多環(huán)芳烴降解菌的篩選、鑒定，降解特性及鄰苯二酚-2，3-雙加氧酶的初步研究.pdf

1、隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展，所引發(fā)的環(huán)境問題也日益嚴重，污染治理迫在眉睫。多環(huán)芳烴是自然環(huán)境中普遍存在的一種芳香族有機污染物，來源廣泛且難于消除。由于其對人類健康造成了重大威脅，因而受到了廣泛的關注。微生物降解是修復多環(huán)芳烴污染的重要手段，因此，從環(huán)境中篩選多環(huán)芳烴高效降解菌株，研究其降解特性及降解關鍵酶的基因，并將其應用到切實解決環(huán)境問題中去，具有重要的理論價值和現(xiàn)實意義。 本文從濟南煉油廠及東營勝利油田采油廠油污污染嚴重的區(qū)域選取

2、土樣，從中篩選得到多株具有多環(huán)芳烴降解能力的菌株，經(jīng)過復篩，選取其中一株在多環(huán)芳烴培養(yǎng)基中培養(yǎng)時生長情況最好的3A菌株進行研究。經(jīng)過菌落菌體形態(tài)觀察、生理生化鑒定、脂肪酸氣相分析及16S rDNA序列分析，從多相分類的角度并融合細菌分類技術成果，將3A菌歸為為芽孢桿菌屬。實驗對芽孢桿菌3A菲和芘的降解性能進行了測定，研究結果顯示，該菌在以菲和芘為唯一碳源和能源的情況下，37℃，pH7．0，150rpm培養(yǎng)時，15天對菲的降解效率為68．

3、9％，30天對芘的降解效率為78．8％，該菌雖然對菲的降解能力并不理想，但對芘卻具有很強的降解能力。此外，該菌株能夠利用多種芳香烴類物質作為唯一碳源和能源生長。并具有等四環(huán)素、氨芐青霉素、慶大霉素等多種抗生素抗性。經(jīng)過不同方法進行質粒提取均沒有發(fā)現(xiàn)質粒。 通過單因子影響實驗及正交實驗對菌株3A的生長條件及培養(yǎng)基的成分配比進行了最佳配置，通過對不同實驗條件下菌體濃度的測定，獲得了菌株3A在含芘無機鹽培養(yǎng)基中的最佳培養(yǎng)條件，有利于

4、進一步對該菌芘降解能力的研究。 通過正交實驗，應用氣相色譜-質譜聯(lián)用技術對不同培養(yǎng)條件下的多環(huán)芳烴降解效率進行測定，確定了芘降解的最適條件為37℃，pH7．0，150rpm，裝液量為150ml/300ml。在對降解效率的研究中，當分別加入濃度為0．1％、0．5％和1．0％的表面活性劑Tween80時，芘的降解效率均有所提高，且在添加Tween80濃度為0．5％時15天的降解效率比不添加時提高了近40％，表面活性劑的添加對芘降解

5、效率的提高起到了顯著的促進作用。實驗對菌株3A和白腐真菌（黃孢原毛平革菌）在共同降解芘的過程中能否互相促進降解進行了研究。結果表明，在相同培養(yǎng)條件下，添加芘濃度為100mg/L的無機鹽培養(yǎng)基中，聯(lián)合降解的降解效率高于單獨降解的降解效率加和近20％，發(fā)生了明顯的共代謝作用?？梢?，黃孢原毛平革菌與菌株3A之間在混合降解芘時能夠相互促進，協(xié)同降解，提高降解效率。 通過染色體步移法擴增多環(huán)芳烴降解相關酶--鄰苯二酚-2，3-雙加氧酶基