sds-聚丙烯酰胺凝膠ph對黃瓜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的影響

1、上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2011，27(2)：18—21ActaAgriculturaeShanghai文章編號：10003924(2011)02叭804SDS聚丙烯酰胺凝膠pH對黃瓜蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的影響何立中，王麗萍，郭世榮’，陽燕娟，陸曉民，田婧(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，農(nóng)業(yè)部南方蔬菜遺傳重點(diǎn)改良實(shí)驗(yàn)室，南京210095)摘要：以黃瓜品種‘津春2號’為試材，利用雙向電泳技術(shù)研究了聚丙烯酰胺凝膠pH對黃瓜根系和葉片蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜的影響。結(jié)果

2、表明：pH為88時，蛋白點(diǎn)大多集中于膠面的中部；pH為82的凝膠使小分子蛋白點(diǎn)過于接近溴酚藍(lán)指示線?？赡軐?dǎo)致某些小分子蛋白丟失；pH為85的凝膠能夠得到較多和分離較好的蛋白點(diǎn)，適用于黃瓜植株蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。關(guān)鍵詞：黃瓜；雙向電泳；pH；蛋白質(zhì)組學(xué)中圖分類號：Q503；Q51文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AEffectofSDSpolyacrylamidegelpHontwodimensionalelectropherogramofcucumberpro

3、teinHELi—zhong，WANGLi—ping，GUOShi—rong’，YANGYanjuan，LUXiaomin，TianJing(CollegeofHorticulture，NanjingAgriculturalUniversity／KeyLaboratoryofSouthernVegetableCropGeneticImprovement，MinistryofAgriculture，Nanjing210095，China)

4、Abstract：Cucumissativuscultivar‘Jinchun2’wasusedasatestmaterial，andtheeffectsofpolyacrylamidegelpHontwo—dimensionalelectropherogramsofproteinsofcucumberrootsandleaveswerestudiedbytwodimensionaIelectrophoretictechniqueThe

5、resultsshowedthatwhenthePHwas88，mostoftheproteinsgatheredonthemiddleofthegel；WhenthepHwas82，thesmallmole—culeproteinswereexcessivelyclosetothebromophenolblueband，possiblycausingsomesmallmole—culeproteinstolose；Andwhenthe

6、pHwas85，theproteinscouldbeseparatedmoreandbetter，whichwassuitableforstudyoncucumberseedlingsinproteomicsKeywords：Cucumber；Dielectrophoresis；pH；Proteomics植物蛋白質(zhì)組學(xué)是后基因組時代研究的熱點(diǎn)之一[1]，目前關(guān)于擬南芥[2]、水稻叭41等植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究較多。近年來，雙向電泳技術(shù)開始用

7、于黃瓜蛋白質(zhì)組的研究[5石]。蛋白質(zhì)組是一個動態(tài)的概念，每一種生命活動都是特定的蛋白質(zhì)群體在不同時間和空間發(fā)揮功能的結(jié)果，蛋白質(zhì)組學(xué)研究的開展是生命科學(xué)進(jìn)入后基因組學(xué)時代的重要里程碑[7]。雙向凝膠電泳(Two—dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis，2DE)技術(shù)由O’Farrell[副于1975年創(chuàng)立，是目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中分離檢測細(xì)胞、細(xì)胞系、器官和組織總蛋白質(zhì)組的有效手段。雙向電泳技

8、術(shù)是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量兩個相互獨(dú)立的參數(shù)，在相互垂直的兩個方向進(jìn)行二次電泳的過程。其中第一向等電聚焦(Isoelectrofocusing，IEF)主要采用固相IPG膠條，具有pH梯度穩(wěn)定、聚焦準(zhǔn)確、精度高的特點(diǎn)，具備無陰極漂移及堿性蛋白丟失等優(yōu)勢p1；第二向是采用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，依據(jù)分子量對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，凝膠的厚度、濃度、pH均會對雙向電泳圖譜產(chǎn)生較大的影響。要使蛋白質(zhì)樣品成功分離除需選擇合適的凝膠濃度外，合適的pH

9、也很關(guān)鍵。酸性蛋白質(zhì)在高pH條件下，堿性蛋收稿日期：2011—03—24初稿；2011—05—15二改穡基金項(xiàng)目：國家重點(diǎn)研究發(fā)展計(jì)劃(973)(2009CBll9000)；國家自然科學(xué)基金(30871736。30571263)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS25一C03)資助作者簡介：何立中(1986一)男在讀碩士，研究方向：設(shè)施園藝及蔬菜生理分子生物學(xué)。Email：2009104064@njaueducn通訊作者Emarl：

10、srguo@njaueduc11萬方數(shù)據(jù)Ht十：SDSt镕n＆#ⅪKpHmⅢ自日日HmaⅢ19frJ#日2結(jié)果0分析2IpH對根系蛋白雙向電泳圖譜的影響使用Imagemastcr2DPlatinum蝌像分析軟件發(fā)現(xiàn)每張蛋h『≈譜上m理個“上蛋白點(diǎn)。pH=HH舯凝腔所得到的電淋圖瞄(幽1A)蛋白點(diǎn)尢多集巾在凝膠的tJ部蛋白一_得不到有效丹離pH；82(囝1c)的凝眭蜊使小分于蛋n和溴酚蕊指示刑對于接近布可能使蛋白點(diǎn)跑出膠外導(dǎo)致蚩n點(diǎn)丟失析

11、pH=R5的凝腔昕得到的電泳圈措(圖I—B)蛋白點(diǎn)能夠較均勻地分布于腔而上蛋白點(diǎn)也比較清晰圓潤^plI2H^BpH2HSCplI—H2目I目a＆pH目tⅢ自g自自目口∞自FIElEfr《t口pHondI帥n，iuphercuI“22pH對葉片蛋白雙向電津圖譜的影響凝鞍pl!刊黃；Ka片理向電泳崮潛的影響與帳系的相似在pH=88(阿2A)和ptt=H2c罔2C)的條件下蛋白點(diǎn)得不到很“的訃離而在pH：H5(斟2B)的凝腔中得到r較多的蛋山

12、點(diǎn)且蛋白點(diǎn)也能夠較均勻地針布十整個腔面‘^■拳旁蕓。。糍矗‘。l’’；t。：之澎，|竺，I一■，二；：≤r!、3結(jié)淪豆叁函謎^pHBpIIH5f：pHH2目2T目女＆pHntⅢ“H《自自女目镕∞■Fk2Emd#IpHonl”十dl～lchI呷hm“cukrIⅡ向電淋是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要的技術(shù)之要獲得好的ⅢH電泳幽譜不僅需要較好的樣品制備方法也需要音適的電誅體系。本菌驗(yàn)對不同檉腔pH下黃瓜根系和ul片蛋白質(zhì)的杖向電泳圖譜比較發(fā)現(xiàn)，pH；

13、sH的凝腔蛋白點(diǎn)大多集中十腔【J的中央不利于r一步的取點(diǎn)操作降低分離膠的pH至85讓蛋白質(zhì)分子任凝睦中遷移更長的距離使小分丁蛋白能夠電淋到凝腔底部由丁大分子蛋白和小分r蛋白的遷移譴#不同隨著電泳時間的延長它們之間的相對距離就變大從而使蛋白點(diǎn)得到更好的分離；當(dāng)pH=82時凝膠巾小分r蛋白點(diǎn)垃于接近溴哪藍(lán)指示線af能會導(dǎo)致某些小分于蛋白的丟失不適干黃瓜雙向電淋的研究。綜r所述黃瓜蛋白般向電泳較理想的凝股pH為85，浚pHF黃瓜小分子蛋白點(diǎn)能