固定化e.coli中谷氨酸脫羧酶轉(zhuǎn)化谷氨酸生成γ氨基丁酸的研究

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文固定化E.coli中谷氨酸脫羧酶轉(zhuǎn)化谷氨酸生成γ-氨基丁酸的研究姓名：喬春楠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：食品生物技術(shù)指導(dǎo)教師：孫君社20070601中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘要A b s t r a c tG - a m i n o b u t y r i c a c i d ( O ／d 3 A ) i s a n o n - p r o t e i n a m i n o a c i d t h a t i s

2、 am a j o r i n h i b i t o r yn e u m t r a n s m i t t e r i n t h e m a m m a l i a nc e n t r a l n e r v o u s s y s t e m ，h a s s e v e r a l w e l l - k n o w np h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n s ．G A B A

3、c a l lb ep r o d u c e df r o mg i u t a m i ca c i d ( G i n ) ∞t a l 歸e db yg l u t a m a t e d e c a r b o x y l a s e( o A D ) ．T h eo p t i m u mc o n d i t i o n so fb a c t e r i a - c u l t u r a l , i m m o b i

4、 l i z a t i o no fG A D ，s e p a r a t i o no fG A B Af r o m r e a c t i o n s y s t e ma n d r e a c t i o nc o o p e r a t i n g w i t h s e p a r a t i o nw e r e s t u d i e di n t h i s t h e s i s ．B y c o m p a

5、r i n g b i o m a s s a n da c t i v i t yo f G A D o f t w ob a c t e r i u mi nf o u r c u l t u r em e d i u m s r e s p e c t i v e l y ,u s i n gE ．c o l iC I C C1 0 0 0 3 ( f r o m C l C C ) ，c u l t i v a t e di n

6、c u l t u r em e d i u m 0 , e o fe x t r a c t1 9 ．2 2 5g ，N a C l1 2 ．5g ’m o n o s o d i u mg l u t a m a t e ( M s o ) 5 g ’V B 6 0 ．0 7 5 m m o l ／L , M g S 0 4 0 ．0 7 5 ％，1L d i s t i l l e dw a t e r , p H 7 ．吼u n

7、 d e rt h ec o n d i t i o n o f3 ％i n o c u l a t i o n ．1 6 ％c o n t e n t o f c o n i c a lf l a s k ( 4 0 腳o m L ) a n d1 6 0r ／r a i n r o t a t es p e e d ．t h a tc a n p r o d u c en x №b i o m a e s a n dG A D t

8、h a nb e f o r e ．B y i n v w s t i g a t i n gm e t h o d so fi m m o b i l i z a t i o na n dc h a r a c t e ro fi m m o b i l eg l u t a m a t ed e e a r b o x y l a s e( I O A D ) , t h eo p t i m u mi m m o b i l i

9、z a t i o no fG A D w a s “ 3 ％( w ／v ) s o d i u ma l g i n a t e , 4 ％( w ／v ) C a C l 2 ,i m m o b i l i z e dt i m e6 h ：t h eo p t i m u m a c t i o nc o n d i t i o n sw e r e ：p H 4 ．8 - 5 ．o ，1 ％M S G 4 2 ' C

10、 ．W h e np a s s i n gt h r o u g h4r e a c t i o nc y c l e s ，h a l fa c t i v i t yo fI G A D l o s t , t h a tc o u l du ∞s o l u t i o n ( 0 ．0 5m o l ／LC a C l 2 ，0 ．0 1m m o l ／LP L P , 2 ．5m m o l ／LM S G p H 6 ．

11、0 ) t or e s u l T l e 1 0 0 ％a c t i v i t yo fI G A D w e l LI t w a sf o u n dt h a td i f f u s i o n m i g h t b e t h e m o s t i m p o r t a n t f a c t o r t o e f f e c t o n t h ea c t i v i t y o f I G A D ．U

12、s i n g D I A I O NS K l B o f H i o nt y p e , s e p a r a t i n gG A B A f r o m r e a c t i o ns y s t e mw a ss t u d i e d ．W h e nv e l o c i t yo f s o l u t i o nw a s3m L J m i n ，i tc o u l dc h a n g ef o rm o

13、 r et h a n9 7 ％G A B A f r o mr e a c t i o ns y s t e m ．C h a n g i n g G A B A b y 2 m o l ／L a m m o n i a , c o n c e n t r a t i n g a m m o n i a i n v a c u u m d i s t i l l a t i o n f l a s k , a n d a d d i

14、n g9 5 ％e t h a n 0 1 ．a(chǎn) t l a s ti tc o u l dg e tc r y s t a lo fG A B A ．T h em e t h o do f r e a c t i o n c o o p e r a t i n gw i t hs e p a r a t i o nw a sf o u n d ．W h e ns o l u t i o np a s s i n gr e a c t

15、i o np o l ew i t h1n O d m i n a n dp a s s i n gs e p a r a t i o np o l e w i t h3 m L ／m i n ，o n er e a c t i o np o l ec o o p e r a t i n g w i t h t w os e p a r a t i o n p o l e , t h a t r e a c t i o n c o u

16、l dc o o p e r a t ew i t hs e p a r a t i o nw e l l ．B y i n v e s t i g a t i n gp a r t sa b o v e ，i tc a n u s eI G A D p m d u c e G A B A a n d s e p a r a t ei tf r o m r e a c t i o ns y s t e mt o g e t c r y