簡(jiǎn)介：1、背景傳統(tǒng)的分類(lèi)學(xué)把人體帶絳蟲(chóng)分為豬帶絳蟲(chóng)（TAENIASOLIUM）和牛帶絳蟲(chóng)（TAENIASAGINAIA）兩種。近三十年來(lái)，在東南亞和西太平洋的許多國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)了另一種新的帶絳蟲(chóng)，其成蟲(chóng)特征幾乎和牛帶絳蟲(chóng)一致，而囊尾蚴又與豬帶絳蟲(chóng)幼蟲(chóng)相似，寄生在中間宿主豬的體內(nèi)，人因生食豬肝等內(nèi)臟而感染，這種帶絳蟲(chóng)被命名為亞洲帶絳蟲(chóng)（TAENIAASIATICA）。人是以上三種帶絳蟲(chóng)唯一的終宿主，豬和牛是其主要的中間宿主，豬帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵感染還可引起嚴(yán)重的囊尾蚴病（囊蟲(chóng)?。Ｎ覈?guó)北部和西部地區(qū)是帶絳蟲(chóng)病和囊蟲(chóng)病較嚴(yán)重的流行區(qū)。研究證實(shí)在貴州的都勻地區(qū)存在亞洲帶絳蟲(chóng)的流行，從江地區(qū)存在牛帶絳蟲(chóng)的流行，患者主要是青壯年，對(duì)當(dāng)?shù)氐膭趧?dòng)生產(chǎn)力影響很大，是危害西部欠發(fā)達(dá)地區(qū)經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題。近幾年來(lái)我們?cè)趤喼迬Ы{蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)、生態(tài)學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、組織病理學(xué)和免疫學(xué)、基因組學(xué)等研究領(lǐng)域做了大量的研究，研究證實(shí)亞洲帶絳蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)地位是介于豬帶絳蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)之間的一個(gè)獨(dú)立種，從分子進(jìn)化的角度分析，其基因序列和蛋白質(zhì)序列與豬帶和牛帶都有很高的同源性。因此可以推斷，亞洲帶絳蟲(chóng)的某些抗原，可作為豬帶絳蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)的通用抗原，可作為豬帶絳蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)免疫診斷和疫苗的候選抗原，利用課題組在亞洲帶絳蟲(chóng)的地域優(yōu)勢(shì)和基因資源優(yōu)勢(shì)，發(fā)展我國(guó)的帶絳蟲(chóng)診斷試劑盒和疫苗開(kāi)發(fā)是本研究的主要目標(biāo)，針對(duì)中間宿主（豬、牛）和終宿主（人）的抗感染疫苗是預(yù)防這些寄生蟲(chóng)病的重要策略?？莶菅挎邨U菌BACILLUSSUBTILIS作為一種新型口服疫苗載體系統(tǒng)，具有傳統(tǒng)口服疫苗載體不可比擬的優(yōu)勢(shì)①枯草芽孢桿菌具有良好的安全性，已作為益生菌廣泛應(yīng)用于人及動(dòng)物；②枯草芽孢桿菌耐性強(qiáng)，對(duì)干燥、高溫、高壓、氧化、及酸、堿毒物等等不良環(huán)境的抵抗力強(qiáng)，可在室溫條件下長(zhǎng)期儲(chǔ)存；③枯草桿菌基因組的研究已較完善，枯草桿菌克隆技術(shù)也比較成熟；④以芽孢狀態(tài)口服，枯草芽孢桿菌在排出體外之前，其在小腸有可能經(jīng)過(guò)發(fā)芽、復(fù)制過(guò)程。研究表明，大部分枯草芽孢通過(guò)胃腸道后仍能存活。枯草芽孢衣殼蛋白融合表達(dá)的抗原具有很高的穩(wěn)定性，能抵抗胃酸和腸道消化酶的破壞，維持蛋白穩(wěn)定的構(gòu)象，腸道益生菌枯草芽孢能很好保護(hù)表達(dá)在其表面的抗原，并具有強(qiáng)大的佐劑功能。根據(jù)已知的豬、牛帶絳蟲(chóng)六鉤蚴18KD基因的序列，我們從亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴中克隆并鑒定了TA18基因。生物信息學(xué)分析表明，該基因與牛帶絳蟲(chóng)18KDA蛋白一致性達(dá)99％，與豬帶絳蟲(chóng)一致性達(dá)97，所以推斷該基因?yàn)閬喼迬Ы{蟲(chóng)18KDA基因，命名為T(mén)A18基因。18KD基因被公認(rèn)為是帶絳蟲(chóng)科最具有前途的疫苗候選基因，同時(shí)，豬帶絳蟲(chóng)TSOL18和TSOL45及細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)EG95的重組抗原免疫保護(hù)性效果已被充分證實(shí)，這類(lèi)蛋白的生物學(xué)功能未知，同源性也不高，但都有含有一個(gè)纖連蛋白III的功能域，推測(cè)該類(lèi)蛋白的免疫保護(hù)性取決于構(gòu)象表位而非線性表位，重組蛋白因不容易保持穩(wěn)定的構(gòu)象而限制其推廣應(yīng)用，我們利用生物信息學(xué)對(duì)TA18基因一級(jí)結(jié)構(gòu)的功能結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)其具有FNIII功能域。本研究在對(duì)TA18基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析和克隆表達(dá)的基礎(chǔ)上，從枯草桿菌基因組中擴(kuò)增芽孢衣殼蛋白COTC，將TA18基因克隆入COTC結(jié)構(gòu)基因的下游，采用枯草原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入枯草桿菌WB600并誘導(dǎo)芽孢生成，構(gòu)建PUS186COTCTA18重組枯草芽孢工程菌。展開(kāi)對(duì)TA18重組枯草芽孢的生物學(xué)特性研究，分析其所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答特征，對(duì)其免疫保護(hù)效果進(jìn)行評(píng)估，為搭建新型高效抗絳、囊蟲(chóng)病口服疫苗平臺(tái)奠定基礎(chǔ)。2、目的和意義以分類(lèi)地位介于豬帶絳蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)的亞洲帶絳蟲(chóng)作為突破點(diǎn)，充分發(fā)揮學(xué)科交叉優(yōu)勢(shì)，使用枯草芽孢桿菌作為表達(dá)載體，對(duì)亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18基因進(jìn)行原核表達(dá)，關(guān)于利用枯草芽孢表達(dá)帶絳蟲(chóng)候選抗原基因至今未見(jiàn)報(bào)道，探索以芽孢型益生菌候選抗原遞送系統(tǒng)刺激抗亞洲帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵感染的免疫特點(diǎn)，分析免疫應(yīng)答類(lèi)型、強(qiáng)度、及對(duì)攻擊感染的保護(hù)效果。本項(xiàng)目擬從中間宿主入手，研制豬、牛用口服疫苗，切斷傳播途徑，從而達(dá)到預(yù)防絳、囊蟲(chóng)病的目的。以帶絳蟲(chóng)功能基因組學(xué)研究為基礎(chǔ)，以新型原核表達(dá)平臺(tái)為手段，以實(shí)用化應(yīng)用成果為目標(biāo)，利用先進(jìn)的技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)基礎(chǔ)研究成果的轉(zhuǎn)化。3、方法31亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18基因的生物信息學(xué)分析及重組枯草芽孢工程菌的構(gòu)建311亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18基因生物信息學(xué)分析利用美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心NCBI網(wǎng)站的BLASTX對(duì)測(cè)序所得核酸序列進(jìn)行分析，用瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專(zhuān)家系統(tǒng)（EXPASY）提供的生物信息學(xué)工具對(duì)TA18基因所編碼蛋白的功能和特性進(jìn)行預(yù)測(cè)。PROTPARAM分析預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)。312亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18基因的克隆、表達(dá)鑒定亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)，孵化蟲(chóng)卵，提取六鉤蚴總RNA并合成CDNA，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增六鉤蚴TA18基因，鑒定PET28ATA18重組質(zhì)粒，誘導(dǎo)表達(dá)TA18重組蛋白，大量表達(dá)并純化，獲得純化蛋白，測(cè)定蛋白濃度。313TA18重組蛋白抗血清制備使用純化的TA18重組蛋白皮下注射免疫大鼠，獲得TA18特異性抗血清。314TA18的免疫原性和免疫反應(yīng)性分析用制備的TA18重組蛋白抗血清，WESTERNBLOTTING方法檢測(cè)TA18重組蛋白的免疫原性及免疫反應(yīng)性。313亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18重組枯草芽孢桿菌工程菌的構(gòu)建提取枯草桿菌基因組DNA，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增芽孢外殼蛋白COTC，目的基因COTC和TA18與質(zhì)粒PUS186連接，轉(zhuǎn)化枯草桿菌WB600原生質(zhì)體，構(gòu)建并鑒定PUS186COTCTA18融合表達(dá)載體，誘導(dǎo)芽孢生成，收集、定量芽孢，提取芽孢外殼蛋白并檢測(cè)。WESTERNBLOTTING方法檢測(cè)TA18重組枯草芽孢的免疫反應(yīng)性。32TA18重組枯草芽孢的生物學(xué)特性研究321TA18重組枯草芽孢的抗性評(píng)估配置模擬胃液和腸液，調(diào)節(jié)好PH值。將離心后的菌液重懸于模擬胃、腸液中，鋪板，計(jì)數(shù)。322重組芽孢表面TA18的免疫熒光、流式細(xì)胞儀檢測(cè)以大鼠抗TA18重組蛋白的免疫血清為一抗，熒光標(biāo)記抗大鼠IGG為二抗，檢測(cè)目的蛋白在芽孢表面的表達(dá)，同時(shí)，對(duì)重組芽孢進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。323TA18在亞洲帶絳蟲(chóng)的組織定位及階段表達(dá)研究以大鼠抗TA18重組蛋白的免疫血清為一抗，以綠色熒光標(biāo)記的抗大鼠IGG為二抗，檢測(cè)TA18基因在亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)、蟲(chóng)卵及囊尾蚴的組織定位，并在熒光顯微鏡下觀察、拍照。分別以亞洲帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)頭節(jié)CDNA文庫(kù)、成蟲(chóng)成節(jié)CDNA、成蟲(chóng)孕節(jié)CDNA及囊尾蚴CDNA文庫(kù)為模板，用合成引物擴(kuò)增，進(jìn)行階段表達(dá)分析。33TA18重組枯草芽孢免疫保護(hù)性效果評(píng)估331TA18重組枯草芽孢口服免疫家豬血清中IGG及糞便中IGA的含量變化研究設(shè)PUS186COTCTA18芽孢組、PUS186COTC芽孢組及常規(guī)感染組，口服免疫家豬，定期收集血清和糞便，ELISA法檢測(cè)血清中IGG及糞便中IGA的含量變化。332抗TA18多抗對(duì)亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴體外作用分離亞洲帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵，體外孵化六鉤蚴，實(shí)驗(yàn)分3組進(jìn)行體外殺傷六鉤蚴實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。333TA18重組枯草芽孢口服疫苗免疫保護(hù)性效果研究3331蟲(chóng)卵攻擊感染實(shí)驗(yàn)分三組重組枯草芽孢組（PUS186COTCTA18）、空載體枯草芽孢組（PUS186COTC）和常規(guī)感染組（用生理鹽水處理）口服免疫家豬后，用亞洲帶絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵攻擊，于30、40天，處死家豬，仔細(xì)檢查家豬體內(nèi)囊尾蚴寄生情況，計(jì)數(shù)蟲(chóng)荷。334實(shí)驗(yàn)感染家豬肝臟的病理學(xué)變化取各感染豬肝臟組織分別置于10甲醛內(nèi)固定后進(jìn)行常規(guī)石蠟切片，HE染色鏡檢。4、結(jié)果41亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18的生物信息學(xué)分析及重組枯草芽孢工程菌的構(gòu)建411TA18基因生物信息學(xué)分析生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示TA18基因序列與GENBANK中的牛帶絳蟲(chóng)18KD蛋白的一致性達(dá)99；與豬帶絳蟲(chóng)一致性達(dá)97，包含完整的開(kāi)放閱讀框，為全長(zhǎng)CDNA序列，序列長(zhǎng)度為396BP，編碼131個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)TA18蛋白質(zhì)的理論分子量為148104DA；等電點(diǎn)為1005，其他理化性質(zhì)均較穩(wěn)定。亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn)該基因含有一信號(hào)肽序列，蛋白翻譯后結(jié)構(gòu)特征預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)在30117位氨基酸處含有一個(gè)絳蟲(chóng)屬18KD基因共有的纖連蛋白FNⅢ型結(jié)構(gòu)域。412亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18基因的克隆、表達(dá)成功從亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴中擴(kuò)增出TA18基因，并克隆到原核表達(dá)載體PET28A上，通過(guò)雙酶切及DNA測(cè)序結(jié)果均表明重組質(zhì)粒PET28ATA18構(gòu)建成功。表達(dá)重組質(zhì)粒并獲得純化蛋白。WESTERNBLOTTING分析結(jié)果表明，重組TA18純化蛋白能被重組蛋白免疫的SD大鼠血清識(shí)別，具有較好的免疫原性；同時(shí)也能被帶絳蟲(chóng)病患者血清識(shí)別，說(shuō)明重組蛋白具有免疫反應(yīng)性。413TA18重組枯草芽孢工程菌的構(gòu)建提取枯草桿菌基因組，設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增出芽孢外殼蛋白COTC，將TA18基因克隆入COTC結(jié)構(gòu)基因的下游，構(gòu)建PUS186COTCTA18重組質(zhì)粒，采用枯草原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法將PUS186COTCTA18重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入枯草桿菌WB600，通過(guò)對(duì)陽(yáng)性克隆的篩選，用耗竭法使COTCTA18融合表達(dá)在芽孢表面，每升DSM液體培養(yǎng)所生成芽孢達(dá)11011。重組枯草芽孢表達(dá)的融合蛋白能被制備的抗血清識(shí)別。42TA18重組枯草芽孢的生物學(xué)特性研究421TA18重組枯草芽孢的抗性評(píng)估TA18重組枯草芽孢在模擬胃、腸環(huán)境中具有較高的耐受力和存活率，表明芽孢能耐受極端環(huán)境，能順利通過(guò)胃環(huán)境，到達(dá)腸道。422TA18在亞洲帶絳蟲(chóng)的組織定位及階段表達(dá)研究免疫熒光組織定位結(jié)果顯示TA18定位于成蟲(chóng)的表膜、蟲(chóng)卵的胚膜、囊尾蚴的體壁上。來(lái)自六鉤蚴的TA18基因，在成蟲(chóng)的頭節(jié)、成節(jié)、孕節(jié)以及囊尾蚴階段均有表達(dá)。423亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TA18重組枯草芽孢的免疫熒光定位及流式細(xì)胞儀檢測(cè)以大鼠抗TA18重組蛋白的免疫血清為一抗，熒光標(biāo)記抗大鼠（FITG標(biāo)記）為二抗PUS186COTCTA18重組芽孢表面可見(jiàn)綠色熒光。流式細(xì)胞儀檢測(cè)到TA18重組枯草芽孢（PUS186COTCTA18）有強(qiáng)熒光峰。43TA18重組枯草芽孢免疫保護(hù)性效果評(píng)估431TA18重組枯草芽孢口服免疫家豬血清中IGG及糞便中IGA的含量變化研究糞便中特異性IGA水平顯著高于非重組芽孢處理組及常規(guī)感染組，但血清IGG升高不明顯。432抗TA18多抗對(duì)亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴體外作用體外培養(yǎng)4D后，抗TA18多抗與對(duì)照組比較，殺蟲(chóng)率差異顯著（P433TA18重組枯草芽孢口服疫苗免疫保護(hù)性效果研究4331蟲(chóng)卵攻擊感染實(shí)驗(yàn)在蟲(chóng)卵攻擊后的第30、40天，可觀察到常規(guī)感染組和PUS186COTC組家豬肝臟上囊尾蚴數(shù)量明顯多于PUS186COTCTA18組，減蟲(chóng)率可達(dá)到754。434感染家豬肝臟的病理學(xué)變化囊尾蚴周?chē)母渭?xì)胞可見(jiàn)水腫空泡變性，組織內(nèi)較多嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)，囊尾蚴周?chē)M織表現(xiàn)為肉芽腫性炎。TA18重組芽孢免疫組、COTC芽孢免疫組與常規(guī)感染組囊尾蚴所致家豬肝臟病理變化未見(jiàn)明顯差異。5、結(jié)論51首次根據(jù)已知的豬、牛帶絳蟲(chóng)六鉤蚴18KD基因序列克隆出亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴18KD基因。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)顯示TA18包含完整的開(kāi)放閱讀框，序列長(zhǎng)度為396BP，編碼131個(gè)氨基酸。有一信號(hào)肽序列和纖連蛋白FNⅢ型功能結(jié)構(gòu)域。52對(duì)TA18基因進(jìn)行克隆表達(dá)，獲得純化蛋白。重組TA18純化蛋白具有較強(qiáng)的免疫原性和免疫反應(yīng)性，可以作為潛在的疫苗候選分子。但不適合作為特異的絳、囊蟲(chóng)病診斷抗原。53TA18定位于成蟲(chóng)的表膜、蟲(chóng)卵的胚膜和囊尾蚴的體壁上。TA18在亞洲帶絳蟲(chóng)卵、成蟲(chóng)的頭節(jié)、成節(jié)、孕節(jié)以及囊尾蚴階段均有表達(dá)。進(jìn)一步證明了TA18基因是疫苗候選分子。54成功構(gòu)建PUS186COTCTA18重組枯草芽孢工程菌，采用枯草原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將PUS186COTCTA18重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入枯草桿菌WB600，免疫熒光定位及流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示COTCTA18融合表達(dá)在芽孢表面。55枯草芽孢在模擬胃、腸環(huán)境中具有較高的耐受力和存活率。56免疫保護(hù)性效果研究顯示1）、體外殺傷實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗TA18血清中存在針對(duì)六鉤蚴的保護(hù)性抗體；2）、重組芽孢口服免疫家豬，糞便特異性IGA水平顯著高于對(duì)照組，血清IGG也有升高，但變化不明顯，說(shuō)明重組枯草芽孢能發(fā)揮免疫佐劑作用，活化腸粘膜上的相關(guān)淋巴組織，使SIGA抗體分泌增強(qiáng)；3）、TA18重組枯草芽孢的減蟲(chóng)率達(dá)到754，重組芽孢能對(duì)家豬產(chǎn)生明顯的保護(hù)性免疫；4）實(shí)驗(yàn)感染家豬肝臟，囊尾蚴寄生周?chē)母渭?xì)胞可見(jiàn)水腫空泡變性，組織內(nèi)較多嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)，并伴肉芽腫形成。

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文中國(guó)漢族女性重性抑郁障礙患者家族史的預(yù)測(cè)因素研究姓名張丹寧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師劉蘭芬20121115山東大學(xué)碩士學(xué)位論文簽署書(shū)面知情同意書(shū)。截至本研究，我們從全國(guó)21個(gè)省市的40個(gè)城市的51家省級(jí)精神衛(wèi)生中心和綜合醫(yī)院的精神科共納入患者1970例。2方法1評(píng)定工具①使用復(fù)合性國(guó)際診斷交談表CIDI對(duì)重性抑郁障礙進(jìn)行診斷。②使用家族史研究診斷標(biāo)準(zhǔn)FHRDC評(píng)估患者父母和同胞的抑郁癥病史。以上評(píng)定工具由CONVERGE團(tuán)隊(duì)從既往弗吉尼亞雙生子研究VATSPUD的訪談內(nèi)容中翻譯并修正。2評(píng)定方式所有問(wèn)卷填寫(xiě)和資料收集均通過(guò)與受訪者面對(duì)面的訪談完成。所有訪談內(nèi)容全部編入由牛津大學(xué)開(kāi)發(fā)的被稱(chēng)作SYSQ的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，以中英文雙語(yǔ)顯示。訪談員在進(jìn)行訪談前要經(jīng)過(guò)CONVERGE項(xiàng)目組至少一周的培訓(xùn)，訪談過(guò)程同時(shí)使用錄音筆錄音，平均每個(gè)訪談時(shí)間約為2小時(shí)。3統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS170對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述和統(tǒng)計(jì)分析，家族史與數(shù)值變量的單因素分析使用LO西STIC逐步回歸，與二分類(lèi)變量的單因素分析使用卡方檢驗(yàn)，多因素分析采用二分類(lèi)LOGISTIC逐步回歸分析。矗士田皇口術(shù)11970例重性抑郁障礙患者中有69人35％沒(méi)有正確完成家族史問(wèn)卷被排除本研究，因此納入研究的患者共1901例。所有190L例重性抑郁障礙患者中，報(bào)告有至少1名～級(jí)親屬同時(shí)患有抑郁癥者有624例，家族史陽(yáng)性率為328％。2以有無(wú)家族史的二分類(lèi)變量為因變量，以可能預(yù)測(cè)重性抑郁障礙患者家族易感性的因素作為自變量，分別進(jìn)行單因素分析。選入的自變量包括首發(fā)年齡，復(fù)發(fā)次數(shù)，社會(huì)功能受損程度，發(fā)作持續(xù)時(shí)間，DSMIVA診斷標(biāo)準(zhǔn)的9項(xiàng)癥狀，符合DSMIVA診斷標(biāo)準(zhǔn)的癥狀總數(shù)，其他抑郁癥狀如易怒、無(wú)望感、哭泣、無(wú)助感、焦慮／緊張，起病有無(wú)生活事件等20項(xiàng)。其中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異PO05的因素共有5項(xiàng)最嚴(yán)重抑郁發(fā)作前無(wú)明顯誘因，存在兩項(xiàng)DSMIVA診斷標(biāo)準(zhǔn)的癥狀無(wú)價(jià)值感和注意力集中困難，缺乏其他抑郁癥狀易怒和焦慮／緊張。否認(rèn)存在無(wú)助感、首發(fā)年齡早和符合DSMIVA診斷標(biāo)準(zhǔn)的癥狀總數(shù)這3項(xiàng)臨床特征對(duì)重性抑郁障礙患者一級(jí)親屬的患病風(fēng)險(xiǎn)具有一定的影響，但未發(fā)現(xiàn)其結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05，尸007，P008。3把單因素分析時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的5項(xiàng)臨床特征納入多因素回歸方程分析，結(jié)果顯示，最嚴(yán)重抑郁發(fā)作前無(wú)明顯誘因、疾病發(fā)作時(shí)無(wú)易怒和焦慮／緊張4

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名束暉日期20／F’5、S學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部?jī)?nèi)容，可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)?？梢韵驀?guó)家有關(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。保密論文在解密后遵守此規(guī)定保密論文注釋本學(xué)位論文屬于保密論文，保密期限為年。學(xué)位論文作者簽名L冪暉日期矽／I6、5指導(dǎo)教師簽名日期；島IF支6一亞洲生活經(jīng)歷27二成年后對(duì)歐洲文明的接受30三文化的懸空33結(jié)語(yǔ)38參考文獻(xiàn)40后記45

簡(jiǎn)介：柳青很注重小說(shuō)語(yǔ)言的提煉，他廣泛吸收中外經(jīng)典名著中熔鑄的文學(xué)語(yǔ)言，并將其與經(jīng)過(guò)加工提煉的民間語(yǔ)言結(jié)合在一起，形成具有濃厚的生活氣息又不失文雅的語(yǔ)言風(fēng)格。柳青的小說(shuō)是一種抒情性很強(qiáng)的介入性敘事，他毫無(wú)保留地將自己的情感傾注在字里行間，常常在客觀描述后加入自己對(duì)上一段場(chǎng)景描寫(xiě)的解釋?zhuān)蛘邚那楣?jié)的發(fā)展中自然生發(fā)對(duì)事件、對(duì)人物的評(píng)價(jià)性敘述。在小說(shuō)人物的塑造上，他區(qū)分不同人物的社會(huì)地位和個(gè)體氣質(zhì)，讓人物的外部動(dòng)作配合人物語(yǔ)言來(lái)表現(xiàn)人物內(nèi)心世界的變化，從而推動(dòng)情節(jié)的發(fā)展。柳青同時(shí)是一個(gè)心理描寫(xiě)和景物描寫(xiě)的高手，常常選取一個(gè)真實(shí)可信的第三人視角，通過(guò)描寫(xiě)一個(gè)或多個(gè)人的思想情感的變化來(lái)“見(jiàn)證”整個(gè)事件的發(fā)展，巧妙地控制著小說(shuō)距離，讓讀者產(chǎn)生身臨其境之感。柳青對(duì)景物的描寫(xiě)與中國(guó)傳統(tǒng)詩(shī)學(xué)提倡的“不隔”審美是一脈相承的。柳青的經(jīng)驗(yàn)對(duì)路遙的影響很大。路遙繼承了柳青情感介入的敘述特點(diǎn)，但他不滿(mǎn)足于高高在上地發(fā)表評(píng)論，而是與人物的即時(shí)感受交織在一起自然而然地發(fā)出議論。他不刻意拔高人物的“崇高性”，也不簡(jiǎn)單地干涉人物的愛(ài)情心理，而是盡量發(fā)表更為人性的“道德批判”。他對(duì)柳青的“激情敘述”進(jìn)行改造，理智又不乏溫情地提出自己對(duì)人生的理解。路遙繼承了柳青的心理現(xiàn)實(shí)主義，為了更貼近讀者的閱讀心理，他更多地運(yùn)用了“展示”而非“講述”。在景物描寫(xiě)上，路遙繼承了柳青的“不隔”描寫(xiě)手法，賦予了描寫(xiě)語(yǔ)言更精致、更具詩(shī)意的畫(huà)面感和氛圍感。用小說(shuō)修辭學(xué)的理論來(lái)研究小說(shuō)，是近年來(lái)小說(shuō)研究的新視角。本文將以柳青的創(chuàng)業(yè)史和路遙的平凡的世界為考察對(duì)象，試圖從敘述語(yǔ)言、人物語(yǔ)言、描寫(xiě)語(yǔ)言三方面窺探路遙小說(shuō)對(duì)柳青修辭經(jīng)驗(yàn)的繼承和超越。

簡(jiǎn)介：90年代以來(lái)，一批女性作家不約而同地涉足“家族史”題材，創(chuàng)作了一批全新的家族小說(shuō)，它們形成了一個(gè)顯著的文體特征，即如相同的寫(xiě)作身份女性作家、相同的敘事模式女性視角、相似的人物設(shè)置以女性人物為主人公，相似的故事內(nèi)容以家族里的女性生活內(nèi)容為情節(jié)與場(chǎng)景主干。本文把這一系列的長(zhǎng)篇小說(shuō)命名為“女性家族小說(shuō)”。寫(xiě)作身份的性別差異，造成了“女性家族小說(shuō)”在人物、故事、結(jié)構(gòu)與文體等方面的顯著的“女性化”特征。立足女作家們的創(chuàng)作歷程可以看到，當(dāng)女作家們刻意將“家族史”置入一個(gè)女性敘述視角的時(shí)候，她實(shí)際上是在借以建立一種真正屬于女作家自己的敘事策略，即不僅意在對(duì)于“男性家族小說(shuō)”題材與故事形式的認(rèn)同，更意在對(duì)它的突圍?！芭约易逍≌f(shuō)”在寫(xiě)作姿態(tài)上的種種“突圍”之舉，不僅意在宣泄其女性寫(xiě)作身份遭遇所謂“男權(quán)”文化語(yǔ)境的叛逆情緒，更意在填補(bǔ)中國(guó)現(xiàn)代家族小說(shuō)史的“空白之頁(yè)”。從“故事”層面考察，“女性家族小說(shuō)”情節(jié)結(jié)構(gòu)的安排似乎遵循了一個(gè)基本原則，即通過(guò)“家族史”的敘述串聯(lián)其中“祖母母親女兒”之間代際演化的情節(jié)主干，講述家族中女性的生活史與命運(yùn)史，從而構(gòu)建出女作家心目中的“女性史”。無(wú)論以何種方式解讀“女性家族小說(shuō)”在中國(guó)現(xiàn)代小說(shuō)史上的價(jià)值及其意義，女作家們將女性從“家族史”的幕后推入前臺(tái)的敘事策略，使得她們筆下的女性、男性人物形象系列，比之此前的“男性家族小說(shuō)”，有了顯著的差異，這種差異，不但表現(xiàn)在言行，更表現(xiàn)在性格與氣質(zhì)?！芭约易逍≌f(shuō)”的文體選擇，從根本上保證了女作家們的寫(xiě)作姿態(tài)及其敘事策略。

簡(jiǎn)介：泉州作為海上絲綢之路的起點(diǎn)，享有“世界宗教博物館”的美譽(yù)。宋元時(shí)期，泉州海上交通貿(mào)易極大發(fā)展，并躍居中國(guó)第一大港；同時(shí)，隨著海外貿(mào)易的逐步繁榮，大量外商涌入泉州，定居者為數(shù)甚眾，泉州社會(huì)形成“漢夷雜處”、“市井十洲人”的獨(dú)特局面，各種海外宗教都在此留下印跡。與此相應(yīng)，地方經(jīng)濟(jì)的繁榮助推了城市建設(shè)的大力發(fā)展，而在充分利用當(dāng)?shù)刎S富石材資源的基礎(chǔ)上，石建筑及其營(yíng)建技藝則應(yīng)時(shí)而起，在1114世紀(jì)間由逐步積累而至極盛，形成中國(guó)石建筑發(fā)展史上的一座高峰；多元文化特征更為泉州石建筑注入了獨(dú)樹(shù)一幟的形式與風(fēng)格。宋元石建筑成為泉州最輝煌的歷史和最鮮明的特征之一。1114世紀(jì)泉州石建筑形成了一個(gè)完整的區(qū)系石建筑發(fā)展序列，這一建筑體系、風(fēng)格、技術(shù)的形成、演變、衰落的發(fā)展過(guò)程及其推動(dòng)機(jī)制是本論文關(guān)注的重心。論文中重點(diǎn)闡述了兩方面的內(nèi)容其一為建筑體系發(fā)展及其特征演變的深層機(jī)制，即區(qū)域地理結(jié)構(gòu)、社會(huì)結(jié)構(gòu)、文化結(jié)構(gòu)的影響問(wèn)題；論文借助年鑒學(xué)派“長(zhǎng)時(shí)段”理論進(jìn)行了整體剖析，將石建筑發(fā)展還原到其深層歷史全景中去。其二為建筑形式、風(fēng)格、技術(shù)的形成、演變過(guò)程，即建筑的傳播與交融問(wèn)題；論文以傳播學(xué)相關(guān)理論為指導(dǎo)，深入解析了泉州石建筑技術(shù)與風(fēng)格的傳播途徑、傳播路線、傳播模式、傳播特征等系列問(wèn)題。1114世紀(jì)泉州社會(huì)及石構(gòu)建筑在整個(gè)發(fā)展序列中呈現(xiàn)了兩種不同的特質(zhì)，論文從石建筑自身發(fā)展邏輯出發(fā)，將這一發(fā)展周期界定為成型期、轉(zhuǎn)型期兩個(gè)階段，并從傳播語(yǔ)境的角度解析了兩個(gè)階段各自不同的社會(huì)結(jié)構(gòu)、文化結(jié)構(gòu)特征，以及由此引致的石構(gòu)建筑的顯著變異。兩個(gè)階段各自不同的傳播模式及傳播效果在論文中是著力論述的重點(diǎn)問(wèn)題之一。結(jié)構(gòu)與傳播是區(qū)域建筑發(fā)展的兩大關(guān)鍵問(wèn)題，本論文圍繞這一主題展開(kāi)而取得的一些研究成果，將能為相關(guān)領(lǐng)域的研究提供借鑒作用。關(guān)鍵詞泉州石構(gòu)建筑1114世紀(jì)海上絲綢之路傳播學(xué)區(qū)系建筑

簡(jiǎn)介：目的評(píng)價(jià)經(jīng)皮腎鏡取石術(shù)對(duì)有既往開(kāi)放手術(shù)史的腎結(jié)石患者的臨床療效。方法回顧性分析了2010年3月到2012年6月在我院診治的155例病例腎結(jié)石患者資料，根據(jù)是否有過(guò)開(kāi)放手術(shù)取石史將病例分為兩組，觀察組（有開(kāi)放手術(shù)史），對(duì)照組（無(wú)開(kāi)放手術(shù)史）。比較兩組病例的一期手術(shù)時(shí)間，手術(shù)出血量，術(shù)后并發(fā)癥，結(jié)石清除率，住院天數(shù)等方面是否有差別。結(jié)果觀察組患者72例，一期完全清除腎結(jié)石58側(cè)，清石率694％。平均手術(shù)時(shí)間22±10小時(shí)平均術(shù)中出血1526±759ML。術(shù)后19例患者有出血，術(shù)后感染8例，術(shù)后予以對(duì)癥治療痊愈出院。對(duì)照組患者83例，一期完全清除腎結(jié)石62側(cè)，清石率681％。平均手術(shù)時(shí)間21±08小時(shí)平均術(shù)中出血1033±587ML。術(shù)后11例患者有出血，術(shù)后感染10例。術(shù)后予以對(duì)癥治療痊愈出院結(jié)論既往有開(kāi)放手術(shù)史腎結(jié)石病人，行PCNL治療與無(wú)手術(shù)史者相比，在術(shù)中出血量、術(shù)后出血率方面較后者增加，在一期結(jié)石清除率，手術(shù)時(shí)間，術(shù)后住院天數(shù)方面無(wú)明顯差別。

簡(jiǎn)介：吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的碩士學(xué)位論文，是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者躲平噍鉛日期協(xié)多年身月紉EL內(nèi)容提要書(shū)史會(huì)要是元末明初陶宗儀的一部以記載書(shū)家為主的書(shū)學(xué)通史著作，文中涉及的書(shū)家數(shù)千人之多，內(nèi)容齊全，史料豐富，皆前所罕見(jiàn)，因此成為后來(lái)著述征引的重要著作，在中國(guó)書(shū)法史上占有十分重用的地位。然而目前學(xué)者對(duì)書(shū)史會(huì)要的研究雖逐步深入，卻還有很多問(wèn)題亟待解決，如對(duì)書(shū)史會(huì)要進(jìn)行的補(bǔ)正著作和文章還很少見(jiàn)，故而這片領(lǐng)域需要挖掘的工作尚多。本文試從?？?、補(bǔ)正入手，通過(guò)版本間的對(duì)比，以期最大程度的還原陶書(shū)原貌，努力再現(xiàn)歷史的真實(shí)。其中發(fā)現(xiàn)了書(shū)史會(huì)要中一些史料上的錯(cuò)誤，以及對(duì)書(shū)家評(píng)價(jià)等問(wèn)題進(jìn)行較正和補(bǔ)充。關(guān)鍵詞書(shū)史會(huì)要唐代部分陶宗儀校勘補(bǔ)正

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文云南血吸蟲(chóng)病的流行史云南血吸蟲(chóng)病的流行史以洱源縣、巍山縣為例的考察以洱源縣、巍山縣為例的考察學(xué)校上海交通大學(xué)學(xué)院人文學(xué)院班級(jí)B1109091學(xué)號(hào)1110909017作者胡晴專(zhuān)業(yè)專(zhuān)門(mén)史導(dǎo)師李玉尚（教授）上海交通大學(xué)人文學(xué)院上海交通大學(xué)人文學(xué)院20142014年1月

簡(jiǎn)介：霍亂是一種危害性極大的傳染病，被認(rèn)為是“19世紀(jì)最令人害怕、最引入注目的世界病”，當(dāng)它于1831年首次出現(xiàn)于英國(guó)時(shí)，引起巨大的社會(huì)反應(yīng)。隨后它又分別于18481849年、18531854年和1866年入侵英國(guó)?；魜y出現(xiàn)后，英國(guó)社會(huì)各界紛紛尋找治愈良方，藥劑師斯諾于1853年用大量證據(jù)揭示了霍亂肆虐的原因飲用水污染，特別是泰晤士河的污染。霍亂爆發(fā)伊始，時(shí)人就開(kāi)始研究霍亂及其傳播方式，歷史學(xué)領(lǐng)域的霍亂研究主要是從政治史、社會(huì)史的角度研究。在政治史視角下，研究者認(rèn)為霍亂是“窮人的疾病”，貧民窟是霍亂肆虐的溫床，并且主要關(guān)注政府為消除霍亂的種種舉措；在社會(huì)史視角下，霍亂不僅被認(rèn)為是窮人的疾病，更是“一種社會(huì)病”，是由糟糕的公共衛(wèi)生狀況引起的，窮人因其骯臟的生活環(huán)境而成為它的最大受害者。這兩種觀點(diǎn)各有側(cè)重，但都存在不足，沒(méi)有全面考慮環(huán)境與人、環(huán)境與疾病的相互關(guān)系，因而需要從新的角度繼續(xù)研究霍亂。本文試圖在前人研究的基礎(chǔ)上，從環(huán)境史的角度重新探討19世紀(jì)發(fā)生在英國(guó)的霍亂，以加深對(duì)人與環(huán)境、人與霍亂關(guān)系的認(rèn)識(shí)。從當(dāng)時(shí)英國(guó)的公共衛(wèi)生狀況以及飲用水污染情況來(lái)看，霍亂不僅僅是窮人的疾病，一種“社會(huì)病”，更是人與環(huán)境的關(guān)系失衡的惡果。當(dāng)時(shí)的人為了追求生產(chǎn)效益，沒(méi)有考慮到工業(yè)生產(chǎn)對(duì)環(huán)境帶來(lái)的不利影響，泰晤士河等河流原本是居民的日常飲用水的來(lái)源，可是由于河流被污染，河水中含有霍亂病菌，結(jié)果養(yǎng)育生命的河流成為居民的“無(wú)形殺手”，使眾多的居民尤其是窮人深受其害。19世紀(jì)英國(guó)霍亂肆虐的教訓(xùn)對(duì)于我們今天保護(hù)環(huán)境，預(yù)防霍亂的再爆發(fā)，有一定的借鑒意義。

簡(jiǎn)介：目的探討中國(guó)正常糖耐量人群胰島功能及胰島素敏感性隨增齡的變化。方法以200708年全國(guó)糖尿病及代謝綜合征患病率變遷調(diào)查中的34239例正常糖耐量者NGT為研究對(duì)象，采用標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)卷，獲取有關(guān)人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征、個(gè)人和家庭醫(yī)療史以及生活方式危險(xiǎn)因素的資料。采用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量血壓、體重、身高和腰圍。對(duì)每位受試者禁食10小時(shí)后行759口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，測(cè)量血糖、胰島素、血脂等生化指標(biāo)水平。按照1999年WHO珍斷標(biāo)準(zhǔn)確定正常糖耐量人群，并計(jì)算出反映胰島素分泌HOMAB、△130△G30、INSAUC30GLUAUC30、INSAUC120GLUAUC120、胰島素敏感性HOMAIR、MATSUDA指數(shù)、胰島功能處置指數(shù)HOMABHOMAIR、DI30、DI120的指標(biāo)。結(jié)果1單因素線性回歸結(jié)果發(fā)現(xiàn)在總體人群和男性中反映胰島素分泌指標(biāo)HOMAB、△I30△G30、INSAUC30GLUAUC30及HOMAIR均與年齡呈負(fù)相關(guān)關(guān)系、MATSUDA指數(shù)與年齡呈正相關(guān)關(guān)系；女性中反映胰島素抵抗及敏感性的指標(biāo)和年齡無(wú)相關(guān)關(guān)系。2在同歸方程中納入BMI和腰圍進(jìn)行多因素線性回歸結(jié)果發(fā)現(xiàn)校正了肥胖相關(guān)指標(biāo)的影響后，總體人群和男性中的相關(guān)結(jié)果仍然有統(tǒng)計(jì)意義，但在女性當(dāng)中，HOMAB與年齡無(wú)相關(guān)關(guān)系，而MATSUDA指數(shù)與年齡呈正相關(guān)關(guān)系，HOMAIR與年齡呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。3處置指數(shù)中HOMABHOMAIR無(wú)論校正BMI和腰圍與否均與年齡無(wú)線性相關(guān)，而DI30、DI120無(wú)論校正BMI和腰圍與否均與年齡呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論在中國(guó)NGT人群中，基礎(chǔ)胰島素分泌量隨增齡降低，住校正胰島素敏感性后基礎(chǔ)胰島功能與年齡不存在有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的線性關(guān)系；口服葡萄糖負(fù)荷后早相及全時(shí)相的胰島素分泌和胰島功能均隨增齡而下降；腆島素敏感性并未隨著增齡而導(dǎo)致的體重及體脂分布變化而減與弱。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多頸脊柱姿勢(shì)及預(yù)負(fù)荷史對(duì)頸椎間盤(pán)扭轉(zhuǎn)強(qiáng)度影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：指導(dǎo)教師余蔚教授指導(dǎo)小組成員余欣姜鵬溫海清教授副教授副教授目錄中文摘要3ABSTRACT5一、緒論問(wèn)題提出與先行研究回顧71、問(wèn)題的提出72、先行研究回顧83、研究策略與章節(jié)安排13二、宰相史彌遠(yuǎn)專(zhuān)權(quán)的起源與建立／51、政變集團(tuán)的形成與玉津園之變152、反近習(xí)與宰相政治的回歸173、太子參決與政治決策主體和空間的轉(zhuǎn)移234、“刀筆吏”與“秀才議”權(quán)力的重新編組30三、清流議事之臣在權(quán)相時(shí)代的表現(xiàn)341、學(xué)術(shù)與政治嘉定初朝廷對(duì)道學(xué)的態(tài)度342、“昆命元龜”事件與歲幣問(wèn)題中真德秀的立場(chǎng)363、理宗即位與雷川之變40四、皇帝后史彌遠(yuǎn)時(shí)代的“獨(dú)斷”局面461、充滿(mǎn)矛盾的端平更化462、端平入洛與襄陽(yáng)之叛483、理宗“獨(dú)斷”政治53五、結(jié)論59附表一、嘉定道學(xué)先賢封謚狀況據(jù)李心傳‘道命錄整理61附表二、嘉定道學(xué)先賢封謚狀況黃震黃氏日抄整理61參考文獻(xiàn)以撰者姓氏拼音排序一62

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多家族史在社區(qū)高血壓健康管理中應(yīng)用的探索性研究.pdf精彩內(nèi)容。

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