生化實(shí)驗(yàn)思考題 參考答案

1、生化實(shí)驗(yàn)講義思考題參考答案生化實(shí)驗(yàn)講義思考題參考答案實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一淀粉的提取和水解淀粉的提取和水解1、實(shí)驗(yàn)材料的選擇依據(jù)是什么？答：生化實(shí)驗(yàn)的材料選擇原則是含量高、來源豐富、制備工藝簡單、成本低。從科研工作的角度選材，還應(yīng)當(dāng)注意具體的情況，如植物的季節(jié)性、地理位置和生長環(huán)境等，動物材料要注意其年齡、性別、營養(yǎng)狀況、遺傳素質(zhì)和生理狀態(tài)等，微生物材料要注意菌種的代數(shù)和培養(yǎng)基成分的差異等。2、材料的破碎方法有哪些？答：(1)機(jī)械的方法：包括研磨

2、法、組織搗碎法；(2)物理法：包括凍融法、超聲波處理法、壓榨法、冷然交替法等；(3)化學(xué)與生物化學(xué)方法：包括溶脹法、酶解法、有機(jī)溶劑處理法等。實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二總糖與還原糖的測定總糖與還原糖的測定1、堿性銅試劑法測定還原糖是直接滴定還是間接滴定？兩種滴定方法各有何優(yōu)缺點(diǎn)？答:我們采用的是堿性銅試劑法中的間接法測定還原糖的含量。間接法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便、反應(yīng)條件溫和，缺點(diǎn)是在生成單質(zhì)碘和轉(zhuǎn)移反應(yīng)產(chǎn)物的過程中容易引入誤差；直接法的優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)原理直觀

3、易懂，缺點(diǎn)是操作較復(fù)雜，條件劇烈，不易控制。實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五粗脂肪的定量測定粗脂肪的定量測定─索氏提取法索氏提取法（1）本實(shí)驗(yàn)制備得到的是粗脂肪，若要制備單一組分的脂類成分，可用什么方法進(jìn)一步處理？答：硅膠柱層析，高效液相色譜，氣相色譜等。（2）本實(shí)驗(yàn)樣品制備時(shí)烘干為什么要避免過熱答：防止脂質(zhì)被氧化。實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)六蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定1、在等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)溶解度為什么最低？請結(jié)合你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)加以說明。實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八蛋

4、白質(zhì)含量的測定蛋白質(zhì)含量的測定(1)簡述紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)濃度的原理及優(yōu)點(diǎn)。答：原理：由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì)，吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值（OD280）與其含量呈正比關(guān)系，可用作定量測定。優(yōu)點(diǎn)：迅速、簡便、不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。實(shí)驗(yàn)十實(shí)驗(yàn)十影響酶活性的因素影響酶活性的因素（1）本實(shí)驗(yàn)中如何通過淀粉液加碘后的顏色的變化來判斷

5、酶促反應(yīng)快慢的？答：在唾液淀粉酶的作用下，淀粉水解，經(jīng)過一系列被稱為糊精的中間產(chǎn)物，最后生成麥芽糖和葡萄糖。變化過程如下：淀粉→紫色糊精→紅色糊精→麥牙糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、紅色糊精遇碘后分別呈藍(lán)色、紫色與紅色。麥芽糖和葡萄糖遇碘不變色。因此反應(yīng)后顏色如為藍(lán)色說明酶活力低，淡黃色則說明酶活力高。（2）如何通過加入班氏試劑后生成沉淀多少來反映酶促反應(yīng)快慢的？答：淀粉與糊精無還原性，或還原性很弱，對本尼迪克特試劑呈陰性反應(yīng)。麥芽糖、葡萄

6、糖是還原糖，與本尼迪克特試劑共熱后生成紅棕色氧化亞銅的沉淀。因此，產(chǎn)生紅棕色氧化亞銅的沉淀越多說明酶活力越高。（3）通過本實(shí)驗(yàn)，結(jié)合理論課的學(xué)習(xí)，小結(jié)出哪些因素影響唾液淀粉酶活性？是如何影響的？答：溫度、pH、激活劑、抑制劑等。高于或低于最適溫度或pH，酶活力都會降低；激活劑和抑制劑不是絕對的，只是相對而言，隨著濃度的變化而變化。實(shí)驗(yàn)十二實(shí)驗(yàn)十二堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定(1)試說明用硫酸銨分級

7、分離酶的方法及應(yīng)注意的事件。答：用鹽分級沉淀是一種應(yīng)用非常廣泛的方法。由于硫酸銨在水中溶解度很大（20℃，每升可溶760克），并且對許多酶沒有很大的影響，因此它是最常用的鹽。例如：某酶（或蛋白質(zhì)）發(fā)生鹽析的范圍為3565%飽和硫酸銨的濃度，因此可先選擇30%飽和硫酸銨濃度，去沉淀雜蛋白，然后選擇70%飽和硫濃度酸銨，留沉淀（含所要的酶）。注意事項(xiàng)：在用硫酸銨沉淀酶蛋白時(shí)，要注意緩沖液的pH值和溫度，鹽的溶解度隨溫度不同而有較大的變化，同