觀察小鼠睪丸染色體的數(shù)目及其形態(tài)特征

1、觀察小鼠睪丸染色體的數(shù)目及其形態(tài)特征 觀察小鼠睪丸染色體的數(shù)目及其形態(tài)特征實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.初步掌握小鼠睪丸細(xì)胞染色體標(biāo)本的基本制作過程和 Giemsa 染色法，了解各操作步驟的原理。2.觀察小鼠睪丸染色體的數(shù)目及其形態(tài)特征；3.認(rèn)識不同生物染色體的特征，學(xué)會做染色體組型圖 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理(一) 制作染色體標(biāo)本的先決條件： 1.細(xì)胞具有旺盛的分裂能力（a.選擇活躍的組織如睪丸，骨髓。 b.施加藥物使細(xì)胞分裂如PHA） 2.設(shè)法

2、得到大量中期細(xì)胞，秋水仙素處理。 3.染色體特征： 1. 數(shù)目（2n=？） 2. 長度（絕對長度、相對長度） 3. 著絲粒位置（M\SM\ST\T） 4. 隨體與次縊痕的數(shù)目、大小和位置 5. 帶型分析 (二) 操作方法 利用睪丸細(xì)胞的制片技術(shù)雖然需要離心以及細(xì)致的操作，但其基本程序是簡便的。在小鼠睪丸中，細(xì)胞有絲分裂和減數(shù)分裂比較旺盛，因此不需要體外培養(yǎng)就可以直接得到分裂中期細(xì)胞。通過小鼠睪丸得到染色體比較簡便，一般不需要無菌操作。用

3、秋水仙素作為有絲分裂的抑制劑。 由于小鼠睪丸細(xì)胞分裂活動旺盛，具有高度的分裂能力，本實(shí)驗(yàn)采用這一材料，通過前處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體標(biāo)本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進(jìn)行染色體組型分析。 減數(shù)分裂是細(xì)胞分裂染色體數(shù)目減半時(shí)發(fā)生在性細(xì)胞的形成過程中。哺乳動物在性成熟以后，精巢內(nèi)的性細(xì)胞總是在分批分期不斷的成熟，因此，對哺乳動物的精巢進(jìn)行一定的技術(shù)處理，隨時(shí)都可以獲得減數(shù)分裂過程中各個時(shí)期染色體的標(biāo)本。 對于小

4、鼠精巢染色體標(biāo)本的制作，一般包括以下幾個要點(diǎn)：①用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細(xì)胞分裂停滯在中期, 使中期染色體停留在赤道面處；②用低滲法使細(xì)胞膨脹, 以至于在滴片時(shí)細(xì)胞脹破, 使細(xì)胞的染色體鋪展到載玻片上；③空氣干燥法可使細(xì)胞的染色體在載片上展平,經(jīng) Giemsa 染色后便可觀察到染色體的顯微圖象。 (三) 中期染色體的特征 1、突出在紡錘絲的牽引下，染色體的著絲點(diǎn)集中到細(xì)胞中央的道板上； 2、DNA 高度螺旋化。短粗的染

5、色體清晰可見，染色體數(shù)目形態(tài)穩(wěn)定，便于觀察； 3、由于染色體高度集中，造成紡錘體清晰可見。 通過本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果看，本實(shí)驗(yàn)要想做的較好不太容易，需要嫻熟的技術(shù)和耐心。(四) 原理分析 通過獲取小鼠睪丸細(xì)胞（分裂能力強(qiáng)） ，本實(shí)驗(yàn)采用這一材料，通過前處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體標(biāo)本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進(jìn)行染色1．細(xì)胞完整，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上； 2．染色體形態(tài)和分布良好，最好無重疊，即使有個

6、別重疊，也要能明確辯認(rèn)，以免差錯； 3．所觀察的細(xì)胞處于同一有絲分裂階段（分裂中期） ，即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣，在所觀察的細(xì)胞周圍，沒有離散的單個或多個染色體存在，以免影響觀察和計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果A 圖染色體 40 條；B 圖染色體 36 條。結(jié)果分析與討論 結(jié)果分析與討論1. 視野中有較多的精細(xì)胞影響觀察，更有許多沒有漲破的細(xì)胞?？赡苡捎诩尤牍潭ㄒ翰粔?，低滲時(shí)間也不夠，而且溫度上也過低。2. 染色體沒有分散開，較

7、多染色體凝聚成團(tuán)狀，影響了觀察計(jì)數(shù)，可能由于滴片距離不足，細(xì)胞吹散和摔打工作沒有做好。3. 處于分裂中期的細(xì)胞數(shù)量太少，導(dǎo)致很難找到中期染色體?？赡苁堑蜐B時(shí)間，滴片高度，秋水仙素處理的時(shí)間和用量等因素的影響。4. A 圖染色體約為 40 個，染色體展開程度較差，成球狀，但易于計(jì)數(shù)；B 圖染色體展開程度比前者大，可觀察到 u 型及 v 型染色體，但染色體數(shù)目約為 36 條（有重疊難以準(zhǔn)確計(jì)數(shù)） ，存在染色體丟失現(xiàn)象，可能是在吹打的過程中丟