小麥triticumaestivuml.苗期水分脅迫誘導(dǎo)表達(dá)差異cdna的研究

1、河北師范大學(xué)碩士學(xué)位論文小麥（Triticum aestivum L.）苗期水分脅迫誘導(dǎo)表達(dá)差異cDNA的研究姓名：郭賓會(huì)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：王剛;景蕊蓮20030601河北師范人學(xué)碩上研究生學(xué)位論文摘 要干旱是導(dǎo)致植物發(fā)生水分脅迫的一種最重要的環(huán)境岡子，極人限度地制約著作物的生長(zhǎng)和產(chǎn)量。因此，研究作物的抗旱機(jī)制、培育抗旱新品種已成為當(dāng)前許多科研工作者的迫切需要。差異顯示反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡(jiǎn)稱D D R T -

2、P C R 。因其操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏性高、易重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，自1 9 9 2 年由L i a n g P e n g 和D t P a r d e e 發(fā)明以來(lái)，已成為分子生物學(xué)領(lǐng)域一種強(qiáng)有力的工具，被廣泛地用來(lái)分離差異表達(dá)的基因。本研究以小麥早選1 0 號(hào)為材料，用1 6 ％( 1 l F 一0 ，5 M P a ) P E G ．6 0 0 0 溶液處理其幼苗，采用m R N A 差異顯示技術(shù)和銀染技術(shù)，對(duì)經(jīng)過(guò)不同脅迫時(shí)間誘導(dǎo)表達(dá)的小

3、麥基因進(jìn)行分離，共得到差異表達(dá)的c D N A 片段5 2 條。方法是：用1 6 ％( v = 一O ．5 M P a ) P E G - 6 0 0 0 溶液處理小麥幼苗，用去離子水培育幼苗做對(duì)照；分別提取處理和對(duì)照幼苗的總R N A ，反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行P C R 擴(kuò)增，P C R 產(chǎn)物經(jīng)6 ％的變一l 生聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染顯色屙可觀察到清晰的條帶。差異顯示的P C R 產(chǎn)物長(zhǎng)度絕大部分在1 5 0 b p 到7 5 0 b p

4、 之間。所回收的5 2 條差異帶，經(jīng)R e v e r s eN o r t h e r n ．驗(yàn)證后，得到陽(yáng)性表達(dá)的c D N A 片段1 5 個(gè)，其中包括4 個(gè)“上調(diào)”基因和1 1 個(gè)“下凋”基因。崩單個(gè)隨機(jī)引物對(duì)上述f 5 個(gè)片段進(jìn)行再次擴(kuò)增，全部表現(xiàn)為陰性。對(duì)1 5 個(gè)陽(yáng)性c D N A片段克隆并測(cè)序，通過(guò)與G e n B a n k 中的E S T 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)——1 1個(gè)c D N A 片段與已知序列有較高的同源性，

5、4 個(gè)為未知基因序列。其中，受水分脅迫處理誘導(dǎo)表達(dá)信號(hào)增強(qiáng)的c D N A 片段W S l 7 3 2 與高粱苗期病菌感染誘導(dǎo)的e D N Ac l o n e 同源性為8 6 ％，g S l 4 8 3 與小麥休眠期胚乳、A B A 處理的小麥胚c D N Ac l o n e 、小麥苗期干旱脅迫處理的c D N A c l o n e 同源性為1 0 0 ％，與鹽脅迫處理的大麥根c D N Ac l o n e 同源性為9 9 ％，