簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突變體對肝癌細胞生物學(xué)行為的影響及其機制的研究姓名劉曉紅申請學(xué)位級別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師朱明華20050501獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名劉曉紅＼蠕億J簽字日期2005年5月6日學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名劉曉紅捌抗九導(dǎo)師簽名簽字日期2005年5月6日簽字日期

簡介：‘巧81784丘洛立通大學(xué)屢學(xué)院博士學(xué)位論文題目兔頜面部鱗癌細胞系的建立及生物學(xué)特。性研究作者姓名全武龍指導(dǎo)教師鄞焦數(shù)撞學(xué)科專業(yè)題畫窆I型學(xué)號旦衛(wèi)12QQ3Q壹論文提交日期2006315植成瘤率100％；無支原體污染。研究結(jié)論①NZW04831為一株惡性度高的兔頜面部鱗癌細胞系，保留了其來源細胞的生物學(xué)特性，可作為頜面部鱗癌研究的實驗?zāi)Ｐ?；②動物模型的病理類型、生物學(xué)行為與人口腔頜面部鱗癌相似，可發(fā)生區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠隔器官肺等轉(zhuǎn)移。關(guān)鍵詞新西蘭白兔，頜面部鱗狀細胞癌，動物模型，細胞系

簡介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠乳腺腫瘤病理學(xué)觀察與腫瘤細胞系的建立及生物學(xué)特性研究姓名趙磊申請學(xué)位級別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師程國富唐利軍20070601華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2007屆碩士學(xué)位論文ABSTRACTRATISONEOFTHEMOSTPOPULARLABORATORYANIMALINMEDICALRESEARCH．SPONTANEOUSTUMORSISALLIMPORTANTBIOLOGICALCHARACTERISTICSINRATS．THESTUDYTRIESTOCHARACTERIZETHEEPIDEMIOLOGICANDPATHOLOGICFEATURESOFSPONTANEOUSBREASTTUMORINSPFRATS．THEEPIDEMIOLOGYANDPATHOLOGYOFTHESPONTANEOUSBREASTTUMORMAYBEVALUABLEFORTHEANIMALMODELESTABLISHMENTANDPATHOGENESISOFTUMOR．HTHISSTUDYWEINVESTIGATEDTHETUMOREPIDEMIOLOGY,ANDOBSERVEDTHECLINICALPATHOLOGYINSPFRATS．THECASESWERETOCLASSIFYACCORDINGTOQUALITALIONBYMACROEXAMINATIONANDMICROSCOPICEXAMINATION．THEINCIDENCEOFSPONTANEOUSBREASTTUMORINSPRAGNEDAWLEYRATSISAPPROXIMATELY10．5％．INWHICHTHEINCIDENCEOFBENIGNTUMORISAPPROXIMATELY8．5％．ANDTHATOFMALIGNANTTUMOR2．0％；THEINCIDENCEOFWISTARRATIS2．0％，INWHICHINCIDENCEOFBENIGNTUMORIS1．5％．ANDTHEMALIGNANTTUMOR0．5％．THEINCIDENCEOFBENIGNTUMORISHIGHERTHANTHATOFMALIGNANTTUMORBOTHINSPRAGNEDAWLEYRATSANDWISTARRATS．INWHICHTHEADENOFIBROMAANDADENOMAARETHEMOST．THISRESEARCHENRICHEDTHECLOSEDCOLONYSPFRATSBIOLOGYBACKGROUNDDATA,ANDMAYPROVIDEONEMETHODFORESTABLISHINGANIMALTUMORMODELFORHUMANCORRESPONDINGDISEASE．TUMORDEVELOPMENTISACOMPLEXPROCESSWITHMULTIGENEPARTICIPATION，ANDISCORRELATEDNOTONLYWITHABNORMALACTIVATIONOFONCOGENESANDDEACTIVATIONOFTMNORSUPPRESSINGGENEBUTALSOWITHAPOPTOSIS．WILDTYPEP53GENEHASNEGATIVEREGULATIONTOMULTIPLICATIONANDDIFFERENTIATIONOFCELLS，MUTANTP53GENELOSTSNORMALFUNCTIONANDGAINSONCOGENECHARACTERISTICS．BCL2ISCONTROLGENEOFAPOPTOSISANDITSABNORMALITYMAYINTERRUPTIONAPOPTOSISTHATLEADSTOTUMORIGENESIS．SABCMETHODOFIMMUNOHISTOCHEMISTRYWASUSEDTODETECTPROTEINUMEXPRESSIONOFP53、BCL2INRATSBREASTTUMORSPECIMEN．RESULTSSHOWEDTHATTHEEXPRESSIONRATEOFP53INRATSBENIGNANDMALIGNANTTUMORWERE46．1％12／26AND85．7％6／7RESPECTIVELY．THEPOSITIVERATEOFP53PROTEINUMBECAMEHIGHERWITHTHEINCREASEOFTUMOREANCERIZATIONDEGREE．THEOVEREXPRESSIONOFP53PROTEINUMHINTEDTHETUMOREANCEFIZATIONDEGREEWHICHISSIMILARSENSEHUMANINMALIGNANTTUMOR．THEEXPRESSIONRATEOFBCL一2INBENIGNANDMALIGNANTTUMORWERE26．9％7／26AND57．1％4／7RESPECTIVELY．THEEXPRESSIONRATEOFBCL一2INCREASEDGRADUALLYWITHTHEDEVELOPMENTOFCANCERIZATION．THEMUTATIONRATEWAS81．8％缸11BCL2POSITIVEEXPRESSIONTUMORCASES．ANDWAS40．9％IN22BCL2NEGATIVEEXPRESSIONTULNORCASES．BOTHP53ANDBCL2PROTEINUMSHIGHPOSITIVEEXPRESSIONMAYSUGGESTTHETWOPROTEINSHADSYNERGISTICEFFECTINTHETUMORGENESISANDDEVELOPMENT．ASTRAINOFBREASTTNMORCELLLINEZHL2006WASESTABLISHEDANDBIOLOGICAILYIDENTIFIED．THEZHL2006CEILSGREWFASTINVITROANDTHEPOPULATIONDOUBLINGTIMEWASⅡ

簡介：點擊查看更多去分化脂肪細胞的細胞生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HS100A6對腫瘤細胞的生物學(xué)作用研究姓名陳英華申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師周蘭20090501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文提供實驗依據(jù)。方法1重組HSL00A6的制備用氯化鈣法將已經(jīng)構(gòu)建的PGSTMOLUC和PGSTMOLUCHS100A6質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達宿主大腸桿菌BL21；用異丙基硫代半乳糖苷IPTG誘導(dǎo)其表達；冰上超聲裂解細菌后，用谷胱甘肽瓊脂糖4B球珠GLUTATHIONESEPHAROSE4BBEADS從細菌裂解液中分離純化GST和GSTHS100A6，并通過十二烷基磺酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳SODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS，SDSPAGE和QUANTITYONE軟件鑒定和分析純化效果，WESTERNBLOT法鑒定重組蛋白，BCA方法進行蛋白定量，分裝后80℃保存?zhèn)溆谩?用不同濃度的GSTHSL00A6干預(yù)所選的各個細胞株，MTT法檢測HSL00A6對各細胞株增殖的影響。3根據(jù)上一部分試驗結(jié)果，選取一個合適的蛋白濃度，用GSTHS100A6干預(yù)各細胞株，臺盼藍染色活細胞計數(shù)法檢測HS100A6對細胞增殖作用的時間依賴性。4WESTERNBLOT、免疫細胞化學(xué)法及免疫熒光法檢測檢測HS100A6干預(yù)后各腫瘤細胞中13CATENIN的表達水平及分布變化。5PTOPLUC轉(zhuǎn)染各腫瘤細胞株后，用GSTHSL00A6處理細胞，通過熒光素酶活性分析探討HS100A6對WNT／13CATENIN信號途徑活性的影響。6用免疫細胞化學(xué)法檢測用GSTHSL00A6干預(yù)后各腫瘤細胞中

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簡介：第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文電化學(xué)對體外肝癌細胞生物學(xué)行為的作用及對肝癌患者免疫功能的影響姓名崔恒武申請學(xué)位級別博士專業(yè)醫(yī)學(xué)影像學(xué)指導(dǎo)教師田建明200251組凋亡率0．05％，而治療組在電量為3C、5C、IOC、20C時凋亡率分別為0．56％、0，87％、1．09％、1．63％，治療組凋亡率增加不明顯，但兩組相比仍有統(tǒng)計學(xué)差異氏O．05。處于細胞周期中的各期細胞比例無顯著差異。治療后24H檢測結(jié)果對照組凋亡率2．91％，而治療組凋亡率明顯增高P0．05，各組分別為12．59％、22．19％、46．16％、56．68％；各期細胞比例以大電量組20C變化最大，隨電量的增加處于G0一G。期的細胞比例有逐漸增高趨勢，大電量20C治療組的G。一G。細胞比例達74．03％，而S期細胞比例有下降趨勢，20C治療組S期細胞僅占4．61％?！粢?，／、結(jié)論低毫安電化學(xué)治療在6小時內(nèi)治療組的凋亡率增加不明顯，但與對照組相比仍有統(tǒng)計學(xué)差異JDO．05；24小時后治療組的凋亡率增加明顯。低毫安電化學(xué)治療在6小時內(nèi)對細胞周期的影響不顯著；24小時后，隨電量的增加處于G。．G，期的細胞比例有逐漸增高趨勢，而S期細胞比例有下降趨勢。搖下面二∥蝴齜黼法，腓釉，蕊’繃肭挖醐／JU藻勁二高毫安30MA電化學(xué)療法對體外肝癌細胞凋亡的誘導(dǎo)及對細胞周期的影響．目的探討高毫安30MA電化學(xué)療法對體外肝癌細胞凋亡的誘導(dǎo)及對細胞周期的影響。備料和方法用電化學(xué)對培養(yǎng)的體外肝癌細胞S塒C772L進行治療。

簡介：分類號B塑Z2UDC密級重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文RNAI沉默BMI一1基因表達對MCF7細胞生物學(xué)特性及論文題目阿霉素敏感性影響的研究作者姓名武向梅指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱宋方洲教授重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院重慶市渝中區(qū)醫(yī)學(xué)院路1號400016申請學(xué)位級別博士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗診斷學(xué)論文答辯年月2010年5月2010年5月重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明幽ILL11ILJLI／／LLLI／FRJLLRLJILLY1731319本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名三送J啦日期J墮生幸魚坦學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解重慶醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬重慶醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為重慶醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文AML外周血CIK細胞體外誘導(dǎo)及其生物學(xué)作用姓名王文紅申請學(xué)位級別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師繆競誠楊吉成20040401AML外周血CIK細胞體外誘導(dǎo)及其生物學(xué)作用英文摘要GENERATIONANDCHARACTERISTICSTUDYOILEYTOKINEINDUCEDKILLERCELLSFROMPERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELLSOFPATIENTSWITHACUTEMYELOIDLEUKEAMIAABSTRACTC”O(jiān)LINE。INDUCEDKILLERCIKCELLSCANMEDIATEHIGHLYEFFICIENTNON’MAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEXMHC一RESTRICTEDKILLINGOFTUMORCELLTARGETSANDPROLIFERATERAPIDLYINVITROINCONTRASTTOTHELAKCELLSTHATAREACTIVATEDCD3。CD56NKCELLSANDTHETILTHATAREESSENTIALLYCD8CYTOTOXICTCELLS，CIKCELLSAREDISTINCTANDEXPRESSBOTHTHECD3ANDCD56CELLSURFACEMARKERSTHEHI曲LYTICACTIVITYOFCIKCELLSCORRELATESWITHAHIGHEXPANSIONOFCD3ANDCD56DOUBLEPOSITIVECELLSLINNREPORTEDTHEEXPANSIONOFCIKCELLSFROMTHEBONEMARROWSAMPLESOFPATIENTSWITHACUTEMYELOIDLEUKEMIAA加已ANDACUTELYMPHOBLASTICLEUKEMIAALLBUTITISDIFFICULTTOGAINBMSAMPLEENOUGHTOINDUCETHECIKCELLSHEREWEEXPLORETHEPOSSIBILITYOFGENERATIONOFCIKCELLSFROMTHEPERIPHERALBLOODMONONUCLEARPBMCCELLSOFPATIENTSWITHAMLFIRSTWECOMPAREDTHEEFFECTSOFEXOGENOUSIL一1、IL一2ORIL一12USEDFORGENERATIONOFCIKCELLSODPROLIFERATION、CYTOTOXICITYANDANTIGENPRESENTATIONTHENAOPTIMALPROTOCALWASSELECTEDTOAPPLYFORTHEGENERATIONOFCIKCEILSFROMPBMCOFPATIENTSTT

簡介：第一章缺氧對瘢痕成纖維細胞生物學(xué)活性的影響及其機制目的探討缺氧對皮膚瘢痕成纖維細胞生物學(xué)活性的影響及其可能機制結(jié)論缺氧可促進瘢痕成纖維細胞增殖及其Ⅰ型膠原合成減輕缺氧可能有助于預(yù)防瘢痕增生缺氧情況下HIF1Α可能具有調(diào)節(jié)瘢痕成纖維細胞生物學(xué)活性的作用第二章瘢痕組織內(nèi)缺氧環(huán)境的變化及其機制目的探討皮膚瘢痕從增生到萎縮成熟過程中組織內(nèi)微循環(huán)和缺氧環(huán)境的變化及其可能機制結(jié)論皮膚瘢痕從增生到萎縮成熟過程中組織內(nèi)微循環(huán)逐漸改善缺氧程度逐漸減輕組織內(nèi)高細胞密度、高細胞活性是形成瘢痕內(nèi)缺氧環(huán)境的主要原因HIF1Α可能一方面通過誘導(dǎo)VEGF、HO1表達促進血管生成、成熟增加組織內(nèi)供氧另一方面通過協(xié)同P53作用誘導(dǎo)細胞凋亡減少耗氧從而在減輕瘢痕組織內(nèi)缺氧促進瘢痕萎縮成熟過程中發(fā)揮重要作用

簡介：在職人員申請碩士學(xué)位學(xué)位論文Y933170聲U亳與細胞周期和生物掌特性研究研究生莊蠢型專業(yè)鹽疊鱟指導(dǎo)教師塹疊鑒煎燕單位堡盤塹盤生墊莊墮堂瞳學(xué)習(xí)期限二00二年九月至二00五年七月學(xué)位授予單位佳木斯大學(xué)中艾掬要砸T研，窺生學(xué)晦I￡文一、中文摘要目的探討P16和PCNA在人腦星形細胞瘤中的表達及與星形細胞瘤病理分級的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化方法檢測了60例人腦星形細胞瘤石蠟標本中P16和PCNA的表達。結(jié)果隨著病理級別的升高，P16陽性率逐漸下降，I級、II級、III級、IV級中P16的陽性率分別為6470％、43，75％、2667％、1667％，二者之間呈負相關(guān)JO369，PO，05，I、II、III、Ⅳ級比較“二825L，P005。隨著病理級別的升高，PCNA陽性率逐漸升高，I級、II級、III級、IV級中PCNA的陽性率分別為11，6％、3L_25％、4000％、66，67％，二者之間呈正相關(guān)，O390，JPO叭，I、II、III、Ⅳ級比較有顯著差異F9587，PO05。在60例石蠟標本中P16和PCNA陽性率相關(guān)性比較呈負相關(guān)嚴一O954P005。結(jié)論P16和PCNA的聯(lián)合檢測可作為判斷星形細胞瘤分化程度及惡性程度重要的參考指標，為臨床上對該腫瘤的診斷、鑒別診斷、治療及預(yù)后判定提供了重要的參考指標。關(guān)鍵詞P16PCNA星形細胞瘤細胞周期

簡介：J18278南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名啄洳J葉年明了≯日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀碩士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究內(nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或湖南省’有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并按中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。對于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簍≥0囂叫年明坊日墨；乞唧年明Y日縮寫詞RPⅡ1640PBSHESPDABPISCDECMBMCAMECADTN僵PSNDPKFITANLPSVEJF主要縮略語英文索引全稱中文名稱∞SWEUP破MEM嘶ALINSTIMTE1640I心Ⅻ1640培養(yǎng)基MEDIUMPHOSPHATEBUFFERSOLUTIONHEMAMXYLMANDEOSINSTAININGSTREPTAVIDIN／PEROXIDASE33DIAMINOBENZIDINEPROLIFERATINGINDEXSEVERECONLBINEDIMMUNODEFICIENCYEXTRACELLULARMATRIXBASEMENTMEMBRANECELLADHESIONMOLECULESECADHERINTISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASESNUCLEOSIDEDIPHOSPHATEKINASEFMSLIKETYROSINEKINASEMATRIXMETALLOPROTEINASESVASCULARENDOTHELIAL伊OWTHFACTOR3磷酸鹽緩沖液蘇木精伊紅染劑過氧化物酶標記的鏈酶卵白素3，3’二氨基聯(lián)苯胺細胞增殖指數(shù)嚴重聯(lián)合免疫缺陷細胞外基質(zhì)基底膜細胞黏附分子B上皮型鈣粘蛋白金屬蛋白酶組織抑制劑核苷二磷酸激酶血管內(nèi)皮生長因子受體基質(zhì)金屬蛋白酶血管內(nèi)皮生長因子

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文NK細胞對顆粒酶B的繼發(fā)性胞吞及其生物學(xué)意義IL33與EAE發(fā)病的相關(guān)性及其機制姓名李盼申請學(xué)位級別博士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師龔非力鄭芳201105華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文4討NK92細胞所釋放GZMB的轉(zhuǎn)歸。一、一、NK92細胞在靶細胞刺激下出現(xiàn)繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象細胞在靶細胞刺激下出現(xiàn)繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象1應(yīng)用苯乙烯染料應(yīng)用苯乙烯染料FM143觀察觀察NK92細胞繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象細胞繼發(fā)性胞吞現(xiàn)象苯乙烯染料FM143可與細胞膜磷脂雙分子層可逆性結(jié)合，發(fā)出熒光，而其在溶液中則幾乎不能檢出熒光。細胞發(fā)生內(nèi)吞后，苯乙烯染料內(nèi)吞入細胞內(nèi)，細胞膜上熒光可用磷酸鹽緩沖液洗掉。借此原理，本實驗首先將NK92細胞用FM143預(yù)染，然后用豬內(nèi)皮細胞（PEC）刺激1H，激光共聚焦顯微鏡（LCM）觀察NK92細胞內(nèi)吞情況。結(jié)果顯示，未用PEC刺激的NK92細胞膜上顯示熒光，PEC刺激的NK92細胞用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞膜后，細胞內(nèi)顯示熒光，提示NK92細胞在胞吐后細胞膜發(fā)生內(nèi)化。2靶細胞刺激的細胞膜內(nèi)吞過程依賴于靶細胞刺激的細胞膜內(nèi)吞過程依賴于CLATHRIN細胞膜的內(nèi)吞常見形式為依賴于CLATHRIN的經(jīng)典途徑，也可依賴于巨胞飲（MACROPINOCYTOSIS）、小窩蛋白（CAVEOLA）和脂筏（LIPIDRAFT）等途徑。我們采用CLATHRIN特異性抑制劑CPZ預(yù)處理NK92細胞，再用FM143標記細胞膜，使用靶細胞刺激后激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)熒光。實驗結(jié)果顯示，CPZ處理后NK92細胞內(nèi)熒光強度顯著降低，提示NK92細胞膜內(nèi)吞依賴于CLATHRIN途徑。同時用流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)熒光強度，結(jié)果顯示使用CPZ后細胞內(nèi)熒光強度約為對照組的48。我們將NK92細胞用FM143標記，分為兩組，分別用PEC在4℃和37℃刺激1H，結(jié)果顯示4℃條件下細胞并不發(fā)生內(nèi)吞，提示NK92細胞內(nèi)吞作用與溫度相關(guān)，是一種主動內(nèi)吞。二、靶細胞刺激二、靶細胞刺激NK92細胞繼發(fā)性胞吞伴隨細胞繼發(fā)性胞吞伴隨GZMB回收回收1NK92細胞內(nèi)吞的細胞內(nèi)吞的GZMB進入早期內(nèi)體進入早期內(nèi)體NK92細胞膜內(nèi)吞過程為經(jīng)典的CLATHRIN依賴途徑，CPZ預(yù)處理的NK92細胞經(jīng)靶細胞（PEC）刺激，收集未刺激組、刺激15MIN、30MIN的細胞，免疫熒光檢測GZMB和早期內(nèi)體EEA1在胞內(nèi)共定位情況，結(jié)果顯示未刺激組EEA1

簡介：1背景和目的流感急性腦?。↖NFLUENZAACUTEENCEPHALOPATHY，IAE）是流感病毒感染的重要并發(fā)癥之一，患者在病毒感染后在呼吸道癥狀出現(xiàn)12天內(nèi)發(fā)生嚴重的神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)為快速發(fā)展的認知障礙、精神狀態(tài)改變、意識消退、昏迷等，嚴重時引起神經(jīng)后遺癥或死亡。目前，IAE的發(fā)病機制依然不明。在流感急性腦病病人的腦脊液CSF和血漿中，發(fā)現(xiàn)TNFΑ、IL1等促炎癥細胞因子的濃度升高。認為流感急性腦病可能是因機體在感染流感病毒后釋放促炎癥因子，進而誘導(dǎo)了細胞因子級聯(lián)反應(yīng)，造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)CNS發(fā)生以促炎癥因子和趨化因子過度釋放為特征的細胞因子風(fēng)暴（CYTOKINNESTM），引發(fā)神經(jīng)及免疫系統(tǒng)功能紊亂和CNS的免疫病理損傷13。我們前期研究發(fā)現(xiàn)流感病毒可以感染星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，并造成大量促炎細胞因子和趨化因子釋放。而由流感病毒感染膠質(zhì)細胞所釋放的大量細胞因子對正常膠質(zhì)細胞生物學(xué)功能有何影響尚未見報道。因此，本研究利用人流感病毒H1N1和H3N2感染小鼠星形膠質(zhì)細胞獲得條件上清，利用條件上清刺激正常星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，檢測相關(guān)促炎細胞因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平變化，及TNFΑIL6IL1Β的蛋白表達水平變化，為研究IAE所伴隨的細胞因子級聯(lián)放大及細胞因子風(fēng)暴提供依據(jù)。2方法21APUERTORICO834H1N1和ASHANTOU6022006H3N2流感病毒株在MDCK細胞系中的增殖、保存及病毒滴度的測定。22原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)，利用間接免疫熒光法鑒定細胞純度。23不同亞型流感病毒株H1N1H3N2感染星型膠質(zhì)細胞MOI2，感染6H、24H后，收獲細胞上清液。24利用超濾分子截留技術(shù)截留分子量為300KD，對細胞上清液進行超濾，獲得條件上清液。25流感病毒血凝實驗檢測處理后的條件上清液中流感病毒顆粒。26CCK8法檢測條件上清液對原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，細胞活性的影響。27條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞，24H后提取RNA，并反轉(zhuǎn)錄成CDNA。REALTIMEPCR法檢測促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6，趨化因子IP10、MCP1、MIP1轉(zhuǎn)錄水平的變化。28條件上清刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞，ELISA法檢測不同時間點細胞上清液中促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6的蛋白含量，WESTERNBLOTTING法檢測GFAP蛋白的表達情況。29條件上清液刺激原代BALBC小鼠小膠質(zhì)細胞，TRANSWELL法檢測小膠質(zhì)細胞遷移情況。3結(jié)果31通過間接免疫熒光鑒定，成功完成對原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)，細胞純度達95％以上。32利用空斑法檢測，H1N1和H3N2流感病毒滴度為1107PFUML。33通過血凝實驗檢測，條件上清液中無法檢測到流感病毒顆粒。34REALTIMEPCR結(jié)果表明，條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞24H后皆可誘導(dǎo)正常膠質(zhì)細胞的促炎癥因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生不同程度的上調(diào)。35CCK8檢測結(jié)果表明，條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞24H后，與對照組比較，刺激組細胞活性被抑制。36WESTERNBLOTTING法檢測結(jié)果表明，條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞后，GFAP蛋白表達水平發(fā)生上調(diào)。37ELISA法檢測結(jié)果表明，條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞后，促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6在不同時間點的蛋白表達水平發(fā)生不同程度改變總體呈下降趨勢。38TRANSWELL法檢測結(jié)果表明，條件上清刺激原代BALBC小鼠小膠質(zhì)細胞24H后，小膠質(zhì)細胞遷移率未發(fā)生上調(diào)。4結(jié)論41流感病毒感染星形膠質(zhì)細胞條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞后皆可誘導(dǎo)正常膠質(zhì)細胞的促炎癥因子和趨化因子的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生不同程度的上調(diào)，產(chǎn)生細胞因子級聯(lián)效應(yīng)。42流感病毒感染星形膠質(zhì)細胞條件上清液分別刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞后皆可抑制細胞活性。43流感病毒感染星形膠質(zhì)細胞條件上清液刺激原代BALBC小鼠星形膠質(zhì)細胞后，促炎細胞因子TNFΑ、IL1Β、IL6的蛋白表達水平在不同時間點發(fā)生不同程度改變，總體呈下降趨勢。蛋白質(zhì)水平上，未能檢測出細胞因子級聯(lián)放大效應(yīng)，可能與星形膠質(zhì)細胞促炎抗炎雙向細胞生物學(xué)功能有關(guān)

簡介：分類號密級公開國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文頜骨骨髓基質(zhì)細胞與牙周膜干細胞的生物學(xué)特性比較王欣培養(yǎng)類別學(xué)歷研究生申請學(xué)位類型專業(yè)學(xué)位學(xué)科領(lǐng)域?qū)I(yè)口腔醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師王勤濤教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位口腔醫(yī)院牙周科二O一二年五月頜骨骨髓基質(zhì)細胞與牙周膜干細胞的生物學(xué)特性比較頜骨骨髓基質(zhì)細胞與牙周膜干細胞的生物學(xué)特性比較研究生王欣學(xué)科專業(yè)牙周病學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院牙周黏膜病科導(dǎo)師王勤濤教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師董廣英副教授（副主任醫(yī)師）王新文講師（主治醫(yī)師）資助基金項目國家自然科學(xué)基金資助81070842關(guān)鍵詞頜骨；人骨髓基質(zhì)細胞；人牙周膜干細胞；潛能；分化中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2012年05月