transwell實驗原理與操作步驟

1、Transwell實驗原理與操作步驟Trans這個詞根有轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)運(yùn)、穿過等意思，well有小室的意思，可以從字面上理解，這是一類有通透性的杯狀的裝置，根據(jù)Cning公司的Transwell說明書中的介紹，可以認(rèn)為這是一種膜濾器（Membranefilters），也可認(rèn)為是一種有通透性的支架（permeablesuppts）。更準(zhǔn)確地說，Transwell應(yīng)該是一種實驗技術(shù)，這項技術(shù)的主要材料是Transwell小室（Transwellc

2、hamber，Transwell），其外形為一個可放置在孔板里的小杯子，不同廠家對Transwell會有不同的命名，而不同型號也可有不同形狀，不同大小，根據(jù)實驗需要，可有不同選擇。但無論是何種外形，其關(guān)鍵部分都是一致的，那就是杯子底層的一張有通透性的膜，而杯子其余部分的材料與普通的孔板是一樣。這層膜帶有微孔，孔徑大小有0.1－12.0m，根據(jù)不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonatemembrane）。將T

3、ranswell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長、運(yùn)動等的影響。應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。當(dāng)然不同細(xì)胞其體積不同，具體選擇時要考慮到細(xì)胞大小。這

4、里主要談幾種大家常用的實驗：（1）共培養(yǎng)體系：小于3.0um孔徑條件下，細(xì)胞不會遷徙通過，因此，若研究不涉及細(xì)胞運(yùn)動能力，不需要細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜，則應(yīng)選擇3.0m以下孔徑。常用0.4、3.0m。我們實驗室用的是0.4m。將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的影響。（2）趨化性實驗：可用5.0、8.0、12.0m膜，上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室，計數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映下室成分對上室細(xì)胞的趨

5、化能力。①細(xì)胞B對細(xì)胞A的趨化作用：將細(xì)胞A種于上室，細(xì)胞B種于下室，可以研究細(xì)胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細(xì)胞A的趨化作用。②趨化因子對細(xì)胞的趨化作用：將細(xì)胞種于上室，下室加入某種趨化因子，可研究該趨化因子對細(xì)胞的趨化作用。（3）腫瘤細(xì)胞遷移實驗：常用8.0、12.0m膜，上室種腫瘤細(xì)胞，下室加入FBS或某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑，計數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的遷移能力。將Transwell小室放入培養(yǎng)板中

6、，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長、運(yùn)動等的影響。應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。下面參考guxuefeng戰(zhàn)友和cosmosci戰(zhàn)友的帖子具體來談?wù)効讖降倪x擇，當(dāng)然不