轉(zhuǎn)染前列腺特異性同源框基因nkx3.1對前列腺癌細胞株du145作用的試驗研究

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文轉(zhuǎn)染前列腺特異性同源框基因NKX3.1對前列腺癌細胞株DU-145作用的試驗研究姓名：黃一東申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)（泌尿）指導(dǎo)教師：李虹20060401●●●四川大學(xué)博十研究生論文轉(zhuǎn)染前列腺特異性同源框基因N K X 3 ．1 對前列腺癌細胞株D U - 1 4 5 作用的試驗研究研究生導(dǎo)師黃一東李虹教授中文摘要目的構(gòu)建帶有前列腺特異性同源框基因N K X 3 ．1 的質(zhì)粒p e D N A 3 ．1 ( +

2、 ) ．N K X 3 ．1 ；以其轉(zhuǎn)染雄激素非依賴性前列腺癌細胞株D U - 1 4 5 ，篩選陽性克隆；進而檢測N K X 3 ．1 對D U 一1 4 5 細胞生長、細胞周期、凋亡作用，并初步探討其作用途徑和機理。方法①運用P C R 技術(shù)從前列腺癌L N C A P 細胞株總R N A 中擴增出N K X 3 ．1 序列，將擴增片段經(jīng)E c o R I 、X h o I 雙酶切后，定向插入質(zhì)粒載體p e D N A 3 ．1 (

3、 + ) 中，構(gòu)建p e D N A 3 ．1 ( + ) 一m ∞．1 ，并鑒定測序。⑦采用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將所構(gòu)建的質(zhì)粒p e D N A 3 ．1 ( + ) - h T - ．X 3 ．1 導(dǎo)入D U - 1 4 5細胞。通過流式細胞技術(shù)、M T T 法、A OE B 法檢測N K X 3 ．1 對D U - 1 4 5細胞生長、細胞周期和凋亡的影響。采用R T —P C R 技術(shù)檢測陽性克隆D 卜1 4 5 ／N l ( )

4、 【3 ．1 的I A P l 水平，比較D U ．1 4 5 ／N K X 3 ．1 和D U - 1 4 5 表達有無區(qū)別。結(jié)果①成功構(gòu)建質(zhì)粒p e D N A 3 ．1 ( + ) ．N K X 3 ．1 ，鑒定基因序列正確、無誤。②轉(zhuǎn)染了 K X 3 ．1 基因的D U ．1 4 5 細胞經(jīng)G 4 1 8 篩選，獲得陽性克隆D U - 1 4 5 ／N K X 3 ．1 。F C M 周期檢測顯示，D U - 1 4 5 ／N