產纖維素酶高溫放線菌產酶特性研究及其多相分類.pdf

1、從四川簡陽、都江堰、溫江、大邑、夾江、彭州、峨眉以及雅安、名山和四川農業(yè)大學的教學科研園區(qū)采集堆肥樣品，分離獲得33株高溫放線菌，篩選獲得了一株具有較好纖維素分解效果的菌株CN9，對其產酶條件進行了研究。采用多相分類技術對高溫放線菌代表菌株CN9和DY19的分類地位進行了分析。研究結果如下： 1.用纖維素剛果紅培養(yǎng)基對分離到的33株高溫放線菌進行纖維素分解菌的初篩，得到5株有較好分解效果的菌株；用赫奇遜培養(yǎng)基做濾紙失重實驗對初篩

2、所得5株菌株進行復篩，菌株CN9對濾紙分解效果最好。 2.對CN9進行了液體發(fā)酵培養(yǎng)和固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)以測定其濾紙酶、C<,1>酶、C<,x>酶。液體發(fā)酵的濾紙酶活力為0.096U/g，C<,1>酶活力為0.062U/g，Cx酶活力為3.866 U/g；固體發(fā)酵濾紙酶活力為3.25U/g，C<,1>酶為0.06U/g，CMC酶為14.6 U/g。以液體發(fā)酵CMCase對菌株CN9產酶的條件作了研究，結果表明最佳碳源為麩皮，最佳氮源為

3、大豆粉，Ca<'2+>對產酶有促進作用。最適培養(yǎng)條件為45℃，250r/min，培養(yǎng)120h。并以麩皮、大豆粉、Ca<'2+>及搖床溫度作了四因素三水平正交實驗，結果表明麩皮10g/L、大豆粉4g/L、Ca<'2+>0.4g/L及搖床溫度為45℃為產CMCase最佳條件，此條件下CMCase活力為11.52U/g。 3.CN9的多相分類結果表明：CN9菌株的基內菌絲豐富、不斷裂，有直鏈分生孢子；在供試的八種培養(yǎng)基中，氣生菌絲呈白

4、色或黃色，無可溶性色素產生；CN9生長溫度范圍較寬，可在28℃-65℃的溫度范圍生長，55℃生長最好；該菌能耐3％的NaCl；最適生長pH為7-10；除了D-核糖，不能利用其它供試碳源；氮源利用良好；化學分類表明，CN9細胞壁含有L，L-DAP，屬胞壁I型，無特征性糖，屬糖型C型；用16s rDNA部分序列構建的系統(tǒng)發(fā)育進化樹，CN9與高溫鏈霉菌位于同一分支，初步認為CN9屬于高溫鏈霉菌。 4.高溫放線菌DY19多相分類結果表明

5、：DY19的基內菌絲細長，基內菌絲上著生單個孢子，氣生菌絲呈螺旋或半螺旋狀的短孢子鏈；在8種供試培養(yǎng)基中，氣生菌絲呈白色或黃色；在不同的培養(yǎng)基上，基內菌絲顏色較多，以淡黃色為主，無可溶性色素產生；DY19能在45℃生長，最適生長溫度為55℃：對NaCl無耐受能力；最適生長pH為8-10；除了D-核糖，不能利用其它碳源，對氮源有較好的利用效果；細胞壁含有meso-DAP，屬胞壁Ⅲ型，無特征性糖，屬糖型C型；用16S rDNA部分序列構建的