實(shí)驗(yàn)蛙骨骼肌及心肌收縮lliu

1、刺激強(qiáng)度、頻率與骨骼肌收縮的關(guān)系,心肌收縮記錄與心肌特性郵箱：animalpe@163.com密碼：123456,實(shí)驗(yàn)二,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)內(nèi)容注意事項(xiàng),基本內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備2.觀察刺激強(qiáng)度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系。掌握閾刺激，閾下刺激，閾上刺激，最大刺激的概念。3.觀察用不同頻率的最大刺激刺激坐骨神經(jīng)對(duì)腓腸肌收縮形式的影響，了解和掌握單收縮、復(fù)合收縮、強(qiáng)直收縮特征和形成的基本原理。4

2、.觀察心肌收縮的特點(diǎn)并與骨骼肌比較。,實(shí)驗(yàn)原理,1. 閾下刺激 閾強(qiáng)度 閾上刺激 最大刺激,2. 單收縮 不完全強(qiáng)直收縮-描記曲線為鋸齒形 完全強(qiáng)直收縮。,3.心肌-具有較長的不應(yīng)期 期前收縮 代償間歇,蟾蜍、蛙板、手術(shù)剪、敷料鑷、刺針、絲線、玻璃分針、燒杯、鋅銅弓、任氏液、滴管、RM6240信號(hào)采集系統(tǒng)、刺激電極。,實(shí)驗(yàn)材料,一．坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備（第21頁）,①破壞中樞神經(jīng)系統(tǒng)：將探針自枕骨

3、大孔(枕骨大孔定位：以脊柱正中線為縱線，兩側(cè)眼后毒腺的連線為橫線，兩線交匯的凹陷處即為枕骨大孔)插入，先左右橫斷脊髓，再向前攪毀腦，然后再將探針撤回，反向插入脊椎管破壞脊髓。檢查蟾蜍四肢全身肌肉完全松馳。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,②剪斷脊柱：用粗剪刀自胸部剪斷脊柱。 ③剪除前肢及內(nèi)臟④去皮膚,一．坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,⑤分離左右下肢：用粗剪刀沿脊柱中線把標(biāo)本分為左右兩半。注意勿損傷神經(jīng)。 ⑥分離坐骨神經(jīng)：大腿背面股二頭肌和半膜肌的夾縫中分離出

4、坐骨神經(jīng)。 ⑦分離肌肉：分離腓腸肌的跟腱，用線結(jié)緊，自跟腱的附著點(diǎn)剪斷。提起跟腱將腓腸肌剝離出來，并將小腿其余部分剪掉，保留一小段(約1.5cm)股骨，,一．坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,一．坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,二.刺激強(qiáng)度對(duì)肌肉收縮的影響,1.標(biāo)本與儀器的連接①股骨斷端固定于肌槽的插孔中，神經(jīng)干搭在刺激電極上，腓腸肌肌腱上的線與換能器相連，換能器與RM6240相連。 ②點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇“刺激強(qiáng)度對(duì)骨骼肌收縮的影響”，儀器參數(shù)

5、：通道模式為張力，采樣頻率400Hz-1kHz，掃描速度1s/div，靈敏度10-30g，時(shí)間常數(shù)：直流，濾波頻率100Hz。,,1.標(biāo)本與儀器的連接,2.觀察項(xiàng)目：,①刺激方式單刺激，刺激幅度0.1-3V可調(diào)，刺激波寬0.1ms。②記錄閾刺激和最大刺激值。③測(cè)量每一刺激強(qiáng)度所對(duì)應(yīng)的肌肉收縮張力；測(cè)量最大刺激時(shí)肌肉的收縮期和舒張期時(shí)間。,三.刺激頻率對(duì)肌肉收縮的影響,1.點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇“刺激頻率對(duì)骨骼肌收縮的影響”，儀器參數(shù)

6、：通道模式為張力，采樣頻率400Hz-1kHz，掃描速度1s/div，靈敏度10-30g，時(shí)間常數(shù)：直流，濾波頻率100Hz。2.系統(tǒng)采用頻率遞增，刺激幅度：最大刺激強(qiáng)度，波寬0.1ms，采用自動(dòng)頻率方式，起始頻率1Hz，結(jié)束頻率30Hz，步長1Hz，串間隔大于5s。刺激頻率按1Hz，2Hz，3Hz，4Hz，5Hz…30Hz逐漸增加，連續(xù)記錄不同頻率時(shí)的肌肉收縮曲線。3.觀察測(cè)量各刺激頻率所對(duì)應(yīng)的肌肉收縮最大張力。,四.蛙心收縮記錄

7、及心肌特性（39頁）,1.破壞蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，打開心包膜。 用帶有絲線的蛙心夾夾住心尖，將絲線連在張力換能器上，再將換能器固定于鐵架臺(tái)上，調(diào)整絲線高度，并將絲線拉緊。將刺激電極安放在心室外壁，使之既不影響心搏又能同心室接觸良好。2.張力換能器接RM6240系統(tǒng)第一通道（也可選擇其它通道），刺激電極與RM6240刺激輸出相連，作刺激標(biāo)記。,3. 點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇“期前收縮-代償間歇”，系統(tǒng)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)信號(hào)記錄狀態(tài)。儀器參數(shù)

8、：第一通道，時(shí)間常數(shù)：直流。濾波頻率：10Hz，靈敏度3g，采樣頻率400Hz，掃描速度1s/div，單刺激模式，閾上刺激強(qiáng)度2-5V，刺激波寬5ms。,四.蛙心收縮記錄及心肌特性,儀器連接,在制備標(biāo)本時(shí)，避免過度牽拉神經(jīng)，避免用手或金屬器械觸碰神經(jīng)干。避免動(dòng)物皮膚分泌物（蟾酥、血液等）污染神經(jīng)和肌肉；不要用水沖洗，以免影響組織機(jī)能。制備標(biāo)本時(shí)，要隨時(shí)用任氏液潤濕神經(jīng)和肌肉，防止干燥。分離神經(jīng)時(shí)，要把周圍結(jié)締組織剝離干凈。實(shí)驗(yàn)要

9、迅速，以免時(shí)間過長影響標(biāo)本活性,◆ 注意事項(xiàng),◆ 注意事項(xiàng),肌肉與換能器的連接松緊適當(dāng)。給予刺激時(shí)，在按刺激器手動(dòng)開關(guān)的同時(shí)，按下記錄儀的“標(biāo)記”，記錄刺激標(biāo)記，用于計(jì)算肌肉收縮的潛伏期。每改變一次刺激頻率后，應(yīng)休息0.5-1 min, 每次刺激不要超過3-4 秒，以免標(biāo)本疲勞。實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)常用任氏液潤濕標(biāo)本，以免影響神經(jīng)和肌肉活性。,NaCl 6.5 g KCl 0.14 g CaCl2