簡介：揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文ΒCATENIN干涉質(zhì)粒對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)影響的實驗研究姓名段曉春申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師武永康20090501揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文2獲得靶向抑制PCATENIN基因表達(dá)的干涉質(zhì)粒。經(jīng)酶切、測序鑒定。用脂質(zhì)體介導(dǎo)該干涉質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，通過逆轉(zhuǎn)錄PCR、WESTERNBLOTTING方法檢測PCATENIN基因MRNA、蛋白表達(dá)水平的表達(dá)情況，評價RNA干涉的效果。觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài)的變化，應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)初步評價轉(zhuǎn)染后對U251細(xì)胞的生物學(xué)影響。結(jié)果成功構(gòu)建針對靶向13CATENIN基因的PGPU6／GFP／NEOSHRNAPCATEMNRNA干涉質(zhì)粒，經(jīng)酶切、測序鑒定為目的質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251后BCATENIN干涉質(zhì)粒有效的抑制了膠質(zhì)瘤細(xì)胞中13CMEMN基因MRNA水平、蛋白水平的表達(dá)。通過細(xì)胞形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)48小時以后胞核內(nèi)出現(xiàn)一些空泡，隨時間增加細(xì)胞增殖變慢，死亡細(xì)胞逐漸增多，出現(xiàn)破碎、崩解等壞死表現(xiàn)，漂浮細(xì)胞及細(xì)胞周圍碎片增多，呈明顯的時間依賴性。MTT提示轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNAPEATENIN質(zhì)粒后細(xì)胞24小‘時、48小時和72小時后，各時間段轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNA13CATENIN質(zhì)粒組與空白對照組和陰性對照組相比明顯受到抑制P001。轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNAPCATENIN質(zhì)粒組U251細(xì)胞的增殖隨著作用時間的延長，抑制率逐漸升高，且在作用72小時時抑制率較高，另外空白對照組和陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。FCM檢測細(xì)胞凋亡顯示PGFP／NEOSHRNAPCATENIN質(zhì)粒72小時后的U25L細(xì)胞凋亡率與空白對照組和陰性質(zhì)粒對照組比較明顯增高，具有統(tǒng)計學(xué)意義PO01。FCM檢測細(xì)胞周期顯示轉(zhuǎn)染72小時后，轉(zhuǎn)染PGPU6／GFP／NEOSHRNA13CATENIN質(zhì)粒與空白對照組細(xì)胞周期變化差異有統(tǒng)計學(xué)意義PO05，細(xì)胞大多聚集在G0／G1期，而S期、G2／M期細(xì)胞數(shù)目顯著下降，處于DNA復(fù)制和活動的細(xì)胞數(shù)目減少，U251細(xì)胞增殖受到抑制。結(jié)論靶向13CATENIN基因的PGPU6／GFP／NEOSHRNA13一CATENINRNA干涉質(zhì)粒構(gòu)建成功，并可特異性的沉默PCMEMN基因的表達(dá)，初步證明了轉(zhuǎn)染13CATENIN干涉質(zhì)粒促進(jìn)了細(xì)胞凋亡，抑制了細(xì)胞分化和增殖。膠質(zhì)瘤惡性生長過程與WNT信號通路6CMEMN的激活有密切關(guān)系，13CATENIN是一個比較理想膠質(zhì)瘤分子生物學(xué)標(biāo)記和基

簡介：目的據(jù)已有文獻(xiàn)報道，無論在臨床實驗或糖尿病動物實驗都清楚顯示了血管新生能力下降和微血管功能受損，同時在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境對維持內(nèi)皮細(xì)胞完整性、促進(jìn)血管新生有重要作用的內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）數(shù)量和功能均有影響，使其數(shù)量減少且功能下降。而且糖尿病患者體內(nèi)高糖環(huán)境，能使還原性糖、醛基與各種蛋白質(zhì)N端游離氨基酸間添加聚合形成糖基化終末產(chǎn)物（AGES），這種被糖基化的變形蛋白質(zhì)是毛細(xì)血管基底膜增厚、毛細(xì)血管受損的標(biāo)志，也是導(dǎo)致糖尿病患者大血管及微血管并發(fā)癥的病因之一。在高糖環(huán)境中，除了大分子蛋白質(zhì)可發(fā)生糖化反應(yīng)外，參與細(xì)胞有絲分裂以及對EPC血管新生有重要促進(jìn)作用的成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF2）也能同還原糖發(fā)生非酶的共價結(jié)合，形成糖化成纖維細(xì)胞生長因子2（GFGF2），而這種糖基化作用可能是使EPC功能失調(diào)，進(jìn)而影響血管新生的重要原因。因此本實驗的研究目的在于，觀察外源性糖化成纖維細(xì)胞生長因子2（GFGF2）對大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）數(shù)量及體外生物學(xué)活性的影響，探討GFGF2對內(nèi)皮祖細(xì)胞血管新生的影響。方法1GFGF2的制備及檢測用PBS將FGF2配成濃度為10UGML的溶液，70℃凍存?zhèn)溆?。試驗前將FGF2同250MMOLL濃度的D果糖于37℃共同培養(yǎng)48H制備GFGF2，用蛋白指紋圖譜分析儀檢測其糖化情況。2骨髓EPC的分離、培養(yǎng)和鑒定取大鼠骨髓，加PBS等倍稀釋并混勻。沿管壁緩慢加入裝有大鼠淋巴細(xì)胞分離液（1083GML）的15ML離心管中。2000RMIN25MIN密度梯度離心后將中間的白霧層吸出并置入另一短管中，加入5倍以上體積的M199，以1500RMIN離心5MIN，洗滌細(xì)胞兩次。末次離心后，棄上清液，加入M199重懸細(xì)胞。以1106L的密度接種于加有M199完全培養(yǎng)液的預(yù)涂膠原的培養(yǎng)板中，置37℃、5CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3～4D后換液，將未貼壁細(xì)胞棄之。倒置相差顯微鏡連續(xù)觀察體外培養(yǎng)的EPC的形態(tài)、生長及增殖情況。將培養(yǎng)4D后的細(xì)胞分組，分別以FGF2（150NGML）、GFGF2（150NGML）以及空白組繼續(xù)干預(yù)培養(yǎng)3D。用免疫組織化學(xué)和免疫熒光染色作CD34、CD133、VEGFR2、ACLDL和UEA1檢測來鑒定EPC并計數(shù)。3EPC體外功能的測定胰酶消化培養(yǎng)7D的貼壁細(xì)胞，用血管生成試劑盒檢測其能力；收集7D的貼壁細(xì)胞作EPC黏附能力；用改良的BOYDEN小室作EPC遷移能力測定；MTT法測定EPC增殖能力；用放射性免疫法測定細(xì)胞的培養(yǎng)液GMCSF，EPO和IL8的含量。結(jié)果1經(jīng)蛋白指紋圖譜分析，重組FGF2分子質(zhì)量為162429DA。然后將其同果糖共同培育48小時后其分子量出現(xiàn)增加，最大為171867DA，將FGF2成功糖化成GFGF2。2骨髓來源的EPC在體外培養(yǎng)時呈梭形，貼壁生長，二者均表達(dá)CD34，CD133和VEGFR2表達(dá)，且能結(jié)合UEA1并攝取ACLDL，證明所培養(yǎng)細(xì)胞為內(nèi)皮祖細(xì)胞。且計數(shù)結(jié)果顯示GFGF2組數(shù)量較FGF2組數(shù)量減少，空白組EPC數(shù)量最少。3EPC體外功能測定表明GFGF2組骨髓EPC比FGF2組明顯的成血管能力降低，黏附能力降低，遷移能力降低，增殖能力減弱EPC分泌的EPO、GMCSF和IL8比對照組都減少。結(jié)論EPC在GFGF2的作用下數(shù)量減少，體外生物學(xué)活性降低，血管新生能力減弱，推測GFGF2可能是糖尿病患者體內(nèi)血管新生功能降低的原因之一。

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文谷胱甘肽乙酯和肌肽延緩糖尿病性白內(nèi)障的動物和細(xì)胞生物學(xué)研究姓名柴飛燕申請學(xué)位級別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師嚴(yán)宏20070401軍醫(yī)學(xué)碩學(xué)論第四大士位文2谷胱甘肽乙酯和肌肽延緩糖尿病性白內(nèi)障的動物和細(xì)胞生物學(xué)研究碩士研究生柴飛燕導(dǎo)師嚴(yán)宏教授（主任醫(yī)師）第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院眼科，西安710038摘要目的目的1建立大鼠糖尿病性白內(nèi)障動物模型，探討糖尿病大鼠晶狀體混濁的發(fā)生機制。2探討谷胱甘肽乙酯滴眼液（GLUTATHIONEETHYLESTER，GSHEE）對鏈脲佐菌素（STREPTOZOTOCIN，STZ）誘導(dǎo)的大鼠糖尿病性白內(nèi)障的作用及其機制。3初步探討肌肽（CARNOSINE，CAR）對高濃度葡萄糖（HIGHGLUCOSE，HG）誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的作用及其機制。方法方法對66只大鼠行裂隙燈檢查，排除晶狀體病變。隨機抽取10只大鼠作為正常對照組（A組），腹腔注射002MOLL枸櫞酸緩沖液（65MGKG，PH45）。56只大鼠完全隨機分為谷胱甘肽乙酯治療組（B組）和糖尿病未治療組（C組），腹腔注射1％鏈脲佐菌素（65MGKG）枸櫞酸緩沖液，血糖14MMOLL的大鼠作為糖尿病大鼠，注射STZ前5D正常組和糖尿病未治療組給予25MMOLL磷酸鈉緩沖液（PH74）、治療組大鼠給予01％谷胱甘肽乙酯磷酸鈉緩沖液，滴雙眼，2D。每4WK監(jiān)測大鼠血糖，每周監(jiān)測大鼠尿糖英國國際合作研究項目基金NO070667Z03國家教育部留學(xué)回國人員啟動基金HG2507陜西省科技攻關(guān)項目2004K16G72

簡介：點擊查看更多豬與人無細(xì)胞真皮生物學(xué)特性的比較研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一部分目的建立一種高效、簡便的體外擴增培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞的方法。方法取35例惡性腫瘤患者的外周血單個核細(xì)胞PBMCS，在GMP實驗室體系下，應(yīng)用OKM100及OKM200培養(yǎng)基，經(jīng)細(xì)胞刺激因子OKM24體外誘導(dǎo)擴增，觀察效應(yīng)細(xì)胞體外擴增培養(yǎng)周期、擴增前后細(xì)胞總數(shù)、擴增倍數(shù)以及細(xì)胞存活率，同時觀察細(xì)胞回輸患者后的不良反應(yīng)。結(jié)果細(xì)胞在培養(yǎng)的第2天即可觀察到效應(yīng)細(xì)胞增殖；細(xì)胞擴增培養(yǎng)周期為1346±120D；擴增培養(yǎng)前外周血分離所得的PBMCS細(xì)胞數(shù)為660±223106，擴增培養(yǎng)至細(xì)胞成熟收獲后所得的效應(yīng)細(xì)胞數(shù)為299±065109，擴增倍數(shù)為48806±19125；臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞存活率為9771±107％；內(nèi)毒素及細(xì)菌、真菌、支原體、外來病毒檢測均為陰性?；颊呋剌斝?yīng)細(xì)胞后無明顯的不良反應(yīng)。結(jié)論在本研究體系下體外誘導(dǎo)擴增培養(yǎng)腫瘤患者自體外周血致敏淋巴細(xì)胞效率較高，操作簡便，生物安全性良好。第二部分人外周血淋巴細(xì)胞體外擴增培養(yǎng)后淋巴細(xì)胞表型變化研究目的觀察35例惡性腫瘤病人外周血淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)擴增培養(yǎng)后細(xì)胞表型的變化。方法體外大規(guī)模誘導(dǎo)和擴增惡性腫瘤病人外周血淋巴細(xì)胞及單個核細(xì)胞，然后應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測定擴增前后CD3、CD19、CD28、CD25、CD29、CD45RA、CD45RO、HLADR、CD3CD4、CD3CD8、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD4CD25、CD4CD29、CD8CD28、CD8CD28、CD4CD45RA、CD8CD45RA、CD4CD45RO、CD8CD45RO，CD3HLADR，CD3HLADR，CD4HLADR，CD4HLADR、CD4HLADR、CD4HLADR細(xì)胞在淋巴細(xì)胞中所占百分比的變化。結(jié)果經(jīng)體外擴增培養(yǎng)后，CD3，CD3CD8，CIKCYTOKINEINDUCEDKILLERCELLS細(xì)胞及其亞型CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56，CD45RO細(xì)胞及其亞型CD8CD45RO，CD8CD28，CD25，CD29，CD3HLADR，CD8HLADR和CD8HLADR細(xì)胞比例較培養(yǎng)前明顯增加P＜001；而CD19，CD3CD4，NKNATURALKILLERCELLS細(xì)胞及其亞型CD3CD16CD56、CD3CD16CD56、CD3CD16CD56，CD45RA細(xì)胞及其亞型CD4CD45RA、CD8CD45RA，CD4CD45RO，CD28細(xì)胞及其亞型CD8CD28，CD4CD25，CD4CD29，CD4HLADR和CD4HLADR細(xì)胞比例則明顯的降低P＜001；HLADR細(xì)胞和CD3HLADR細(xì)胞培養(yǎng)前后細(xì)胞比例變化無統(tǒng)計學(xué)意義P值分別為0137和0423。結(jié)論經(jīng)體外擴增培養(yǎng)后，所得細(xì)胞主要是以CD3細(xì)胞為主，CD4T細(xì)胞比例明顯下降，CD8T細(xì)胞比例顯著增高，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞TREG細(xì)胞和CD19B細(xì)胞的比例極低，活化性T細(xì)胞的比例與培養(yǎng)前無顯著差異。在增多的CD8T細(xì)胞中，效應(yīng)性T細(xì)胞TE并未明顯增加，但記憶性T細(xì)胞TM卻顯著增多。NK細(xì)胞比例下降，但CIK細(xì)胞的比例卻明顯增多。從對培養(yǎng)后細(xì)胞表型的分析可知，理論上，培養(yǎng)后細(xì)胞不僅具有直接的殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，回輸患者體內(nèi)后經(jīng)抗原刺激后還具有活化為效應(yīng)細(xì)胞的能力。第三部分人外周血淋巴細(xì)胞體外擴增培養(yǎng)后效應(yīng)細(xì)胞生物方法①按照本課題第一部分中的方法體外擴增3例惡性腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞，收獲細(xì)胞后計算效應(yīng)細(xì)胞濃度，然后將效應(yīng)細(xì)胞分別放置于4℃和25℃下保存，于細(xì)胞收獲后的不同時間點應(yīng)用碘化丙啶PI對兩種存放條件下的細(xì)胞進(jìn)行染色并應(yīng)用流式細(xì)胞儀器檢測計算細(xì)胞存活率；②按照本課題第一部分中的方法體外擴增3例患者外周血淋巴細(xì)胞，按照本課題第二部分中的方法檢測擴增后細(xì)胞中NK細(xì)胞、CIK細(xì)胞的百分比，然后應(yīng)用MTT法檢測效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。結(jié)果①患者1效應(yīng)細(xì)胞初始存活率為988％，細(xì)胞濃度為74107ML，在4℃保存條件下其存活率明顯降低的時間點為102H，而在25℃保存條件下其存活率明顯下降的時間點為48H；患者2效應(yīng)細(xì)胞初始存活率為955％，細(xì)胞濃度為58107ML，在4℃保存條件下其存活率明顯下降的時間點為60H，在25℃保存條件下其存活率明顯降低的時間點為24H；患者3效應(yīng)細(xì)胞初始存活率為971％，細(xì)胞濃度104107ML，在4℃保存條件下其存活率明顯降低的時間點為84H，在25℃保存條件下其存活率明顯下降的時間點為24H。②患者1效應(yīng)細(xì)胞中NK細(xì)胞的百分比為24％，CIK細(xì)胞的百分比為539％，其121、251和501三個效靶比效應(yīng)細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別為649％、708％和834％；患者2效應(yīng)細(xì)胞中NK細(xì)胞的百分比為06％，CIK細(xì)胞的百分比為695％，其121、251和501三個效靶比效應(yīng)細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別為716％、751％和886％；患者3效應(yīng)細(xì)胞中NK細(xì)胞的百分比為116％，CIK細(xì)胞的百分比為417％，其121、251和501三個效靶比效應(yīng)細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別為629％、673％和748％。結(jié)論①4℃條件比25℃條件更適合與保存效應(yīng)細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞初始存活率低者以及細(xì)胞濃度較高者其細(xì)胞存活率下降的比較明顯；②效應(yīng)細(xì)胞具有較強的殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，且該活性與CIK細(xì)胞在效應(yīng)細(xì)胞中所占的百分比的呈正相關(guān)

簡介：博士學(xué)位論文學(xué)校代碼學(xué)號10023B2009393WTL基因表達(dá)對白血病細(xì)胞生物學(xué)特征的影響及相關(guān)機制研究所院血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所姓名李曉燕指導(dǎo)教師秘營昌教授導(dǎo)師小組王建祥王敏饒青教授學(xué)科專業(yè)內(nèi)科學(xué)血液病學(xué)研究方向白血病診療新策略完成時間2012年5月中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部博士學(xué)位論文中文摘要研究目的在不表達(dá)WTL基因的U937細(xì)胞中轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL基因，觀察U937細(xì)胞增殖、凋亡、周期、對藥物的反應(yīng)性及細(xì)胞遷移能力等生物學(xué)特性的改變，進(jìn)一步探究WTL基因在白血病中的作用及相關(guān)機制。研究方法采用PCR方法從質(zhì)粒載體PCMVCB6WT1B17AA／KTS、PCMVCB6WTLD17AA／KTS擴增目的片段WTLB17AA／KTS和WTL一D17AA／KTS，連接到PCDHLMCSLEFLCOPGFP慢病毒載體上，采用磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝病毒，感染U937細(xì)胞，流式分選GFP陽性細(xì)胞，篩選出穩(wěn)定表達(dá)WTL基因的單克隆細(xì)胞，RTPCR及WESTERNBLOT方法鑒定WTL基因及蛋白的表達(dá)隨后檢測轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL基因后U937細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。采用MTT方法檢測細(xì)胞的增殖活性和姜黃素對單克隆細(xì)胞的抑制率。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測單克隆細(xì)胞加入姜黃素后細(xì)胞周期和凋亡的改變。采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)基觀察各單克隆細(xì)胞集落形成能力的差別。應(yīng)用TRANSWELL遷移實驗觀察各單克隆細(xì)胞遷移能力的差別。同時采用基因表達(dá)譜芯片檢測分析WTL表達(dá)引起功能相關(guān)的基因改變和涉及的信號通路，并用定量RTPCR驗證基因表達(dá)的可信性。結(jié)果WTIKTS和WTLKTS沒有明顯改變U937細(xì)胞的增殖活性P005，但降低了對姜黃素的敏感性、能對抗姜黃素引起的U937細(xì)胞凋亡P均O05。雖然WTIKTS和WTLKTS沒有明顯改變細(xì)胞周期，但加姜黃素處理后，空載體與轉(zhuǎn)導(dǎo)WTL細(xì)胞的周期改變有顯著性差異P005?；蛐酒治鼋Y(jié)果顯示，WTIKTS己3起的顯著性差異基因涉及細(xì)胞增殖、凋亡、粘附遷移、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等功能，差異基因參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要有JAKSTAT途徑、趨化因子信號途徑、MAPK信號途徑、MTOR信號途徑、ERBB信號途徑等。而WTLKTS引起的顯著性差異基因則明顯少于WTI一KTS，主要涉及細(xì)胞生長、凋亡、代謝過程等。結(jié)論不同的WTL異構(gòu)體在白血病發(fā)生中的作用不全相同。WTL一KTS抑制U937細(xì)胞凋亡，降低U937細(xì)胞對化療藥物的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞遷移及集落形成，可能與激活JAKSTAT途徑、趨化因子信號途徑、MAPK信號途徑、MTOR信號途徑等有關(guān)。WTLKTS對靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性可能弱于WTL一KTS，僅表現(xiàn)出抗凋亡和降低對藥物敏感性的作用。關(guān)鍵詞白血病；WTL基因；轉(zhuǎn)染；基因芯片

簡介：細(xì)胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子E2F1是E2F家族中第一個被克隆出來的蛋白對細(xì)胞的增殖、分化和凋亡都發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。E2F1參與了細(xì)胞周期從G1期到S期的轉(zhuǎn)換在細(xì)胞周期G1期前RB與E2F1結(jié)合限制了其活性當(dāng)細(xì)胞周期蛋白激酶CDK結(jié)合蛋白RB后磷酸化的RB釋放E2F1DP1復(fù)合物這樣E2F1DP1就結(jié)合到基因組上發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能激活下游基因進(jìn)而使細(xì)胞周期從G1期轉(zhuǎn)換到S期。同時E2F1還發(fā)揮促凋亡功能通過P53依賴型以及P53非依賴型兩種細(xì)胞信號通路進(jìn)而激活下游促凋亡蛋白如BCL2HOMOLOGY3BH3ONLYPROTEINSPUMANOXABIMHRKDP5BIK以及CASPASE39等此外E2F1還抑制細(xì)胞存活信號通路分子如NFΚBMCL1等。通過E2F1這兩方面的作用最終帶來細(xì)胞的凋亡。因此轉(zhuǎn)錄因子E2F1與腫瘤的治療有很密切的關(guān)系以E2F1作為腫瘤藥物靶點的研究顯得尤為重要。由于轉(zhuǎn)錄因子E2F1在細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用為了研究E2F1對其下游基因的調(diào)控本論文利用穩(wěn)定表達(dá)ERE2F1即雌激素受體與E2F1的融合蛋白的H1299細(xì)胞株進(jìn)行研究。該細(xì)胞株能夠穩(wěn)定表達(dá)大量融合蛋白ERE2F1這樣細(xì)胞內(nèi)這些融合蛋白就會與細(xì)胞膜上的大量配體相結(jié)合從而將ERE2F1固定在細(xì)胞核之外。當(dāng)加入雌激素受體抑制劑4OHT處理一段時間后ERE2F1與細(xì)胞膜上的配體的結(jié)合就會被打斷大量的ERE2F1就會進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮E2F1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。本論文首先是建立并通過G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)HAERE2F1融合蛋白的H1299細(xì)胞株其次在雌激素受體抑制劑4OHT處理的情況下通過WESTERNBLOT技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)E2F1能夠在蛋白水平上激活下游蛋白DP1和BRAF再次用細(xì)胞株H1299和HELA在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HAE2F1的情況下通過WESTERNBLOT技術(shù)和免疫熒光染色技術(shù)分別證實E2F1在蛋白水平上激活下游蛋白DP1和BRAF最后利用H1299細(xì)胞株在瞬時轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HAE2F1的情況下通過RTPCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)E2F1在轉(zhuǎn)錄水平上激活DP1在本論文所建立的E2F1對其下游基因調(diào)控的穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)中融合蛋白ERE2F1在細(xì)胞內(nèi)是大量表達(dá)的我們只是通過雌激素受體抑制劑4OHT來改變該蛋白的細(xì)胞空間定位進(jìn)而在人為可控的情況下來研究E2F1對其下游基因的調(diào)控。我們的結(jié)果第一次揭示了E2F1蛋白與其下游蛋白DP1之間的關(guān)系這對于研究E2F1DP1異二聚體的形成與功能具有重要意義同時本論文所揭示的E2F1蛋白與BRAF蛋白的關(guān)系對于探討E2F1與細(xì)胞周期以及細(xì)胞腫瘤的關(guān)系具有一定的積極意義。

簡介：分類號密級公開國際十進(jìn)分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文血小板裂解液（血小板裂解液（PLATELETLYSATE，PL）對牙源性）對牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響陳博培養(yǎng)類別學(xué)歷研究生申請學(xué)位類型學(xué)術(shù)學(xué)位學(xué)科領(lǐng)域?qū)I(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師余擎教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位口腔醫(yī)學(xué)院牙體牙髓病科二O一二年五月血小板裂解液（血小板裂解液（PLATELETLYSATE，PL）對牙源性）對牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)影響研究生陳博學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院牙體科導(dǎo)師余擎教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)老師王捍國副教授資助基金項目資助基金項目國家自然科學(xué)基金資助項目（編號81170948；31170912）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞血小板裂解液；牙源性干細(xì)胞；細(xì)胞增殖；細(xì)胞分化；組織再生；HATCP支架材料中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2012年5月

簡介：內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文SRC抑制劑對人胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名于虹申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師馬秀梅20100501OTHEEFFECTOFTHEINHIBITOROFSRCONTHEBIOLOGICALBEHAVIOURSOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLSABSTRACTOBJECTIVESRCISTHEFIRSTDISCOVEREDHUMANONCOGENE，WHICHHAVETYROSINEKINASEACTIVITYITSCLINICALVALUEHASATTRACTEDAWIDESPREADATTENTIONINTHISSTUDY，WEINVESTIGATEDTHEEFFECTOFTHEINHIBITOROFSRCPP2ONTHEGROWTH，MOTILITY，INVASIONANDANGIOGENESISOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINESGC一7901METHODSSTABLEEXPRESSIONOFSRCANDPSREPROTEINSWASCONFIRMEDBYWESTERNBLOTANALYSISSRCANDPSRCPROTEINEXPRESSIONWERETESTEDBYIMMUNOHISTOCHEMISTRY；WEMEASUREDEFFECTOFPP2ONPROLIFERATIONPSREPROTEINEXPRESSIONOFHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINESGC7901BYWESTERNBLOT；MTTWASUSEDTOEVALUATECELLPROLIFERATIONTUMORINVASIONWASEXAMINEDBYTRANSWEUMETHOD，ANDTUMORCELLMIGRATIONBYWOUND一HEALINGMETHODRESULTSIMMUNOHISTOCHEMISTRYREVEALEDTHATSREANDPSRCWEREEXPRESSEDINTHEEYTOSOLINTHEHUMANGASTRICCARCINOMACELLSWESTERNBLOTANALYSISSHOWEDTHAT5／￡MOL／LPP2HADMARKEDINHIBITORYEFFECTONP。SRCEX。PRESSIONINTHEHUMANGASTRICCARCINOMACELLLINESGC一7901WHENHUMANGASTRICCARD‘NOMASCZ7901WREREEUKUREDWITHPP2FOR12HOUR，THERESULTSHOWEDTHATPP2COULDNOTIMPACTONCELLPROLIFERATIONAT0TANOL／LO33022，5／TMOL／L033021AND10刪L033102P005，WHILE15PMOL／L363102COULDINHIBITCELLPROLIFERATMP005；INTHEMEMBRARLCEINVASIONCULTURESYSTEMTRANSWELLCHAMBER，SUPPRESSIONSWERENOTEDAFTERPRETREATMENTSWITHPP25／MAOL／LAND10／JMOL／L，THISEFFECTCANBEENHANCEBYTHECONCENTRATIONGRADUALLYINCREASED，THEMIGRATIONDISTANCEWAS392O13TAN，254016TANAND156012TANAT0VMOL／L，5PMOL／LAND10PMOL／L，RESPECTIVELYTHEREWEREMORECELLSINVADINGTHROUGHTHEMATRIGDIN5PMOL／LAND10刪LGROUPTHANTHATIN0／上MOL／LGROUPINACONCENTRATIONDEPENDENTMANNER321672839AND256002984VS496673464，P005ANGIOGENESISINVITROASSAY

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文靶向HPSE的RNA干擾對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實驗研究姓名胡君申請學(xué)位級別碩士專業(yè)外科學(xué)（普外科）指導(dǎo)教師胡浩20090401靶向HPSE的RNA干擾對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實驗研究英文摘要RESEARCHESONTHEEFFECTOFRNAITARGETINGHPSEONTHEBIOLOGICALACTIVITYOFTHEHUMANCOLORECTALCARCINOMACELLABSTRACTOBJECTIVETOOBSERVETHEHPSEEXPRESSIONAFTERTRANSIENTLYTRANSFECTINGHUMANCOLORECTALCARCINOMACELLHT29USINGSIRNA，TOAPPROACHTHEEFFECTOFRNAITARGETINGHPSEONTHEPROLIFERATION、INVASIONANDMETASTASISOFCOLORECTALCARCINOMACELLMETHODSTHEHEPARANASEMRNATARGETEDDOUBLESTANDEDSIRNAWASDESIGNEDWITHTHEBIOINFORMATICSTECHNOLOGYFOR72HOURSAFTERTRANSFECTINGHT29CELLSWITHSPECIFICANTIHPSESIRNAORNCFAMSIRNA，MTTMETHODWASUSEDTODETECTTHEPROLIFERATIONOFTHECELLSEVERYDAYINTHREEDAYSAFTERTRANSFECTIONTHELEVELOFHPSEMRNAINTHECELLSWASMEASUREDBYREALTIMEPCRIMMUNNOHISTOCHEMISTRYWASTAKENTODETECTTHEEXPRESSIONOFHPSEPROTEIN，THEINVASIVENESSOFHT29CELLINVITROWASMEASUREDQUANTITATIVELYBYTHEINVASIONTESTOFTRANSWELLCHAMBERRESULTSCOMPAREDWITHCONTROLGROUPS，CELLPROLIFERATIONOFSIRNAGROUPWASOBVIOUSLYSUPPRESSEDPO05CONCLUSIONS1SILENCINGHPSECOULDEFFECTIVELYINHIBITTHEPROLIFERATIONANDINVASIONOFHUMANCOLORCCTALCARCINOMA2SILENCINGHPSE，THECHANGESOFTHECELL’SBIOLOGICALACTIVITYARECORRELATEDWITHTHEDOWNREGULATIONOFLEVELOFHPSEMRNAANDPROTEINKEYWORDSHPSE；RNAINTERFERENCERNAI；COLOTECTALCANCER；CELLINVASION。WRITTENBYHUJUNSUPERVISEDBYHUHAOLL

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文硫氧還蛋白1的生物學(xué)功能研究對肝癌細(xì)胞HEPG2和炎性細(xì)胞U937的影響姓名唐文心申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師陳正望20090705華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文酸序列的第100位蘇氨酸（THRT）突變?yōu)樘於０罚ˋSNN），構(gòu)建了兩種真核表達(dá)載體PCDNATRX和PCDNAMUTRX，并分別建立了穩(wěn)定表達(dá)TRX1和MUTRX1的HEPG2細(xì)胞系。用不同抗癌藥刺激轉(zhuǎn)染細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染MUTRX1的細(xì)胞對藥物的敏感性增強了，更容易發(fā)生凋亡。同時發(fā)現(xiàn)MUTR1分子結(jié)合ASK1（凋亡信號激酶1）的能力下降了。這表明TRX蛋白分子100位的“T”的磷酸化有利于其發(fā)揮抗凋亡的生物活性，其可能的機制是T100的磷酸化有助于TRX1和ASK1的結(jié)合。這對于開發(fā)針對TRX磷酸化的抗腫瘤藥物提供了新的思路。隨著炎癌鏈概念的提出，TRX1也開始因其在各種炎癥或應(yīng)激疾病以及在炎癥通路中的作用而受到關(guān)注。而一種新的多功能炎性蛋白DTAIF1被發(fā)現(xiàn)于Ⅰ型糖尿病自身免疫反應(yīng)的胰腺炎組織和慢性移植排斥反應(yīng)的同種大鼠異體移植的心臟中，能促進(jìn)多種炎癥細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖、遷移和分泌。為探討TRX1與DTAIF1的相互調(diào)節(jié)關(guān)系，我們進(jìn)行了如下研究將重組質(zhì)粒PCDNAAIF1轉(zhuǎn)染人單核白血病細(xì)胞株U937，與對照組相比，發(fā)現(xiàn)DTAIF1水平的升高，但并不影響細(xì)胞內(nèi)TRX1的水平。而外源添加DTAIF1卻能顯著提高胞內(nèi)TRX1水平。將兩個重組質(zhì)粒PCDNATRX和PCDNANLSTRX分別轉(zhuǎn)染人細(xì)胞株U937，均能顯著提高細(xì)胞內(nèi)DTAIF1的蛋白水平及細(xì)胞的DTAIF1的分泌；同時發(fā)現(xiàn)，胞質(zhì)中TRX1對DTAIF1的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有影響，而細(xì)胞核內(nèi)的TRX1則可以使DTAIF1的MRNA水平顯著提高。這說明不同的亞細(xì)胞定位的TRX1對DTAIF1的調(diào)控方式是有差異的胞質(zhì)中的TRX1在翻譯水平正調(diào)控DTAIF1，而TRX1入核后在轉(zhuǎn)錄水平對DTAIF1進(jìn)行正調(diào)控。以上研究結(jié)果表明，細(xì)胞內(nèi)的TRX1促進(jìn)了DTAIF1的表達(dá)和分泌，而分泌到細(xì)胞外的DTAIF1則反過來促進(jìn)了TRX在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。因此本文提出了TRX1和DTAIF1的調(diào)控是互動模式的。上述結(jié)果有利于進(jìn)一步深入研究DTAIF1在心血管疾病的形成和器官移植中炎癥發(fā)生的機理。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞硫氧還蛋白1蛋白磷酸化大炎肽同種異體炎癥因子1肝癌炎癥細(xì)胞增殖細(xì)胞凋亡II

簡介：密級一博士學(xué)位論文TCADHERIN在胃癌中的表達(dá)以及對人胃癌細(xì)胞株HGC．2“／生物學(xué)性狀的影響作者姓名學(xué)科專業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師唐亞萍臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)湘雅二醫(yī)院霍繼榮教授論文答辯日期翌生§盟答辯委員會主中南大學(xué)二0一二年五月蘭一原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文巾特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果T也0；包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我批同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名盎垡日期三∑年￡月型F1學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位淪文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閿學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。作者簽名鰱聊簽名疊耋玉隰韭年翻丑日

簡介：1810850學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，南本人獨J●完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。兒發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。／簟曩≯‘、薌。一，‘“‘。研究牛簽名蘅侗氟導(dǎo)師簽章疊彥二級學(xué)流毒毒J7IIJ加／D年多月7。罔，P∥河北醫(yī)科大學(xué)’研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名鴦伺敷導(dǎo)師簽蚴口F口年多月日目錄中文摘要L英文摘要3引言6第一部分食管鱗狀細(xì)胞癌組織中ID一1的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系探討前言”7剛舌”7材料與方法8結(jié)果16附圖18附表23討論27／J、結(jié)31參考文獻(xiàn)33第二部分羥基喜樹堿對食管癌細(xì)胞株遷移與趨化運動能力的影響以及調(diào)節(jié)ID一1表達(dá)的作用機制前言一34日LJ舌一34材料與方法35結(jié)果”37附L蟄39附表42討論43爿、結(jié)45參考文獻(xiàn)46綜述ID蛋白在腫瘤發(fā)生中的研究進(jìn)展47參考文獻(xiàn)54致謝58個人簡歷59

簡介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELL，MSCS是來源于發(fā)育中胚層的一類多能干細(xì)胞，具有自我更新及多向分化潛能，它在特定誘導(dǎo)條件下可分化為多種類型的組織細(xì)胞，可形成骨、軟骨、脂肪、心肌等多種組織。最初MSCS來源于骨髓，由于人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSCS在骨髓中含量極少，一般僅為骨髓細(xì)胞量的001％0001％，且取材較難，近年來已成功從胎盤、臍血、密致骨、脂肪、肌肉等多種組織中分離，而原被作為“廢棄物”丟棄的胎盤，取材相對容易。本文旨在從成熟胎盤中獲得胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞PLACENTADERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，PMSCS，，并研究比較了PMSCS與BMSCS的免疫生物學(xué)特性。近年的研究表明，MSCS除能支持體外造血、促進(jìn)體內(nèi)造血重建，還具有低免疫原性和免疫調(diào)節(jié)作用抑制同種異體免疫排斥反應(yīng)，在異基因干細(xì)胞移植時能降低宿主抗移植物反應(yīng)HVGR和移植物抗宿主反應(yīng)GVHD、可延長移植物生存時間，提高移植成功率，是一種較為理想的組織工程種子細(xì)胞，但具體的免疫調(diào)節(jié)的機制尚未完全闡明。研究表明，人PMSCS對T細(xì)胞活化、增殖有抑制作用?，F(xiàn)有實驗表明人PMSCS不表達(dá)HLADR，PMSCS具有低免疫原性，而對于胎盤源MSCS免疫調(diào)節(jié)作用的報道較少。本實驗從人胎盤中分離獲取MSCS并對其生物學(xué)特性與BMSCS進(jìn)一步比較，并觀察了高表達(dá)負(fù)性協(xié)同刺激分子PDL1的PMSCS在體外對T細(xì)胞周期和活化、對細(xì)胞因子的分泌等方面的調(diào)節(jié)作用，為臨床應(yīng)用和基礎(chǔ)研究提供實驗的理論依據(jù)。第一部分人胎盤源與人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離及生物學(xué)特性的比較目的比較人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞HPMSCS與人骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞HBMSCS的體外分離的方法及兩種細(xì)胞生物學(xué)特性。方法采取酶消化法分離人胎盤組織，用密度梯度離心法分離骨髓單個核細(xì)胞，分別進(jìn)行貼壁分離和傳代培養(yǎng)，通過倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志的表達(dá)做比較性分析。并在誘導(dǎo)劑作用下進(jìn)行細(xì)胞分化實驗、鑒定干細(xì)胞，并用PHA刺激的T細(xì)胞與PMSCS或BMSCS共培養(yǎng)，觀察T細(xì)胞與兩者的相互作用。結(jié)果1兩種來源的間充質(zhì)干細(xì)胞均貼壁生長、呈成纖維細(xì)胞樣形態(tài)、表達(dá)CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106、CD166，但不表達(dá)CD34、CD45、HLADR分子；2兩種來源的間充質(zhì)干細(xì)胞均能在體外向成脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化，3；兩種來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在體外對T細(xì)胞的活化增殖有明顯的抑制作用。結(jié)論人PMSCS與人BMSCS具有相似的細(xì)胞體外生物學(xué)特性、表型和多向分化的潛能及其負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用，是一種較為理想的組織工程種子細(xì)胞。第二部分負(fù)性協(xié)同刺激分子PDL1在人胎盤源MSCS的表達(dá)及其負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用目的探討人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞PMSCS對負(fù)性協(xié)同刺激分子PDL1的表達(dá)以及對T細(xì)胞體外的負(fù)性協(xié)同作用。方法用體外擴增三代后的PMSCS和HBMSCS，采用流式細(xì)胞儀和免疫熒光方法來分析兩種細(xì)胞上協(xié)同刺激分子的表達(dá)情況，3HTDR摻入法檢測PMSCS對PHA刺激后的T細(xì)胞增殖的影響以及PDL1單克隆抗體部分阻斷PMSCS抑制T細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)分析PMSCS對PHA作用下T細(xì)胞周期和早期活化分子CD69表達(dá)的影響，ELISA法檢測細(xì)胞因子水平，以及阻斷PDL1作用后的變化。結(jié)果1人PMSCS和HBMSCS均不表達(dá)CD80、CD83、CD86等正性協(xié)同刺激分子，而PMSCS高表達(dá)PDL1，HBMSCS則低水平表達(dá)PDL1。2PMSCS可抑制T細(xì)胞體外增殖，并使PHA刺激下的T細(xì)胞滯留于細(xì)胞周期的G0G1期，下調(diào)活化T細(xì)胞早期表面分子CD69的表達(dá)，以及調(diào)節(jié)IL2、IFNΓ、IL10的分泌。由此表明，PMSCS介導(dǎo)的負(fù)性免疫調(diào)節(jié)作用部分是通過高表達(dá)PDL1分子，PDL1是PMSCS表達(dá)的主要負(fù)性免疫調(diào)節(jié)分子。結(jié)論人PMSCS在體外具有T細(xì)胞活化和增殖的抑制作用，其表達(dá)的PDL1分子介導(dǎo)重要的免疫調(diào)節(jié)作用。

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