簡介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文LRRC4負(fù)性調(diào)控SDF1ΑCXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERK12和AKT通路抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的侵襲姓名陳瓊申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李桂源20070501陳瓊碩士學(xué)位論文摘要125NM誘導(dǎo)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞與基質(zhì)粘附無影響，卻抑制瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的粘附。因此，LRRC4通過下調(diào)SDF一1Q／CXCR4生物學(xué)軸抑制腦膠質(zhì)瘤的運動和侵襲。LRRC4負(fù)性調(diào)控SDF1Ⅱ／CXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERKL／2和AKT信號通路，并通過這兩條通路調(diào)節(jié)MMP一2活性】用外源性SDF1Q125NM處理U251細(xì)胞，分別作用0MIN，5MIN，10MIN，15MIN，30MIN，發(fā)現(xiàn)SDF一1Q可以使U251細(xì)胞中ERKL／2以及AKT磷酸化水平明顯增高，且呈時間依賴性，15MIN表達達高峰。LRRC4可以有效抑制ERKL／2以及AKT的磷酸化。ERK通路抑制劑PD98059以及AKT通路抑制劑LY294002能明顯抑制ERKL／2以及AKT的活化陽性對照。因此，LRRC4能負(fù)性調(diào)控SDF1A／CXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERKL／2，AKT信號通路?；|(zhì)金屬蛋白酶MMPS在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成過程中起了很重要的作用。研究表明，一些信號通路如，P38MAPK，NFLCB，PKC，PI一3K激酶及RAF／ERK，JAK／STATS通過調(diào)節(jié)MMP一2、MMP～9的分泌來影響腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移特性。本研究發(fā)現(xiàn)SDF一1Q可以增強U251細(xì)胞MMP2酶活性，LRRC4明顯的抑制了SDF一1Q誘導(dǎo)的MMP2的酶活性增加。ERK通路抑制劑PD98059和AKT通路抑制劑LY294002處理均可抑制SDF一1Ⅱ誘導(dǎo)的MMP2的酶活性增加陽性對照。因此，LRRC4能夠通過SDF_1Q／CXCR4生物學(xué)軸介導(dǎo)的ERKL／2和AKT通路抑制MMP一2的酶活性。但對刪P一9的酶活性無影響。LRRC4誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞向星形膠質(zhì)樣細(xì)胞分化】與對照組細(xì)胞相比細(xì)胞呈梭形，基本無突起，LRRC4轉(zhuǎn)染后的U251細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，細(xì)胞胞體縮小，呈圓形，突起明顯延長，呈星形膠質(zhì)樣細(xì)胞特點。GFAP一直被視為星形細(xì)胞特異性標(biāo)記物，與腦膠質(zhì)瘤分化程度呈正相關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)LRRC4轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞后，6FAP表達明顯IL

簡介：正常細(xì)胞在體外培養(yǎng)時生命期是有限的，細(xì)胞增殖一段時間后會出現(xiàn)群體生長緩慢，有絲分裂停滯，進而衰老死亡，這種現(xiàn)象叫做復(fù)制衰亡REPLICATIVESENESCENCE。細(xì)胞的這種生物學(xué)現(xiàn)象導(dǎo)致一些體外培養(yǎng)的細(xì)胞因生長增殖能力衰竭、數(shù)量不足而不能充分滿足實驗研究和臨床運用的要求。后來人們觀察到一些腫瘤細(xì)胞具有持續(xù)生長和增殖的能力，可長期傳代，即細(xì)胞的永生化IMMTALIZATION。進一步研究發(fā)現(xiàn)部分永生化的腫瘤細(xì)胞中含有病毒基因VIRUSGENE，因此通過轉(zhuǎn)染技術(shù)將病毒基因?qū)氩⒄显隗w外培養(yǎng)的正常細(xì)胞基因組上，使其出現(xiàn)永生化就成為了細(xì)胞實驗研究的熱門。猿猴病毒40SIMIANVIRUS40，SV40是60年代初發(fā)現(xiàn)和分離的猴腎細(xì)胞病毒，人是其自然宿主。SV40的基因組能編碼TLARGET和TSMALLT抗原。T抗原具有ATP酶和DNA解旋酶活性，使蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸殘基磷酸化、ADP核糖基化和己?；抗原還有活化宿主細(xì)胞核糖體基因、誘導(dǎo)DNA合成、修飾蛋白質(zhì)合成起始因子等作用。T抗原能反式激活RNA多聚酶基因的啟動子，以及CMYC和CFOS癌基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞質(zhì)肌動蛋白缺失和細(xì)胞粘附性下降。T抗原為細(xì)胞轉(zhuǎn)化啟動所必需的，對轉(zhuǎn)化起決定作用，而且轉(zhuǎn)化細(xì)胞表型的維持必須要T抗原的連續(xù)表達。T抗原對細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是非必需的，但可起加強作用，兩者共同維持轉(zhuǎn)化表型。因此SV40T抗原基因被廣泛運用于誘導(dǎo)人類和動物細(xì)胞的永生化。SV40T抗原引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化是一個復(fù)雜的過程，目前仍不完全清楚其機制。一些研究發(fā)現(xiàn)SV40T抗原能與腫瘤抑制因子PRB和P53相互作用，影響它們調(diào)控正常細(xì)胞生長周期和細(xì)胞凋亡的功能，也有研究認(rèn)為SV40T抗原基因可通過調(diào)節(jié)端粒酶的活性使細(xì)胞的端粒長度得到維持。細(xì)胞的永生化被認(rèn)為可能是向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的必經(jīng)階段，因其安全性受到質(zhì)疑制約了轉(zhuǎn)化細(xì)胞運用于臨床的前景。我科前期實驗利用位點特異性重組酶CRELOXP系統(tǒng)聯(lián)合SV40T抗原基因成功構(gòu)建了可逆性永生化黑素細(xì)胞REVERSIBLEIMMTALIZEDMELANOCYTES，RIMC。其基本原理是利用基因打靶技術(shù)，引入CRELOXP系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有高度保守性和特異性，可準(zhǔn)確的根據(jù)LOXP位置切除整合在細(xì)胞基因組的外源性SV40T抗原基因。實驗研究發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞S100、HMB45等細(xì)胞表型未發(fā)生改變，而且軟瓊脂克隆實驗和裸鼠移植實驗也未觀察到致瘤性。為進一步了解SV40T抗原基因?qū)φT導(dǎo)的RIMC生物學(xué)性狀和功能，特別是潛在致瘤性的影響，我們對培養(yǎng)至第15代的IMCIMMTALIZEDMELANOCYTES，IMC進行染色體分析，免疫組織化學(xué)方法檢測HLADR和HTERT蛋白的表達，RTIPCR檢測HTERTMRNA表達；對第20代細(xì)胞進行MTT比色法分析細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和DNA倍體；RTPCR半定量分析細(xì)胞HMLH1、HMSH2錯配修復(fù)基因表達；并提取細(xì)胞基因組，對1P22D1S187、5Q14D5S107、18Q122123D18S34三個位點PCR產(chǎn)物進行變性聚丙烯酰胺電泳分析微衛(wèi)星不穩(wěn)定性MICROSATELLITEINSTABILITYMI；同時對細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素含量與正常MC進行對比，分析細(xì)胞的生物學(xué)功能變化。結(jié)果表明永生化和去永生化的黑素細(xì)胞均保持正常核型、HLADR的表達不受體外長期傳代培養(yǎng)和SV40T抗原的影響；SV40T抗原不通過上調(diào)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶活性途徑介導(dǎo)細(xì)胞永生化；細(xì)胞周期分析和MTT比色法分析細(xì)胞增殖實驗表明IMC的生長增殖較正常MC明顯，長期培養(yǎng)未見復(fù)制衰亡現(xiàn)象。而切除SV40T抗原基因后的去永生化黑素細(xì)胞可出現(xiàn)部分凋亡，生長變緩；錯配修復(fù)基因HMLH1、HMSH2在IMC中較正常細(xì)胞表達上調(diào)；D1S187、D5S107、D18S34三個位點上均未出現(xiàn)條帶的增加和缺失，無微衛(wèi)星不穩(wěn)定性發(fā)生，保持了細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性。細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素含量與體外培養(yǎng)的正常MC無明顯差別。上述結(jié)果說明轉(zhuǎn)化細(xì)胞不易向惡性轉(zhuǎn)化，并能保持MC正常的黑素代謝的生物學(xué)功能，可以為自體MC移植治療白癜風(fēng)和MC的實驗研究提供有用的種子細(xì)胞。

簡介：蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文CD40分子在人宮頸癌組織中表達的臨床意義及CD40信號對宮頸癌細(xì)胞株SIHA體外的生物學(xué)效應(yīng)姓名黃沁申請學(xué)位級別博士專業(yè)普外科學(xué)指導(dǎo)教師錢海鑫張學(xué)光20080501CIM0分子在人宮頸癌組織中表達的臨床意義及CIMO信號對宮頸癌細(xì)胞株SIHA體外的生物學(xué)效應(yīng)中文摘要相關(guān)性。宮頸癌組織中HPVL6／18E6、P16嗍8、VEGF分子表達均較正常組織高786％、8036％、8750％。CD34MVD在宮頸癌組織上表達為27。02士1068，明顯較其它各組增高P0001。HPVL6／18E6陽性表達的宮頸CINIIHI組織中，P16玳K48表達陽性者占9047％，HPVL6／18一E6陽性表達的宮頸癌組織中，P16ⅨK43表達陽性達9772％，因此P16礬K44在宮頸CINIIILL及宮頸癌中的表達和HPVL6／18E6的陽性表達有明顯的相關(guān)性R0362，P005；R0837，P001。CD40分子的表達和P16帳4的表達呈正相關(guān)RO52，PO01；和HPVL6／18E6、VEGF以及CD34MVD的表達亦有一定的正相關(guān)性，057，POOL；RO32，PO05；RO37，PO05。結(jié)論CD40可作為宮頸癌診斷、預(yù)后和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移評估的客觀指標(biāo)。CD40分子表達與抑癌基因P16礬“8、HPVL6／18E6以及VEGF和CD34MVD的表達有一定的正相關(guān)性，由此提示CD40分子在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能起著非常重要的作用。二、激發(fā)型CD40單抗對宮頸癌細(xì)胞株體外增殖和化學(xué)藥物敏感性的作用目的研究CD40分子激發(fā)對宮頸癌細(xì)胞SIHA化療敏感性的影響及其機制。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測宮頸癌細(xì)胞SIHA上CD40分子的表達，MTT法檢測CD40單抗5C11聯(lián)合化療藥物對SIHA細(xì)胞的作用，PI染色檢測SIHA細(xì)胞周期的變化，ANNEXINV二PI法檢測細(xì)胞凋亡、REALTIMEPCR方法分析單抗5CLL作用SIHA細(xì)胞后凋亡基因表達水平變化。結(jié)果宮頸癌SIHA細(xì)胞表面CD40表達率為960％，SIHA細(xì)胞經(jīng)5CLL作用后出現(xiàn)G2／M期阻滯，5CLL和化療藥物鹽酸吉西他濱GEMCITABIN各自抑制細(xì)胞生長作用不明顯，但兩者聯(lián)合能顯著抑制SIHA的生長和促進凋亡。SIHA細(xì)胞在和5CLL作用24小時后，抗調(diào)亡基因BCLXL的表達明顯下調(diào)，促調(diào)亡基因BAX的上調(diào)作用不明顯。結(jié)論CD40分子通過介導(dǎo)G2／M期阻滯和調(diào)節(jié)凋亡基因表達水平增加SIHA細(xì)胞對腫瘤化療藥物鹽酸吉西他濱敏感性?！娟P(guān)鍵詞】CD40宮頸癌；免疫組織化學(xué)單克隆抗體；化療敏感性Ⅱ作者黃沁指導(dǎo)教師錢海鑫張學(xué)光

簡介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文影響肝細(xì)胞性肝癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的相關(guān)分子生物學(xué)研究姓名滕木儉申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師李兆亭2002429●■山爾大學(xué)博七論文異倍體腫瘤1L例324％；異倍體腫瘤伴轉(zhuǎn)移和門靜脈侵犯為634％7／11，而二倍體瘤為174％4／23，兩者差異顯著PO01腫瘤DNA二倍體或異倍體與腫瘤大小、HBV感染、AFP定量無明顯相關(guān)，但低分化癌中異倍體所占比例較高。KI一67抗原在HCC中呈現(xiàn)高表達，KI～67在HCC中呈1423658表達，在肝硬化組織中較低，為452231，在HCC中表達明顯增加，與肝硬化組織相比差異顯著P001；KI一67抗原，在HCC伴門靜脈癌栓、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移者陽性與不伴有者陰性相比差異顯著P‘O05，在低分化腫瘤中也表達較高，但KI一67抗原表達強度與腫瘤大小、AFP水平等因素?zé)o明顯相關(guān)性與HCC肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和門靜脈癌栓明顯相關(guān)P005；KI一67表達和端粒酶活性及肝癌異倍體腫瘤與肝細(xì)胞肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓等因素的關(guān)系極為相似。結(jié)論大多數(shù)HCC肝組織端粒酶活性呈現(xiàn)陽性表達，僅個別肝硬化組織端粒酶活性呈現(xiàn)弱陽性，HCC肝組織端粒酶活性呈現(xiàn)陽性表達者侵襲性明顯增強；KI一67在HCC中呈現(xiàn)高表達，與肝癌細(xì)胞增生活躍程度和侵襲力呈幣相關(guān)HCC異倍體腫瘤較二倍體浸潤能力為強；肝癌細(xì)胞端粒酶活性呈現(xiàn)陽性、KI67基因陽性表達和DNA異倍體腫瘤與肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、門靜脈癌栓密切相關(guān)，其在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中起著重要作用，尤其端粒酶可做為臨床滲斷、惡性程度及預(yù)后判斷67基因和DNA倍體等檢測臨床價值更加突出。關(guān)鍵詞肝細(xì)胞性羅端弋歲DNA含量KI吵I。、；鏊

簡介：目的觀察、比較兔不同部位脂肪干細(xì)胞ADIPOSEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，ADSCS在體外培養(yǎng)時的生長特性，評價不同來源部位是否與其生物學(xué)性能存在聯(lián)系，以便選取優(yōu)良的種子細(xì)胞用于下一步尿路組織工程研究，同時為深入研究ADSCS生長特性具體的影響因素提供實驗基礎(chǔ)。方法應(yīng)用酶解法I型膠原酶分離出附睪附近、腹膜后、頸背部三個部位脂肪中的間充質(zhì)干細(xì)胞，進行體外傳代后差速貼壁培養(yǎng)純化，比較不同培養(yǎng)方案的細(xì)胞狀態(tài)，觀察四代以后三個不同部位ADSCS的形態(tài)特征和生長狀態(tài)，用鼠源性兔CD44分子的單克隆抗體做免疫細(xì)胞化學(xué)染色給予干細(xì)胞鑒定，對純化后的三部位第五代間充質(zhì)干細(xì)胞進行成脂、成骨、成肌多向誘導(dǎo)分化，采用“油紅O”染色法對成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞性質(zhì)進行鑒定，VONKOSSA鈣染色法對成骨誘導(dǎo)細(xì)胞進行鑒定，RTPCR法對成平滑肌誘導(dǎo)細(xì)胞進行肌肉早期標(biāo)志物ΑACTIN基因的檢測，MTT法檢測差速貼壁培養(yǎng)后不同部位細(xì)胞的生長曲線和倍增時間并進行統(tǒng)計分析和比較。結(jié)果⑴兔三個部位脂肪組織顏色均為淡黃色；附睪附近脂肪較多且存有明顯脂肪外包膜，其它細(xì)胞成分污染機率較小。⑵等量脂肪情況下，附睪附近和頸背部脂肪的原代ADSCS產(chǎn)量較多。⑶三個部位ADSCS原代及傳代細(xì)胞形態(tài)原代細(xì)胞形態(tài)較小，呈長梭形或多邊性貼壁生長；傳代后差速貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)增大，呈鋪路石樣分布，生長、遷移活躍。⑷兔ADSCS標(biāo)志CD44分子免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性，分布處呈棕黃色顆粒沉淀。⑸兔三個不同部位來源ADSCS多向誘導(dǎo)分化誘脂分化后油紅染色可見紅色脂滴；誘骨分化后VONKOSSA鈣染色可見細(xì)胞外基質(zhì)物狀黑色鈣沉積；誘平滑肌六周后對照組ΑACTIN標(biāo)志物經(jīng)RTPCR檢測顯示弱條帶，實驗組則呈強條帶。⑹兔三個部位ADSCS生長曲線及倍增時間頸背部和附睪附近來源ADSCS間的倍增時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義P005，而生長速度較快的頸背部和附睪附近來源ADSCS分別與腹膜后來源的ADSCS的倍增時間有明顯差異P結(jié)論不同部位來源的ADSCS在體外培養(yǎng)時其生物學(xué)特性存在差異，部位來源成為影響其增殖、分化能力的另一重要因素，這提示在后續(xù)的尿路組織工程基礎(chǔ)研究中，對ADSCS的來源部位要有所擇取，頸背部和附睪附近來源ADSCS成為較佳種子細(xì)胞。

簡介：大面積深度燒、創(chuàng)傷會造成皮膚的正常結(jié)構(gòu)和功能嚴(yán)重受損其中皮膚附屬器如汗腺等結(jié)構(gòu)的破壞及功能喪失將嚴(yán)重影響燒、創(chuàng)傷患者的生存質(zhì)量。目前已有研究證明間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLSMSCS能有效參與促進皮膚與汗腺損傷的修復(fù)與再生有望促進燒、創(chuàng)傷后患者的修復(fù)效果并改善其生存質(zhì)量。MSCS是一類具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞目前在研究和臨床上的應(yīng)用也越來越廣泛。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)骨髓來源的MSCSBONEMARROWDERIVEDMSCSBMMSCS在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下能夠成功地向汗腺樣細(xì)胞分化并修復(fù)受損的汗腺組織。然而受到細(xì)胞培養(yǎng)周期的限制無法在燒、創(chuàng)傷治療的早期得以應(yīng)用同時BMMSCS的獲取須行骨髓穿刺術(shù)給供者造成一定痛苦且BMMSCS的增殖及分化潛能隨供者年齡的增大而下降。因此尋找新的MSCS來源是目前國內(nèi)外干細(xì)胞研究的熱點。臍帶作為MSCS的一種可靠來源較骨髓容易獲得具有操作簡便來源豐富分化能力強對供者無傷害移植物抗宿主病GVHD發(fā)生率低干細(xì)胞所占比例大以及避免倫理爭議等諸多優(yōu)點更有望應(yīng)用于臨床治療。目前其多向分化潛能已得到證實因此臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞UMBILICALCDDERIVEDMSCSUCMSCS可以作為一種嶄新的細(xì)胞治療策略應(yīng)用于燒傷后汗腺損傷修復(fù)再生研究。我們在前期研究中已初步發(fā)現(xiàn)UCMSCS在特定的誘導(dǎo)環(huán)境下具有向汗腺樣細(xì)胞分化的潛能。然而因培養(yǎng)條件以及血清使用、添加細(xì)胞因子種類等不同造成不同批次的細(xì)胞表型、增殖能力、長期培養(yǎng)后的細(xì)胞功能以及向汗腺細(xì)胞的分化能力等存在較大差異直接影響了UCMSCS在汗腺再生研究中的應(yīng)用。因此亟待建立一種符合臨床使用的非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCS分離、培養(yǎng)和鑒定方法以及向汗腺細(xì)胞分化的標(biāo)準(zhǔn)化體系為開展進一步的基礎(chǔ)研究和深入的臨床前實驗研究奠定實驗基礎(chǔ)。本研究分為以下兩部分1首先建立非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCS分離、培養(yǎng)與鑒定體系采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的表面抗原的表達、分析細(xì)胞的增殖活性。2建立非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCS向汗腺細(xì)胞分化體系采用流式細(xì)胞術(shù)、RTPCR、WESTERNBLOT以及染色體核型分析等鑒定分化后汗腺樣細(xì)胞的標(biāo)志物以及臨床前應(yīng)用的安全性。實驗結(jié)果顯示UCMSCS在無動物血清的安全培養(yǎng)條件下依然能保持MSCS特有的生物學(xué)表型和增殖能力且各組間無明顯差異經(jīng)無動物血清汗腺分化培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下UCMSCS可以成功地向汗腺樣細(xì)胞分化誘導(dǎo)后細(xì)胞的汗腺標(biāo)記物CEACK14CK19以及汗腺發(fā)育基因EDA以及EDAR均為陽性表達且分化能力與本組之前的汗腺誘導(dǎo)方法添加動物血清無顯著差異誘導(dǎo)后細(xì)胞經(jīng)長期培養(yǎng)后檢測染色體無畸變。以上實驗結(jié)果為建立標(biāo)準(zhǔn)化的UCMSCS培養(yǎng)鑒定體系以及UCMSCS用于修復(fù)汗腺損傷的臨床治療和誘導(dǎo)后汗腺庫的建立提供了可靠的理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。

簡介：目錄中文摘要1英文摘要2引言4正文6第一部分骨肉瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與大量增殖61實驗材料與方法611實驗對象612實驗試劑613實驗器械714試劑配制715實驗方法92實驗結(jié)果103討論12第二部分骨肉瘤干細(xì)胞的分離與鑒定181實驗材料與方法1811實驗對象1812實驗試劑1813實驗器械1914試劑配制1915實驗方法212實驗結(jié)果243討論274問題與展望37結(jié)論39參考文獻40中文摘要目的本研究針對骨肉瘤的高復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移特性，從普通骨肉瘤細(xì)胞株中分離、培養(yǎng)骨肉瘤干細(xì)胞，檢測骨肉瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性，為進一步研究骨肉瘤發(fā)病機制、早期診斷及靶向治療提供依據(jù)。方法從中科院上海細(xì)胞庫購買骨肉瘤MG63細(xì)胞株，進行大量的增殖培養(yǎng)，采用添加低濃度甲氨蝶呤的無血清培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)骨肉瘤球體細(xì)胞；從細(xì)胞的生長曲線，成骨與成脂誘導(dǎo)，流式細(xì)胞儀檢測其細(xì)胞表面標(biāo)志物來檢測其生物學(xué)特性。結(jié)果1骨肉瘤MG63細(xì)胞株傳代并大量增殖。2成功從第三代骨肉瘤細(xì)胞誘導(dǎo)出干細(xì)胞樣骨肉瘤球以下簡稱M細(xì)胞。3流式細(xì)胞術(shù)檢測M細(xì)胞中CD29、90、45的表達，CD29陽性率為990％，CD90陽性率為996％，CD45FEI生率為119％。4細(xì)胞增殖實驗、細(xì)胞分化實驗及流式細(xì)胞檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)M細(xì)胞具有較強的侵襲性、增殖能力。結(jié)論骨肉瘤MG63細(xì)胞在添加細(xì)胞因子EGF、BFGF及低濃度甲氨蝶呤的無血清培養(yǎng)基中可誘導(dǎo)M細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)M細(xì)胞具有干細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD45；該M細(xì)胞可向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞分化；細(xì)胞侵襲實驗、細(xì)胞增殖實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞具有較強的侵襲性、增殖能力。上述結(jié)果表明本次試驗所分離培養(yǎng)的骨肉瘤細(xì)胞具有干細(xì)胞特性。關(guān)鍵詞骨肉瘤MG63細(xì)胞；骨肉瘤干細(xì)胞；分選；生物學(xué)特性

簡介：分類號分類號R5513密級一般密級一般UDC616155編號編號2010212545廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文以載體介導(dǎo)的以載體介導(dǎo)的RNA干擾沉默干擾沉默F(xiàn)OXP3對JURKAT細(xì)胞細(xì)胞NOTCH通路的生物學(xué)影響通路的生物學(xué)影響碩士研究生碩士研究生黃海彬黃海彬?qū)煄熥T獲譚獲教授教授申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士年級二零一零級級二零一零級學(xué)科專業(yè)業(yè)血液血液內(nèi)科學(xué)內(nèi)科學(xué)研究方向向白血病的治療白血病的治療論文提交時間論文提交時間2013年5月論文答辯日期論文答辯日期2013年5月學(xué)位類型醫(yī)型醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)位學(xué)科學(xué)學(xué)位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)位授予單位廣州醫(yī)學(xué)院答辨委員會主席答辨委員會主席評議人人2013年5月廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文以載體介導(dǎo)的RNA干擾沉默F(xiàn)OXP3對JUKAT細(xì)胞NOTCH通路的生物學(xué)影響1中文摘要中文摘要1ABSTRACT6前言11技術(shù)路線技術(shù)路線16本課題的理論依據(jù)本課題的理論依據(jù)17第一部分第一部分FOXP3SIRNA真核表達重組載體的構(gòu)建、真核表達重組載體的構(gòu)建、鑒定及轉(zhuǎn)染細(xì)胞的條件篩鑒定及轉(zhuǎn)染細(xì)胞的條件篩查18主要材料和試劑18（二）結(jié)果29討論30結(jié)論32第二部分經(jīng)質(zhì)粒介導(dǎo)的第二部分經(jīng)質(zhì)粒介導(dǎo)的SIRNA對JRUKAT細(xì)胞中細(xì)胞中FOXP3表達和細(xì)胞生長的抑制作用表達和細(xì)胞生長的抑制作用33主要材料33（二）結(jié)果49討論52全文小結(jié)全文小結(jié)54參考文獻參考文獻55綜述74中英文對照詞匯中英文對照詞匯84碩士期間發(fā)表論文碩士期間發(fā)表論文86致謝87學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明88學(xué)位論文知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明學(xué)位論文知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明88關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明88

簡介：縮略詞表1中文摘要3英文摘要51￡一L刖舌7第一部分?jǐn)y帶小鼠CD28基因干擾序列慢病毒干擾質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定”9第二部分慢病毒顆粒的制各與高效CD28／SHRNA干擾序列的篩選18第三部分CD28分子對EL4細(xì)胞生物學(xué)行為影響的探討33討論38結(jié)論42論文圖表43參考文獻50綜述56攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文題目66臨床培訓(xùn)小結(jié)67致謝69論文聲明70論文審閱認(rèn)定書7L≯氛舒‰?！_妒”～’時一㈡◆滯一卜P■H∥O、√。勢。豫≯L●●RTPCRSHRNASIRNA2

簡介：點擊查看更多低氧對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及增殖的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文胃癌耐藥細(xì)胞的生物學(xué)特性及凋亡相關(guān)分子的表達姓名王少東申請學(xué)位級別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化專業(yè)）指導(dǎo)教師周殿元張振書200261MDRPGPVCRADMMULTIDRUGRESISTANC多藥耐藥性PGLYCOPROTEINVINCRISTIRLEADRIAMYCINP一糖蛋白長春新堿阿霉素I墼壁塑墮4

簡介：目的研究糖尿病是否會導(dǎo)致在體外培養(yǎng)條件下自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖、分泌和抗凋亡能力的改變。方法利用鏈脲佐菌素STZ誘導(dǎo)制作成年大鼠糖尿病模型N15，正常大鼠作為對照組N15，分別體外利用用全骨髓貼壁法來擴增和純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，取生長良好的第2代細(xì)胞作為本實驗的研究對象。采用CELLCOUNTKIT8CCK8分別繪制兩組細(xì)胞的生長曲線來評價增殖能力，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測血管內(nèi)皮生長因子VEGF和胰島素樣生長因子1（IGF1）的分泌量和應(yīng)用HOECHST33342染色和膜聯(lián)蛋白ⅤPI雙染流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞在缺氧無血清條件下的抗凋亡能力。結(jié)果來源于糖尿病大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖較正常的大鼠顯著性減慢（P＜001），在形態(tài)學(xué)上則表現(xiàn)為較正常的細(xì)胞更扁平，并且VEGF和IGF1的分泌量較正常大鼠來源的明顯的降低，其中VEGF的分泌量為807±131PGML和679±123PGMLP002，IGF1的分泌量分別為3748±412PGML和2818±268PGMLP＜001。在缺氧無血清條件下，糖尿病來源的干細(xì)胞抗凋亡能力顯著性降低，兩組早期細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為287±34和371±242P＜001。結(jié)論糖尿病大鼠來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以成功的在體外進行增殖培養(yǎng)，但是其在增殖能力、分泌、抗凋亡能力等一系列生物性狀上有不同程度的損害。

簡介：點擊查看更多微小RNA-10b沉默對人三陰性乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號學(xué)號學(xué)號D201178229學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級密級博士學(xué)位論文CCR8在結(jié)腸癌中的表達及其對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響學(xué)位申請人學(xué)位申請人曹陽曹陽學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)外科學(xué)|（普外）（普外）指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師王國斌王國斌教授教授答辯日期答辯日期20142014年5月獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期年月日日期年月日

簡介：第一部分目的探討體外擴增小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞BMDC的方法并進行形態(tài)學(xué)觀察和生物學(xué)特性鑒定。方法用重組小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子RMGMCSF和重組小鼠白細(xì)胞介素4RMIL4體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞倒置顯微鏡動態(tài)觀察形態(tài)學(xué)變化流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面分子同時進行刺激初始型T淋巴細(xì)胞增殖能力的檢測。結(jié)果體外培養(yǎng)9天后小鼠樹突狀細(xì)胞可達80％以上光鏡下可見典型的樹突狀細(xì)胞形態(tài)。未成熟DC的細(xì)胞表型為CD11CLOW、MHCIILOW、CD86LOW未成熟DC經(jīng)LPS刺激培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒霥C細(xì)胞表型為CD11CHIGH曲、MHCIIHIGH曲、CD86HIGH可顯著刺激同種異體混合淋巴細(xì)胞增殖。結(jié)論本方法可獲得較高純度的骨髓樹突狀細(xì)胞避免了使用傳統(tǒng)磁珠分離方法所帶來的高成本復(fù)雜操作低產(chǎn)出率的弊端為研究樹突狀細(xì)胞的功能以及運用其開展下游實驗提供材料。第二部分目的使用已構(gòu)建成功的小鼠SMAD6基因RNA干擾RNAI慢病毒載體有效沉默骨髓樹突狀細(xì)胞BMDC的SMAD6基因表達。方法運用構(gòu)建好的慢病毒載體根據(jù)前期試驗所明確的感染復(fù)數(shù)對第一部分所培養(yǎng)的小鼠BMDC進行感染120H后收集細(xì)胞并經(jīng)倒置熒光顯微鏡、RTPCRWESTERNBLOT檢測SMAD6基因的表達狀況。結(jié)果熒光顯微鏡觀察初步推斷病毒感染效率在75％左右PCR和WESTERNBLOT證實通過病毒途徑在BMDC細(xì)胞中SMAD6基因的沉默效約為85％。結(jié)論通過使用慢病毒載體較成功抑制小鼠BMDC中SMAD6基因表達。說明運用慢病毒做RNAI載體可以實現(xiàn)對DC細(xì)胞某一基因的有效沉默。第三部分目的探討在SMAD6基因被抑制并有TGFΒ1刺激的情況下小鼠骨SH髓源樹突細(xì)胞生物學(xué)特性是否存在著變化。方法分別以GMCSF和IL4誘導(dǎo)培養(yǎng)兩批小鼠BMDC其中一批經(jīng)用慢病毒感染對細(xì)胞進行SMAD6基因抑制6D后同時用TGFΒ1刺激再經(jīng)過48H后分別對兩批細(xì)胞進行電鏡觀察、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型CD11C、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測其抗原提呈功能檢測細(xì)胞凋亡情況收集上清液用ELISA檢測IL6IL12P70。結(jié)果SMAD6未干擾組電鏡下DC成熟樣特征較明顯CD11C、CD80、CD86及MHCⅡ的表達水平也較高細(xì)胞凋亡指數(shù)較低混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和分泌IL4、IL12P70能力較強SMAD6干擾組DC形態(tài)成熟特征不明顯CD11C、CD80、CD86和MHCⅡ的表達水平較低細(xì)胞凋亡指數(shù)較高混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和分泌IL4、IL12P70能力較弱。結(jié)論在小鼠BMDC中SMAD6基因被抑制并有TGFΒ1刺激的情況下細(xì)胞多呈未成熟狀態(tài)以未成熟的生物學(xué)特性為主而SMAD6基因未被抑制情況下細(xì)胞更接近于成熟狀態(tài)。