細胞計數(shù)方法------細胞計數(shù)板法

1、細胞計數(shù)方法細胞計數(shù)方法細胞計數(shù)板法細胞計數(shù)板法實驗原理：實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。具體操作：具體操作：1.將計數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板。2.將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。3.計算板四大格細胞總數(shù)，壓線細胞只計左側和上方的。然后按公式計

2、算：細胞數(shù)mL=四大格細胞總數(shù)410個ml4(注：當細胞很多時，可在四個格中選一定數(shù)目較平均的小格，由于每大格中有16個小格，然后計左側和上方的細胞數(shù)，求出每小格的細胞數(shù)，取平均值m，m16即每個格的平均值。所以，細胞密度=m1610個ml)4說明：說明：公式中除以4，因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。公式中乘以10因為計數(shù)板中每一個大格的體積為：41.0mm（長）1.0mm（寬）0.1mm（高）=0.1mm而1ml=1000ul=1000m

3、m33（注意：注意：鏡下偶見有兩個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算，若細胞團10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液。）================================================細胞計數(shù)板的使用細胞計數(shù)板的使用一、血球計數(shù)板一、血球計數(shù)板基本構造基本構造血球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個槽構成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各刻有一小方格網

4、，每個方格網共分九個大格，中央的一大格作為計數(shù)用，稱為計數(shù)區(qū)。計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)區(qū)是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。格）。為了保證計數(shù)的準確性，避免重復計數(shù)和漏記，在計數(shù)時，對沉降在格線上的細胞的統(tǒng)計應有統(tǒng)一的規(guī)定。如

5、菌體位于大方格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格，本格的下線和右線上的細胞按規(guī)定計入相應的格中。見下圖：即本格中計數(shù)細胞為3個。6對于出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數(shù)23次（每次數(shù)值不應相差過大，否則應重新操作），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含細胞數(shù)量。7測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將細胞計數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，

6、以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干，放入盒內保存。三、細胞計數(shù)板三、細胞計數(shù)板計數(shù)公式計數(shù)公式1、16格25格的細胞計數(shù)板計算公式：細胞數(shù)ml=100小格內細胞個數(shù)10040010000稀釋倍數(shù)1、25格16格的細胞計數(shù)板計算公式：細胞數(shù)ml=80小格內細胞個數(shù)8040010000稀釋倍數(shù)四、血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面四、血細胞計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面應如何盡量減少誤應如何盡量減少誤差力求準確力求準確血細