻數(shù)高0335±0479％VS0221±0392％，差異有統(tǒng)計學意義P00125經(jīng)過C1827V／I肽誘導后C1827V／I四聚體及CD8雙陽性細胞比誘導前明顯增殖210倍，其中C1827I誘導淋巴細胞增殖能力高于C1827V肽，并發(fā)現(xiàn)兩肽之間在誘導增殖方面存在明顯的交叉反應；6C1827VI肽分別誘導12例HLAA2陽性慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細胞并直接酶聯(lián)免疫斑點試驗檢測IFNΓ分泌，兩肽均未誘導出陽性斑點；7通過序列比對，我們設計了HBV基因B、C型覆蓋HBV全長的282條重疊多肽，每肽18個氨基酸，相鄰多肽重疊10個氨基酸；并設計了10個多肽POOL，每POOL包含2234條肽，分別區(qū)分兩種HBVB／C基因型，區(qū)分HBVX、C、S和P基因區(qū)；8將38例HBV感染者和10例健康獻血員分成HBEAG陰性慢性乙型肝炎組G112、HBEAG陽性慢性乙型肝炎組G211、急性肝衰竭組G35、肝硬化G48、急性HBV感染組G52、特殊HBV標志物組G64和健康對照組G76；G7組的斑點均數(shù)為2208±3924SFC，確定陽性POOL的CUTOFF10SFC；9酶聯(lián)免疫斑點試驗比較各組間G1G7斑點分布結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義X215277，P0018；在慢性HBV感染組G1G4中進行比較，組間各樣本總斑點數(shù)之間差異不顯著X265，P0088，但陽性POOL的數(shù)量差異顯著，有統(tǒng)計學意義X292，P0027；進一步比較G1、G2組間樣本的陽性POOL數(shù)，差異有統(tǒng)計學意義Z2345，P0019，陽性POOL病例數(shù)之間的差異也有統(tǒng)計學的意義X25856，P001610HBV感染各組G1G5中，有HBVDNA檢測結(jié)果的36例資料，分析ALT水平與淋巴細胞分泌IFNΓ總斑點均數(shù)呈正相關關系，經(jīng)非參數(shù)相關檢驗有統(tǒng)計學意義CC0352，P0030；LOGDNA與淋巴細胞分泌IFN?？偘唿c數(shù)有負相關趨勢，但經(jīng)非參數(shù)相關分析無統(tǒng)計學意義CC0114，P0495；11檢測發(fā)現(xiàn)HBV基因B型23例比基因C型9例患者有較高的特異性淋巴細胞總斑點數(shù)，差異有統(tǒng)計學意義Z2517，P0012；分別比較兩型問代表S基因區(qū)POOL總斑點數(shù)的SGENE和代表P基因區(qū)POOL總斑點數(shù)的PGENE差異有統(tǒng)計學意義Z2194，P0028；Z2479，P0013；而兩型間代表X基因區(qū)和C基因區(qū)的斑點數(shù)差異無統(tǒng)計學意義Z1635，P0102；Z0728，P0467；12發(fā)現(xiàn)前C變異和BCP變異陽性組在樣本總斑點數(shù)和代表C基因區(qū)的斑點數(shù)較對應的陰性組差異無統(tǒng)計學意義，C基因區(qū)的斑點數(shù)在變異組中有升高趨勢；結(jié)論1C1827I毒株是我國HBV感染者的主要病毒學背景；在此背景下，外周血C1827I的特異性淋巴細胞頻數(shù)和功能與C1827V特異性淋巴細胞存在差異，如果引用C1827V而不考慮病毒學背景可能出現(xiàn)一定的誤差；2HBV基因B型患者比基因C型患者有較高的T淋巴細胞特異性應答能力，這對于解釋HBV基因B型患者HBEAG血清自然轉(zhuǎn)陰率高于感染基因C型患者，以及基因B型較基因C型患者對抗病毒藥物有更好應答的現(xiàn)象提供了細胞免疫學的重要依據(jù)。

簡介：目的探索影響中國宮頸癌高發(fā)區(qū)宮頸癌發(fā)病的方要危險因素了解高危型人乳頭狀瘤病毒HPV的感染狀況研究其宮頸癌的關系并評價HPVDNA檢測在宮頸篩查中的應用價值方法對山西省襄垣縣1997名3525歲已婚婦女進行問卷調(diào)查內(nèi)容包括月經(jīng)婚孕、性行為及衛(wèi)生習慣等方面然后用能檢測13種高危HPV的第二代雜交捕獲試驗檢測婦女自己采集的陰道細胞和醫(yī)生采集的宮頸細胞中的HPVDNA用SAS統(tǒng)計軟件進行單變量和多變量的無條件LOGISTICL回歸分析以病理診斷為金標準用約登指數(shù)比較HPVDNA檢測與細胞學的篩查效果KAPPA系數(shù)衡量兩種標本HPVDNA檢測的符合度結(jié)論生殖道高危型HPV感染是當宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變流行的主要危險因素提示宮頸癌的防治重點應放在防止HPV感染、對HPV感染的篩查和密切監(jiān)測已感染高危型HPV的對象HPVDNA檢測是一種較實用的宮頸癌初篩手段尤其是自己取樣HPVDNA檢測

簡介：我國的中藥資源十分豐富，一些傳統(tǒng)的中藥方劑對慢性乙型肝炎具有肯定的療效，而且毒副作用輕，是有待開發(fā)的理想藥物，尤其是單味中藥。經(jīng)過多年臨床觀察、反復篩選、不斷優(yōu)化，本研究選用從赤芍中提取的赤芍總苷，擬將其開發(fā)為新一代的抗肝損傷和抗乙肝病毒的中藥新藥。1研究目的11采用D一氨基半乳糖DGALN和刀豆蛋白ACONA所致肝損傷的動物模型研究赤芍總苷的保肝降酶及抗氧化作用。12在體內(nèi)外觀察赤芍總苷抗乙肝病毒作用。2實驗步驟21赤芍總苷抗D氨基半乳糖DGALN所致的肝損傷作用。22赤芍總苷抗CONA所致的肝損傷作用。23赤芍總苷體內(nèi)抗鴨乙肝病毒的實驗研究。24赤芍總苷體外抗乙肝病毒的實驗研究。3實驗方法31NIH小鼠60只，隨機分5組，分別為正常對照組，模型組，赤芍總苷高劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組，赤芍總苷高劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組小鼠分別灌胃給藥，1次D，連續(xù)7D，末次給藥1H后，除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射DGALN800MGKG，16H后采血，檢測血清ALT、AST活性及超氧化物歧化酶SOD活性、丙二醛MDA含量，并觀察肝組織病理學變化。3250只NIH小鼠隨機分為5組，分別為正常對照組、模型組、赤芍總苷高劑量組20MGKG、赤芍總苷低劑量組10MGKG和聯(lián)苯雙酯治療組。除正常對照組外，其他組于實驗首日靜脈注射CONA20MGKG后，赤芍總苷高劑量組、低劑量組、聯(lián)苯雙酯組分別以20MGKG、10MGKG、150MGKG灌胃口服，每天1次，連續(xù)3D，末次給藥后4H，再次靜脈注射CONA20MGKG，8H后檢測血漿ALT、AST活性和TNFΑ含量，觀察肝組織病理學變化。33將先天感染鴨隨機分為4組，每組67只不等，分別為病毒對照組，ACV組，赤芍總苷高劑量組、赤芍總苷低劑量組。赤芍總苷以20MGKG、10MGKG灌胃ACV按100MGKG灌胃，共10天。對照組未做處理。分別于T、T、T、P各時間點采血，用斑點雜交法測定血清中DHBV的載量變化。34用2215細胞作為細胞模型，將赤芍總苷分為7個劑量組，上藥6D后用ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清中的HBEAG和HBSAG含量，并用MTT法測定藥物對細胞的毒性，計算赤芍總苷的治療指數(shù)。4實驗結(jié)果41赤芍總苷高劑量組能顯著降低DGALN所致小鼠肝損傷血清ALT、AST活性，提高肝組織勻漿SOD活性，降低MDA，明顯改善肝組織損傷的程度，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義P005；赤芍總苷高劑量組肝臟病理改變明顯減輕。43赤芍總苷高劑量組在給藥第L0D時血清DHBVDNA含量有顯著性下降P005；說明赤芍總苷在給藥第LOD在體內(nèi)有抑制DHBV作用，但是停藥后有反跳現(xiàn)象。44赤芍總苷作用于2215細胞株6D后，對2215細胞株的半數(shù)毒性濃度為017MGL，對HBSAG的半數(shù)抑制濃度為015MGL、對HBEAGI半數(shù)抑制濃度為006MGL；對HBSAG治療指數(shù)為112，對HBEAG治療指數(shù)為275。5結(jié)論51赤芍總苷對DGA1N誘導的小鼠肝損傷有保護作用，其作用機制可能與抗氧自由基的損傷有關。52赤芍總苷對CONA所致小鼠肝損傷具有較好的保護作用，抑制T淋巴細胞活化和TNFΑ的釋放是其主要的作用機制。53赤芍總苷具有體內(nèi)抗鴨乙肝病毒的作用，但在停用后DHBVDNA含量回升。54赤芍總苷在體外細胞培養(yǎng)中對HBSAG和HBEAG的分泌抑制作用分別為低效有毒和有效低毒。

簡介：點擊查看更多三種嗜神經(jīng)病毒的核酸檢測方法和初步流行病學研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：輪狀病毒（ROTAVIRUS，RV）屬于呼腸病毒科（REOVIRIDAE）輪狀病毒屬（ROTAVIRUS），是一個直徑約為70NM，無包膜，具有三層衣殼蛋白組成的正二十面體雙鏈RNA病毒。RV是引起哺乳類和鳥類及人類腹瀉的主要病原體，每年全球因RV感染所導致的重癥腹瀉而死亡的兒童約600000。RV基因組包含11個分節(jié)段的雙鏈RNA，編碼6個結(jié)構(gòu)蛋白（VP1VP4，VP6，VP7）和6個非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1NSP6）。根據(jù)結(jié)構(gòu)蛋白VP6的抗原性差異，可將已發(fā)現(xiàn)的輪狀病毒分為AG7個組，其中，A組為引起嬰幼兒腹瀉的主要病原。RVNSP1在病毒與宿主的相互作用中發(fā)揮著重要的功能。本研究運用基因克隆和重組表達技術(shù)在大腸桿菌中表達了RVTBCHEN株NSP1蛋白，進行了NSP1的免疫學性質(zhì)和RV感染細胞中NSP1蛋白的合成與分布以及NSP1的系統(tǒng)進化和基因分型研究。結(jié)果表明，大腸桿菌BL21（DE3）能高效表達重組NSP1蛋白（RNSP1），RNSP1表達量約占菌體總蛋白的344％。RNSP1能誘導免疫豚鼠產(chǎn)生特異性血清抗體。WESTERNBLOT及免疫熒光檢測結(jié)果表明，抗RNSP1血清抗體能特異性識別自身蛋白，對SA11，WA株的NSP1蛋白有交叉反應性免疫熒光結(jié)果還表明，SA11感染的MA104細胞中合成的NSP1蛋白在細胞質(zhì)中區(qū)域化聚集形成輻射狀排列的顆粒狀結(jié)構(gòu)，而WA株的NSP1不能形成此樣結(jié)構(gòu)。分子系統(tǒng)進化研究結(jié)果表明，至今發(fā)現(xiàn)的A組RV至少可以分為16個不同的NSP1基因型，TBCHEN株NSP1為A2型。不同NSP1基因型病毒具有獨特的敏感宿主范圍，同一NSP1基因型可能感染不同種動物，同一種動物也可能感染不同基因型。本研究結(jié)果為進一步研究NSP1蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能及其應用開發(fā)奠定了很好的基礎。

簡介：1背景和目的流感急性腦?。↖NFLUENZAACUTEENCEPHALOPATHY，IAE）是流感病毒感染的重要并發(fā)癥之一，患者在病毒感染后在呼吸道癥狀出現(xiàn)12天內(nèi)發(fā)生嚴重的神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)為快速發(fā)展的認知障礙、精神狀態(tài)改變、意識消退、昏迷等，嚴重時引起神經(jīng)后遺癥或死亡。目前，IAE的發(fā)病機制依然不明。在流感急性腦病病人的腦脊液CSF和血漿中，發(fā)現(xiàn)TNFΑ、IL1等促炎癥細胞因子的濃度升高。認為流感急性腦病可能是因機體在感染流感病毒后釋放促炎癥因子，進而誘導了細胞因子級聯(lián)反應，造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)CNS發(fā)生以促炎癥因子和趨化因子過度釋放為特征的細胞因子風暴（CYTOKINNESTM），引發(fā)神經(jīng)及免疫系統(tǒng)功能紊亂和CNS的免疫病理損傷13。我們前期研究發(fā)現(xiàn)流感病毒可以感染星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，并造成大量促炎細胞因子和趨化因子釋放。而由流感病毒感染膠質(zhì)細胞所釋放的大量細胞因子對正常膠質(zhì)細胞生物學功能有何影響尚未見報道。因此，本研究利用人流感病毒H1N1和H3N2感染小鼠星形膠質(zhì)細胞獲得條件上清，利用條件上清刺激正常星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，檢測相關促炎細胞因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平變化，及TNFΑIL6IL1Β的蛋白表達水平變化，為研究IAE所伴隨的細胞因子級聯(lián)放大及細胞因子風暴提供依據(jù)。2方法21APUERTORICO834H1N1和ASHANTOU6022006H3N2流感病毒株在MDCK細胞系中的增殖、保存及病毒滴度的測定。22原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)，利用間接免疫熒光法鑒定細胞純度。23不同亞型流感病毒株H1N1H3N2感染星型膠質(zhì)細胞MOI2，感染6H、24H后，收獲細胞上清液。24利用超濾分子截留技術(shù)截留分子量為300KD，對細胞上清液進行超濾，獲得條件上清液。25流感病毒血凝實驗檢測處理后的條件上清液中流感病毒顆粒。26CCK8法檢測條件上清液對原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，細胞活性的影響。27條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，24H后提取RNA，并反轉(zhuǎn)錄成CDNA。REALTIMEPCR法檢測促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6，趨化因子IP10、MCP1、MIP1轉(zhuǎn)錄水平的變化。28條件上清刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞，ELISA法檢測不同時間點細胞上清液中促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6的蛋白含量，WESTERNBLOTTING法檢測GFAP蛋白的表達情況。29條件上清液刺激原代BALBC小鼠小膠質(zhì)細胞，TRANSWELL法檢測小膠質(zhì)細胞遷移情況。3結(jié)果31通過間接免疫熒光鑒定，成功完成對原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)，細胞純度達95％以上。32利用空斑法檢測，H1N1和H3N2流感病毒滴度為1107PFUML。33通過血凝實驗檢測，條件上清液中無法檢測到流感病毒顆粒。34REALTIMEPCR結(jié)果表明，條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞24H后皆可誘導正常膠質(zhì)細胞的促炎癥因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生不同程度的上調(diào)。35CCK8檢測結(jié)果表明，條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞24H后，與對照組比較，刺激組細胞活性被抑制。36WESTERNBLOTTING法檢測結(jié)果表明，條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞后，GFAP蛋白表達水平發(fā)生上調(diào)。37ELISA法檢測結(jié)果表明，條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞后，促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6在不同時間點的蛋白表達水平發(fā)生不同程度改變總體呈下降趨勢。38TRANSWELL法檢測結(jié)果表明，條件上清刺激原代BALBC小鼠小膠質(zhì)細胞24H后，小膠質(zhì)細胞遷移率未發(fā)生上調(diào)。4結(jié)論41流感病毒感染星形膠質(zhì)細胞條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞后皆可誘導正常膠質(zhì)細胞的促炎癥因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生不同程度的上調(diào)，產(chǎn)生細胞因子級聯(lián)效應。42流感病毒感染星形膠質(zhì)細胞條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞后皆可抑制細胞活性。43流感病毒感染星形膠質(zhì)細胞條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞后，促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6的蛋白表達水平在不同時間點發(fā)生不同程度改變，總體呈下降趨勢。蛋白質(zhì)水平上，未能檢測出細胞因子級聯(lián)放大效應，可能與星形膠質(zhì)細胞促炎抗炎雙向細胞生物學功能有關

簡介：我國有9300萬慢性乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV感染人群慢性HBV感染可引起慢性乙型肝炎、肝硬化、肝衰竭和肝細胞癌我國每年死于HBV感染相關疾病的患者約35萬人。抗HBV治療是慢性乙型肝炎治療及阻斷其向肝硬化、肝衰竭和肝細胞癌發(fā)展的重要手段核苷酸類似物NUCLEOSTIDEANALOGSNAS是抗HBV治療的主要藥物但隨用藥時間的延長病毒的耐藥問題已成為臨床抗HBV治療的棘手問題。1998年上市的拉米夫定LAMVIUDINELAM在我國有長達13年的臨床抗HBV治療史超過120萬慢性乙型肝炎患者曾經(jīng)應用LAM進行抗病毒治療由于該藥服用方便、安全治療費用相對低等優(yōu)點目前仍有大量患者在服用該藥。HBV多聚酶缺乏校對活性因此在病毒復制過程中容易產(chǎn)生錯配產(chǎn)生大量序列多樣性的病毒株形成病毒準種。在藥物選擇壓力下對藥物適應性強的病毒變異株可演變?yōu)閮?yōu)勢株引起病毒耐藥。NAS的作用靶位在HBV多聚酶的逆轉(zhuǎn)錄酶REVERSETRANASERT區(qū)抑制病毒的復制。引起病毒耐藥的基因變異分為原發(fā)耐藥變異PRIMARYRESISTANCEMUTATION和補償變異COMPENSATYMUTATION前者直接引起病毒對藥物敏感性的下降主要是RTM204V和RTM204I又被稱為YMDD基序的YVDD和YIDD變異后者補償出現(xiàn)原發(fā)耐藥變異病毒株下降的病毒復制力主要是RTV173L和RTL180M常于RTM204V聯(lián)合出現(xiàn)RTL80I常于RTM204I聯(lián)合出現(xiàn)。HBV對LAM的耐藥發(fā)生率高單獨用LAM治療14年病毒耐藥變異發(fā)生率分別為17％、40、55和67。隨著用藥時間的延長用藥人群的不斷擴大以及在許多病例中的不合理用藥方式出現(xiàn)新的或潛在LAM耐藥HBV變異株的可能性在增加。除經(jīng)典的RTM204I和RTM204V變異外出現(xiàn)其他LAM耐藥相關變異的可能性也較大。近年LAM治療應答不佳或無應答的患者出現(xiàn)新的YSDD和YKDD變異株的臨床研究報道已引起學者的關注。因此在臨床抗病毒治療過程中除檢測經(jīng)典耐藥變異外發(fā)現(xiàn)與鑒定潛在HBV耐藥相關變異對于全面認識病毒耐藥與指導臨床合理調(diào)整抗HBV治療方案具有重要意義。目的研究臨床LAM長期治療失敗的慢乙肝患者HBVRT區(qū)YMDD基序新變異RTM204Q的病毒學特點鑒定其與LAM耐藥的相關性。方法1、從解放軍第三〇二醫(yī)院病毒性肝炎研究室完成的大樣本HBVRT基因測定序列中結(jié)合患者用藥、病毒學和生化應答等臨床信息篩選分析經(jīng)典耐藥變異以外的可能與LAM耐藥相關的潛在新的耐藥變異形式。2、在篩選出的10例檢出HBVYQDD變異的服用LAM患者中選取1例代表性接受LAM長期治療卻失敗的慢乙肝患者樣本PCR產(chǎn)物直接測序法檢出其耐藥變異形式為RTL180MRTM204IQ提取血清HBVDNA采用巢式PCR擴增HBV全長RT區(qū)基因PCR產(chǎn)物直接克隆到PGEMTEASY載體中隨機挑選40個克隆進行DNA序列測定并分析耐藥相關變異。3、采用定點突變方法將HBV11倍的PTRIEX載體下游的SPHI酶切位點封閉再用XHOISPHI雙酶切獲得改建后的PTRIEX11HBV載體。將XHOISPHI雙酶切后的RT片段與載體連接成含HBV11倍基因組長度的重組質(zhì)粒。4、將構(gòu)建的含野生株和變異株的重組質(zhì)粒經(jīng)FUGENEHD轉(zhuǎn)染人肝癌細胞系HEPG2細胞。轉(zhuǎn)染4小時后加入不同濃度的核苷酸類藥物隔天換藥藥物連續(xù)作用4天后收集細胞上清采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測不同藥物濃度下HBVDNA的復制水平分析變異株對藥物的敏感性。進行三次獨立重復實驗以便驗證。結(jié)果1、共有10例慢乙肝患者檢出YQDD變異進一步研究的這例典型病例在LAM治療1年后出現(xiàn)病毒學突破HBVDNA載量從陰性增加到188106IUML丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT從正常水平增加到126UL。對其HBVRT區(qū)分別進行直接測序與克隆測序顯示兩種檢測方法的結(jié)果一致在獲得的37個克隆中13個351為野生型11個297為RTM204Q變異型2個54為RTM204I變異型10個270為RTA181T變異型1個27為RTA181TRTM204Q變異型。2、定點突變成功改建PTRIEX11HBV載體獲得目的載體片段。XHOISPHI雙酶切HBVRT區(qū)五種變異的片段及改建的載體將兩者相連接。制備轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒。3、分別將構(gòu)建的11倍HBV野生型和RTM204Q相關變異的四種變異型重組載體轉(zhuǎn)染入HEPG2細胞檢測它們的復制力水平野生病毒株的復制力為600±0096106IUMLRTM204Q變異株、RTM204I變異株、RTA181T變異株和RTA181TRTM204Q變異株與野生株比較均有不同程度下降分別是野生株病毒復制力的8995、4628、5577和3444。4、在四種不同濃度的NAS藥物作用下評價RTM204IQ在體外細胞中表型耐藥特點。三次獨立重復表型耐藥實驗結(jié)果顯示RTM204Q和RTM204I變異株對阿德福韋ADV、恩替卡韋ETV和替諾福韋TDF敏感但對LAM出現(xiàn)不同程度的耐藥現(xiàn)象通過測定比較藥物的半數(shù)有效抑制濃度IC50RTM204Q、RTM204I株對LAM的敏感性較野生株分別下降了757倍和1395倍。結(jié)論1、在10例LAM用藥患者樣本的YMDD基序中檢出了與LAM耐藥高度相關的YQDD變異其中部分患者臨床表現(xiàn)出耐藥提示該變異與LAM治療和耐藥存在一定的關聯(lián)。2、病毒復制力測定表明RTM204Q變異病毒株的病毒復制力雖然較野生株有所下降但明顯高于經(jīng)典的RTM204ILAM耐藥病毒株。3、表型耐藥分析表明RTM204Q變異病毒株對LAM具有一定的抗藥性但程度低于RTM204I耐藥變異株RTM204Q和RTM204I變異株對ADV、ETV和TDF三種藥物均敏感。4、綜上結(jié)果表明RTM204Q是一種以往國內(nèi)外未見報道新的LAM耐藥相關變異RTM204Q變異株可以與經(jīng)典LAM耐藥變異株同時在LAM耐藥患者中出現(xiàn)。該研究更全面地認識HBV耐藥、幫助臨床合理治療LAM耐藥HBV感染提供了有價值的數(shù)據(jù)。

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