[教育]液相色譜儀的維護(hù)與常見故障

1、液相色譜儀的日常維護(hù)與常見故障排除,一 液相色譜儀的 日常維護(hù),儲液器,使用HPLC試劑/溶劑，含緩沖鹽的流動相過0.45μm膜除去微粒物質(zhì);更換流動相時,應(yīng)徹底清洗，防止交叉污染。 定期清潔儲液器及附件，防止長微生物。,輸液泵,密封墊易損壞引起故障，每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束一定要認(rèn)真沖洗泵,注意防止堵塞,使用緩沖鹽流動相時,更要小心。 使用HPLC級試劑,注意泵壓力不要太高,要適當(dāng)調(diào)整壓力,一般壓力上限在10-20MPa

2、，下限為0.5MPa，注意防止因泵堵塞造成壓力過高損壞柱塞桿或燒壞電機(jī) 。,進(jìn)樣器,停機(jī)前一定沖洗干凈進(jìn)樣器內(nèi)殘留的樣品或緩沖鹽，防止樣品和無機(jī)鹽沉積造成進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)子面磨損或堵塞。 注射器最好使用儀器自配尖頭、平頭針，不要用其它儀器的。,柱—防止柱性能下降,1 溶劑的化學(xué)腐蝕性不能太強(qiáng)； 2 避免顆粒物在柱頭沉降； 3 柱壓不能太高，防止沖擊太大； 4 流動相pH值小于7時，最好用大粒度同種填料的予

3、 柱； 5 柱頭加濾片（燒結(jié)不銹鋼), 需要時加保護(hù)柱； 6 經(jīng)常清洗柱； 7 長時間不用時要保存好,一定要洗去緩沖鹽,加入大 于10%有機(jī)溶劑，將柱兩端擰緊,保持柱填料濕潤。,檢測器,保持清潔，每天用后與色譜柱一起清洗； 不定期用強(qiáng)溶劑反向沖洗檢測器； 使用脫過氣的流動相，防止氣泡滯留池內(nèi)； 檢測器燈有一定壽命，不用時不開燈。,記錄器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),記錄儀: 熱敏

4、式打印頭要注意記錄紙的質(zhì)量,開機(jī)前注意檢查走紙部件,不要卡紙.色譜工作站: 防止網(wǎng)上病毒損壞軟件.,二 常見故障的排除,1、儲液器,脫氣不充分(噪聲大，出毛刺) 用He脫氣, 真空脫氣, 超聲脫氣, 加熱回餾脫氣,(混合流動相不宜),1、儲液器,流動相供給不暢，泵壓力不穩(wěn) 流動相接近用完 過濾器堵塞（有顆粒，長霉） 流速過高,阻力大,造成空化現(xiàn)象.解決的辦法是:降低流速;換大孔

5、過濾器;加大管路內(nèi)徑;抬高儲液器.,1、儲液器,儲液器或流動相被污染 產(chǎn)生有規(guī)則的噪聲； 基線上升，梯度洗脫出鬼峰； 原因: 溶劑質(zhì)量差（含雜質(zhì)多）； 配流動相的玻璃器皿不合格,微生物影響； 配制流動相的操作不當(dāng)（過濾、脫 氣、攪拌).,2、輸液泵,單向閥a.球和閥座粘在一起，堵死，打不出溶劑，(緩沖鹽流動相) 用高質(zhì)量的溶劑沖洗，不同極性溶劑沖洗,如水、甲醇、異丙醇、二氯甲烷…，更換

6、新單向閥。,2、輸液泵,b. 球和閥座密封不嚴(yán)，壓力不穩(wěn)，氣泡進(jìn)入閥中，緊貼在閥體內(nèi)，使球難以返回閥座，引起倒流，壓力和流速變化大，可能有小晶體顆粒。 清除氣泡的辦法：打開排液閥，大流量沖洗，用脫過氣的甲醇沖洗，一般可解決問題。,3、進(jìn)樣系統(tǒng),b. 堵塞, 樣品打不進(jìn)去。 樣品管堵塞：環(huán)管用反沖法或超 聲清洗排除（或換新管).,手動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),c. 注樣孔 a) 裝樣時針頭周圍滲漏：孔道堵塞

7、，或者放空管和樣品管太細(xì)，阻力太大；針頭密封管規(guī)格不對，針頭太細(xì)。,手動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),c. 注樣孔： b)注射孔滲漏：放空管有虹吸現(xiàn)象，轉(zhuǎn)子密封面上孔之間有磨損。為防止虹吸,放空管末端應(yīng)在放空 瓶液面以上,更換磨損的轉(zhuǎn)子.,手動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),c)樣品滯留閥在進(jìn)樣位置停留時間不夠。 要求停留時間至少應(yīng)讓流動相流過的體積是環(huán)體積的10-20倍。 (一般是在下一針進(jìn)樣前才將閥扳到裝樣位置),手動進(jìn)樣

8、系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),c)樣品滯留殘留樣品留在樣品環(huán)中或注射器中，或從放空管中虹吸回來,污染下一個樣品.此時可用5-10倍的流動相或新樣品沖洗注射孔和注射器,若是虹吸,應(yīng)加限制管。,手動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),c)樣品滯留管路接頭有死體積滯留樣品，很難沖洗干凈,此時應(yīng)檢查裝配情況，確定是否需換新配件。,手動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),a. 樣品瓶不配套 瓶小——針彎、折斷 瓶大——樣品少，抽不上樣 瓶破碎

9、更換合適的樣品瓶。,自動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),b. 注意樣品瓶隔墊，防止污染。c. 進(jìn)樣器針頭堵塞（樣品、緩沖 鹽、隔墊碎片、針頭本身)， 可用溶劑清洗，金屬絲疏通， 或換新針頭。,自動進(jìn)樣系統(tǒng),3、進(jìn)樣系統(tǒng),d. 樣品滯留：空白溶劑出色譜峰. 加倍清洗，或調(diào)整樣品瓶順序，（從低濃度開始，高濃度放后 面）或在樣品瓶前放清洗液瓶.,自動進(jìn)樣系統(tǒng),4、色譜柱,1)塔板數(shù)下降 a. 樣品處理不合適，選擇

10、適當(dāng)?shù)臉悠穬艋?方法，選擇合適流動相。 b. 柱頭塌陷，填裝修補(bǔ)。 2)峰形變壞 出現(xiàn)拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。 與塔板數(shù)下降有關(guān)，峰形壞保留時間不變， 可能是柱堵塞(不銹鋼燒結(jié)片)，或柱頭有空 穴。,4、色譜柱,3)柱壓突然增大 樣品沉積在柱內(nèi),用能溶解樣品的 溶劑沖洗（斷開柱和檢測器）可正 向沖，反向沖。 柱內(nèi)硬件有問題： 濾片堵塞，換新片;

11、 塌陷：用相同填料填充、修補(bǔ)。,4、色譜柱,4)保留時間改變 不同柱保留時間的變化,主要是填料差異造成的,不同牌號柱出峰順序不變，保留時間有小的變化。 若峰順序變化，保留時間變化較大，應(yīng)考慮換柱或優(yōu)化分離條件。 對專門的分析最好用同一批號的柱子。,由色譜柱引起的故障,5、檢測器,a.燈故障:基線噪聲大,靈敏度低, 氘燈壽命:1000h 汞燈和鎢燈壽命:2000h 一般使用6個月以上可能

12、接近壽命期限,可以考慮更換新燈.,紫外—可見光檢測器,5、檢測器,b. 流動池 流動池內(nèi)有氣泡：用脫氣甲醇，不同流 量沖洗。 池堵塞（入口、出口、池內(nèi)）： 用可溶堵塞物的溶劑沖洗 （緩沖鹽用 水沖洗） 池污染：異丙醇、二氯甲烷、 6mol/L HNO3 沖洗.,紫外—可見光檢測器,5、檢測器,b. 流動池 測量池和參比池失配 UV以空氣為參比，一般不扣流動 相本底，若用有紫外吸收的流動相，

13、 參比信號不為零，會出現(xiàn)倒峰和偽 峰。此時，選擇合適的流動相。,紫外—可見光檢測器,5、檢測器,c. 時間常數(shù)選擇：（過濾噪聲） 有的儀器有固定的時間常數(shù)，有的需設(shè)置時間常數(shù)。時間常數(shù)太小, 噪聲增大;時間常數(shù)太大,出現(xiàn)寬峰、拖尾或矮峰。 時間常數(shù)的設(shè)置一般根據(jù)經(jīng)驗(yàn)估計，小顆粒柱常數(shù)小，可選最窄峰寬的1/10作為時間常數(shù),對4.6×(150-250)mm，5um柱，可選0.5s or1s,紫外—可見

14、光檢測器,5 檢測器 非線性響應(yīng),超出線性范圍:樣品量太大; 檢測器的衰減超出了其線性動 力學(xué)范圍; 流動相的紫外吸收比較強(qiáng).,5 檢測器 溫度影響,環(huán)境溫度變化引起基線漂移。 流動相溫度變化引起折射率改 變，紫外光傳導(dǎo)變化。 柱溫變化引起基線漂移。,5 檢測器 信號線故障,記錄儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)信號線插接不緊,接觸不良，信號很弱，出現(xiàn)不需要的噪音,此時按說明書檢查線路連接。地線對儀器很重要