基因工程期末考試重點(diǎn)知識(shí)整理

1、基因工程基因工程第一章第一章基因工程概述基因工程概述1、基因工程的概念基因工程的概念(基因工程基本技術(shù)路線基因工程基本技術(shù)路線PPT)基因工程（GeneEngineering）是指在基因水平上的遺傳工程它是用人為方法將大分子(DNA)提取出來(lái)在離體條件下用適當(dāng)?shù)墓ぞ呙高M(jìn)行切割后把它與作為載體的DNA分子連接起來(lái)然后與載體一起導(dǎo)入某一更易生長(zhǎng)、繁殖的受體細(xì)胞中以讓外源遺傳物質(zhì)在其中“安家落戶(hù)”進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá)從而獲得新物種的一種嶄新的

2、育種技術(shù).2、基因工程的歷史基因工程的歷史基因工程準(zhǔn)備階段：1972，第一個(gè)重組DNA分子的構(gòu)建，構(gòu)建人：PaulBerg及其同事PPT基因工程誕生：1973，Cohen&Boyer首次完成重組質(zhì)粒DNA對(duì)大腸桿菌的轉(zhuǎn)化基因工程發(fā)展階段的幾個(gè)重要事件：一系列新的基因工程操作技術(shù)的出現(xiàn)；各種表達(dá)克隆載體的成功構(gòu)建；一系列轉(zhuǎn)基因菌株、轉(zhuǎn)基因植物、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等的出現(xiàn)3、基因工程的內(nèi)容（、基因工程的內(nèi)容（P9）4、基因克隆的通用策略（、基因克隆

3、的通用策略（P12）(基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)(鳥(niǎo)槍法鳥(niǎo)槍法)分子雜交篩選分子雜交篩選)第二章第二章分子克隆工具酶分子克隆工具酶5、限制性核酸內(nèi)切酶的概念、特點(diǎn)、命名、分類(lèi)、限制性核酸內(nèi)切酶的概念、特點(diǎn)、命名、分類(lèi)(問(wèn)答問(wèn)答)概念：一類(lèi)能識(shí)別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列，并使每條鏈的一個(gè)磷酸二酯鍵斷開(kāi)的內(nèi)脫氧核糖核酸酶，主要存在于細(xì)菌體內(nèi)特點(diǎn)（參加PPT）7、大腸桿菌中甲基化酶的種類(lèi)、大腸桿菌中甲基化酶的種類(lèi)①Dam甲基化酶，在序列GATC中

4、A的N6位置引入甲基。②Dcm甲基化酶，dcm基因表達(dá)胞嘧啶甲基化酶，它能特異性識(shí)別DNA雙鏈上的CCA(T)GG序列，并使第二個(gè)C5甲基化，即CmCWGG，避免DNA受到相關(guān)限制酶的切斷。dcm基因的變異導(dǎo)致胞嘧啶甲基化酶活性缺失，使外源DNA上的C不被甲基化，易于獲得非甲基化質(zhì)粒。③EcoKI甲基化酶；④SssI甲基化酶8、依賴(lài)于甲基化的限制系統(tǒng)（、依賴(lài)于甲基化的限制系統(tǒng)（McrAMcrBCMrr）依賴(lài)于甲基化的內(nèi)切酶E.coli中

5、至少有3種依賴(lài)于甲基化的限制系統(tǒng)①mcrA基因表達(dá)E.coli防御體系中起重要作用的McrA酶，該酶能特異性地作用于外來(lái)DNA上的被甲基化的胞嘧啶序列，即C5mCGG特異序列，使之分解，對(duì)大腸桿菌本身起保護(hù)作用。mcrA基因的變異，導(dǎo)致上述功能缺失，對(duì)外來(lái)DNA中被甲基化的胞嘧啶特異序列（C5mCGG）失去作用，有利于限制酶及甲基化酶的克隆體的穩(wěn)定。②mcrBC基因表達(dá)McrB和McrC兩種特異性蛋白，它們?cè)贓.coli的防御系統(tǒng)中起重