分子印跡聚合物富集新免蛋白pFKBP23及合成DNA梳狀高分子的研究.pdf

1、本人的工作分為兩個部分，第一部分的工作內(nèi)容是用蛋白質(zhì)印跡聚合物分離富集天然蛋白FKBP23。第二部分的工作內(nèi)容是在DNA鏈的指定位點上修飾高分子鏈PEG的研究。
　　 分子印跡技術(shù)源于20世紀(jì)40年代的免疫學(xué)。它是一種模擬抗體-抗原相互作用的人工生物模板技術(shù)，可以針對不同的目的，人工合成出具有特定選擇性識別位點的模板聚合物。以蛋白質(zhì)為模板的相關(guān)研究多集中在天然復(fù)雜生物素的富集和提取上。目前為止，用分子印跡聚合物代替生物抗體來研究

2、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的報道還很少見。
　　 第一部分的工作是用分子印跡技術(shù)從豬肝中提取和富集天然蛋白FKBP23。合成具有羧基和吡啶雙重識別基團(tuán)側(cè)鏈的輔助識別聚合物鏈(ARPCs)。將在大腸桿菌中克隆表達(dá)的pig FKBP23(FK506 binding protein23)模板蛋白與其進(jìn)行自組裝，而后于固相載體上，將該組裝體與丙烯酰胺進(jìn)行交聯(lián)聚合反應(yīng)，洗脫模板后得到蛋白質(zhì)印跡聚合物，以其作為抗體取代物吸附內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體(End

3、oplasmicreticulum，ER)提取物來提取天然蛋白FKBP23，天然pFKBP23被富集了123倍。這表明了用克隆蛋白質(zhì)做模板制備的分子印跡聚合物可以用來富集內(nèi)質(zhì)網(wǎng)體中的天然的微量蛋白質(zhì)。
　　 目前含DNA高分子的研究主要利用共價鍵和非共價鍵作用(靜電作用)合成復(fù)合物，用于運輸治療基因，DNA檢測，合成新型納米材料和合成膠體。這些復(fù)合物包括DNA-CL自組裝復(fù)合物，直鏈狀和梳狀嵌段共聚物。DNA被修飾的位點基本都在

4、鏈端的堿基上，也有少部分在鏈端的糖環(huán)上。然而，目前還沒有把高分子鏈接枝到DNA的磷酸骨架上構(gòu)建高分子材料的研究報道。
　　 在第二部分的研究中，我們將帶有炔基和重氮基這兩種官能團(tuán)的活性小分子，采用無催化的O-H插入反應(yīng)，特異性地修飾到DNA分子磷酸骨架磷原子的羥基上，采用核磁共振和MADIL-TOF對其進(jìn)行表征。在成功修飾了小分子后，采用click反應(yīng)，將端基修飾上疊氮基團(tuán)的高分子鏈PEG接合到修飾后的DNA鏈上，形成梳狀結(jié)構(gòu)。