電泳基礎知識

1、【資料資料】電泳基礎知識電泳基礎知識介紹電泳基礎知識的幾個內容，希望對大家有所幫助。1、電泳法(三個主要的方法，步驟)2、制備凝膠板的方法3、SDSPAGE膠的干燥1、電泳法電泳法(三個主要的方法，步驟三個主要的方法，步驟)電泳法電泳法是指帶電荷的供試品（蛋白質、核苷酸等）在惰性支持介質（如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，使組分分離成狹窄的區(qū)帶，用適宜的檢測方法記

2、錄其電泳區(qū)帶圖譜或計算其含量(%)的方法。各電泳法，除另有規(guī)定外，照下述方法操作.第一法紙電泳法1.儀器裝置包括電泳室及直流電源兩部分。常用的水平式電泳室裝置如圖，包括兩個電泳槽A和一個可以密封的玻璃(或相應材料)蓋B；兩側的電泳槽均用有機玻璃（或相應材料）板C分成兩部分；外格裝有鉑電極(直徑0.5～0.8cm)D；里格為可放濾紙E的有機玻璃電泳槽架F，此架可從槽中取出；兩側電泳槽A內的鉑電極D經隔離導線穿過槽壁與外接電泳儀電源相連。電

3、源為具有穩(wěn)壓器的直流電源，常壓電泳一般在100～500V，高壓電泳一般在500～10000V。2.操作法(1)電泳緩沖液枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0)。取枸櫞酸(C6H8O7?H2O)39.04g與枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7?2H2O)4.12g，加水4000ml，使溶解。(2)濾紙取色譜濾紙置1molL甲酸溶液中浸泡過夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4置60℃烘箱烘干，備用。可按需要裁成長27cm、寬18cm的濾紙，或根據電

4、泳室的大小裁剪，并在距長度方向一端5～8cm處劃一起始線，每隔2.5～3cm處做一記號備點樣用。(3)點樣有濕點法和干點法。濕點法是將裁好的濾紙全部浸入枸櫞酸鹽緩沖液(pH3.0)中，濕潤后，取出，用濾紙吸干多余的緩沖液，置電泳槽架上，使起始線靠近陰極端，將濾紙兩端浸入緩沖液中，然后用微量注射器精密點加供試品溶液，每點10μl共3點，并留2個空白位置。干點法是將供試品溶液點于濾紙上，吹干、再點，反復數次，直至點完規(guī)定量的供試品溶液，然蛋

5、白按分子大小分離。1.儀器裝置恒壓或恒流電源、垂直板或圓盤電泳槽和制膠模具。2.試劑(1)30%丙烯酰胺溶液取丙烯酰胺60g與亞甲基雙丙烯酰胺1.6g，加水至200ml，濾紙濾過，避光保存。(2)分離膠緩沖液取三羥甲基氨基甲烷36.3g、加水70ml，用鹽酸調節(jié)pH值至8.8，加水至100ml。(3)濃縮膠緩沖液取三羥甲基氨基甲烷6.0g、加水70ml，用鹽酸調節(jié)pH值至6.8，加水至100ml。(4)電泳緩沖液取三羥甲基氨基甲烷6.0

6、g、甘氨酸28.8g、十二烷基硫酸鈉1.0g，加水至1000ml。3.操作法(1)制膠用30%丙烯酰胺溶液－分離膠緩沖液－20%十二烷基硫酸鈉溶液－10％過硫酸銨溶液（新鮮配制）四甲基乙二胺水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分離膠液，灌入模具內至一定高度（剩余體積留作制備濃縮膠用），用水封頂，聚合完畢，傾去水層。再用30%丙烯酰胺溶液濃縮膠緩沖液20%十二烷基硫酸鈉溶液10％過硫酸銨溶液四甲基乙二胺水(0.8∶

7、1.3∶0.025∶0.05∶0.005∶2.4)制成濃縮膠液，灌在分離膠上，插入樣品梳（如為圓盤電泳，用水封頂），待濃縮膠液聚合后，小心除去樣品梳或水。(2)對照品和供試品溶液的制備照各藥品項下的規(guī)定。(3)電泳垂直板電泳：恒壓電泳，初始電壓為80V，進入分離膠時調至150～200V，當溴酚藍遷移膠底處，停止電泳。圓盤電泳：調節(jié)電流使每管8mA。4.固定與染色(1)考馬斯亮藍染色①試劑a.固定液稱取三氯醋酸5g，加水200ml溶解后，

8、加甲醇200ml，再加水至500ml。b.染色液稱取考馬斯亮藍R0.5g，加水200ml溶解后，加甲醇200ml與冰醋酸50ml，再加水至500ml。c.脫色液取甲醇400ml、冰醋酸100ml，加水至1000ml，充分混合。d.保存液取冰醋酸75ml，加水至1000ml，搖勻。②固定與染色電泳完畢，取出膠片（條），置固定液中30分鐘，取出膠片（條），置染色液中1～2小時，用脫色液脫色至凝膠背景透明后保存在保存液中。(2)銀染色①試劑a