活性三肽法氏囊素的液相合成研究.pdf

1、法氏囊素(bursin，BS)是從禽類的法氏囊(bursa.of fabricius，BF)中最先發(fā)現(xiàn)的一種活性三肽，化學(xué)構(gòu)成為L-Lys-His-Gly-NH<,2>，又稱囊素三肽。研究表明，BS不僅能有效促進禽類B淋巴細胞前體的分化和增殖，而且對哺乳動物及人類淋巴細胞也具有明顯的免疫活性和生理學(xué)活性。此外，BS可在短時間內(nèi)促進動物增重，高濃度的BS能導(dǎo)致雜交瘤細胞凋亡，因此，它是一種高效的免疫增強劑，有望同胸腺素、干擾素一樣應(yīng)用于臨

2、床，以提高機體免疫力，治療免疫缺陷癥及癌癥。本論文對多肽的合成方法和法氏囊素的生物活性進行了綜述，研究了法氏囊素的液相合成方法和工藝。 以保護性氨基酸Boc-Lys-(Boc)-OH-DCHA，F(xiàn)moc-His-(Trt)-OH、Gly-NH<,2>·HCl為原料，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)為縮合劑，采用碳二亞胺法(DCC法)，從C端向N端依次接肽，TLC跟蹤反應(yīng)進程，經(jīng)過四步合成了活性三肽法氏囊素BS。反應(yīng)總產(chǎn)率為62.7％，

3、BS的純度大于90％。 通過優(yōu)化實驗，建立了合成BS的適宜工藝：在Fmoc-His-(Trt)-Gly-NH<,2>的合成反應(yīng)中，首先將原料Fmoc-His-(Trt)-OH、Gly-NH<,2>-HCl在50％(V/V)四氫呋喃(THF)的水溶液預(yù)混合30 min，然后在0℃一次性加入DCC。投料比為Fmoc-His-(Trt)-OH：DCC：Gly-NH<,2>.HCl=1：6：15時，反應(yīng)最理想，產(chǎn)率為95％；Fmoc保護

4、基的脫除采用.50％(V/V)二乙胺的二氯甲烷溶液為脫保護試劑，室溫反應(yīng)8小時以上，脫除徹底，且后處理簡單；對于Boc-Lys-(Boc)-His-(Trt)-Gly-NH<,2>的合成反應(yīng)，選擇0℃和投料比為L-His一(Trt)一Gly-NH<,2>：Boc-Lys-(Boc)-OH：DCC=1：2：2時，產(chǎn)率可達90％；選擇50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液室溫反應(yīng)30 min，可一步脫除Boc基和Tn基。 重點考察了DCC縮合

5、反應(yīng)中的影響因素。反應(yīng)溶劑最終選擇低沸點、可與水混合的四氫呋喃作為基本溶劑。羧基在活化之前，與氨基組分預(yù)混合30 min以形成離子鍵，可以阻止副反應(yīng)的發(fā)生，而氨基的游離與否對反應(yīng)并無明顯影響。Fmoc-His-(Trt)-Gly-NH2的合成反應(yīng)投料比為Fmoc-His-(Trt).OH：DCC：Gly-NH<,2>·HCl=1：6：15時，F(xiàn)moc-His-(Trt)-OH底物利用率高，副反應(yīng)發(fā)生少。Boc-Lys-(Boc)-His

6、-(Trt)-Gly-NH<,2>的合成反應(yīng)投料比為L-His-(Tn)-Gly-NH<,2>：Boc-Lys-(Boc)-OH：DCC：1：2：2時，產(chǎn)率可達90％。其反應(yīng)最佳條件均為：溫度0℃，時間6-8 h，靜置過夜。經(jīng)過多次選擇，用50％(V/V)二乙胺的二氯甲烷溶液脫除Fmoc基8 h以上，50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液室溫脫除Boc基、Tn基30 min可以獲得理想的效果?？s合反應(yīng)后處理采取酸洗，堿洗除去底物，乙酸乙酯沉淀，除