中國(guó)藥科大學(xué)生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)課件——小腸吸收實(shí)驗(yàn)

1、生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)(Experiment of Biopharmaceutics),2011-2012學(xué)年(1)學(xué)期,,中國(guó)藥科大學(xué),任課老師：魏元鋒weiyuanfengyuer@yeah.net,,,,,,,,,中國(guó)藥科大學(xué),小腸吸收實(shí)驗(yàn),,,,,,,,中國(guó)藥科大學(xué),,【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?（1）掌握大鼠在體腸管回流的基本操作和方法；（2）通過藥物的大鼠在體腸管回流法實(shí)驗(yàn)，求出藥物的吸收速率常數(shù)（K），半衰期（t 1/2）以及每小時(shí)吸收

2、率等。,,,,,儀器與藥品,,中國(guó)藥科大學(xué),（一）儀器1. 微量輸液器（蠕動(dòng)泵）；2. 752型紫外可見分光光度計(jì)；3. 恒溫水?。?. 紅外燈；5. 其它：搪瓷盤；10 mL離心管；移液管(50、5、2、1和0.5 mL)，100 mL錐形瓶；燒杯(75和50 mL)；注射器(20和1 mL)；眼科剪刀；眼科鑷子；普通中號(hào)鑷子；小剪刀；手術(shù)刀片等。,,,,,儀器與藥品,,中國(guó)藥科大學(xué),（二）試劑1. 0.2%亞硝酸鈉；2

3、. 1%氨基磺酸銨；3. 0.2%津田試劑（用0.2%二鹽酸萘乙二胺代替）（以上置冰箱保存）；4. 1 N HCl；5. 1 N NaOH；6. 生理鹽水；7. Krebs-Ringer磷酸緩沖液(pH 7.4)：每1000 mL內(nèi)含7.8 g氯化鈉，0.35 g氯化鉀，0.37 g氯化鈣，1.37 g碳酸氫鈉，0.22 g磷酸二氫鈉，0.22 g氯化鎂，1.4 g葡萄糖；8. 戊巴比妥鈉溶液（10 mg/mL，大鼠每100

4、 g腹腔注射0.4 mL麻醉）。,,,,,儀器與藥品,,中國(guó)藥科大學(xué),（三）樣品1. 供試液(1 mg%SMZ)溶媒組成同Krebs-Ringer緩沖液。稱取SMZ 10 mg和酚紅20 mg后，加入少量蒸餾水混懸，加入碳酸氫鈉并微熱使溶解（必要時(shí)滴加數(shù)滴1 N NaOH液），得甲液。另將緩沖液的其它成分用蒸餾水溶解，得乙液。將甲液緩緩加入乙液中，添加適量蒸餾水至1000 mL，即得。2. 酚紅液(20 ?g/mL)溶媒組成同K

5、rebs-Ringer緩沖液。稱取酚紅20 mg。加入少量蒸餾水混懸，加入碳酸氫鈉并微熱使溶解（必要時(shí)滴加數(shù)滴1 N NaOH液），得甲液。另將緩沖液的其它成分用蒸餾水溶解，得乙液。將甲液緩緩加入乙液中，添加適量蒸餾水至1000 mL，即得。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 大鼠，200 g左右,,,,,實(shí)驗(yàn)原理,,中國(guó)藥科大學(xué),消化道主要包括胃、小腸和大腸（結(jié)腸），小腸又包括十二指腸、空腸和回腸。小腸最為突出的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是它具有非常巨大的上皮表面積，藥物

6、通過上皮吸收。小腸表面有環(huán)輪狀粘膜皺襞和絨毛突起，絨毛上還有許多微絨毛，大大增加了有效吸收表面積。由于被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)速度與表面積成正比，故小腸既是藥物吸收的主要部位（尤其是十二指腸），又是藥物主動(dòng)吸收的特殊部位。根據(jù)pH分配學(xué)說，對(duì)于以被動(dòng)擴(kuò)散機(jī)制吸收的藥物，未解離型（分子型，非離子型）的有機(jī)弱酸和有機(jī)弱堿易吸收，離子型則難以吸收。理論上弱酸性藥物從酸性溶液中（pH＜pKa）的吸收好；而堿性藥物從堿性溶液中（pH＞pKa）的吸收好。盡管如此

7、，大多數(shù)藥物仍可被小腸迅速吸收，這說明有效吸收表面積是決定吸收速度的主導(dǎo)因素。,,,,,實(shí)驗(yàn)原理,,中國(guó)藥科大學(xué),在體法不損傷研究部位的淋巴和循環(huán)系統(tǒng)而明顯優(yōu)于離體法。但由于腸道能吸收或排泄水分，導(dǎo)致供試液體積變化，可加入不被吸收的標(biāo)記物（如酚紅）來分析校正小腸水轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)藥物濃度的影響。,藥物腸吸收實(shí)驗(yàn)方法,在體實(shí)驗(yàn)法,離體實(shí)驗(yàn)法,腸回流法（2～5mL/min）,單向腸灌流法（0.2～0.3ml/min）,腸襻法,翻轉(zhuǎn)囊法,組織流通室法,

8、分離腸系膜法,細(xì)胞模型法,徐術(shù)，劉忠良，胡晉紅.藥物腸吸收的實(shí)驗(yàn)研究方法概述.中國(guó)藥房，2009，20（16）：1266-1268.翁榕安，李小曼.藥物小腸吸收常用方法比較.。醫(yī)學(xué)綜述，2009，15（2）：269-270.,,,,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),一、大鼠稱重，計(jì)算給藥量,二、大鼠麻醉：將實(shí)驗(yàn)前一夜絕食的大鼠，按40 mg/kg（0.4 mL/100 g）戊巴比妥鈉量作腹腔注射麻醉(翻正反射消失)，并背位固定于固定臺(tái)

9、上。,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),三、腹部除毛：將腹部毛刮除或剪除。,四、小腸兩端插管：沿腹部正中線（腹白線）切開腹部（約3～4 cm），在十二指腸上部(先找到胃)和回腸下部（先找到盲腸）各插入細(xì)玻璃管并用線扎緊，縫合切口（不縫合，上覆以浸有生理鹽水的紗布）。,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),五、洗滌腸管：用37 ℃緩沖液（或生理鹽水），緩緩注入腸管，洗去腸管內(nèi)容物。充分洗凈后送入空氣使洗滌液盡量流盡。注意：1、先將腸管捋順，

10、卻保無死結(jié)； 2、推注時(shí)不要太快，以免漲破腸管； 3、充分洗凈后送入空氣使洗滌液盡量流盡。,六、作成回路：吸取供試液50 mL，從十二指腸上部進(jìn)入腸管并流入貯液瓶中，按圖所示作成回路。開動(dòng)蠕動(dòng)泵記錄開始回流時(shí)間。,,,,,實(shí)驗(yàn)操作,,中國(guó)藥科大學(xué),七、取樣：回流開始后10 min，取樣二份，一份1 mL，另一份0.5 mL，分別作為藥物和酚紅的零時(shí)間樣品。其后每隔10 min亦同樣取樣二份。