酸性染料比色法

1、第五章 中藥制劑中各類化學(xué)成分分析,藥物分析學(xué)科,掌握中藥制劑中生物堿、黃酮、三萜皂苷、醌類成分的定性、定量原理與方法。熟悉中藥制劑中揮發(fā)性成分、木質(zhì)素類成分的定性、定量原理與方法。了解其他成分（有機(jī)酸類、環(huán)烯醚萜類、香豆素類、單萜及二萜類、多糖類）的分析方法。,【目的要求】,藥物分析學(xué)科,第五章 中藥制劑中各類化學(xué)成分分析,學(xué)習(xí)方法結(jié)構(gòu) 性質(zhì) 分析方法,,,結(jié)構(gòu)：母核、官能團(tuán)、分子量等物理化

2、學(xué)性質(zhì)：溶解性、酸堿性、揮發(fā)性、氧化還原性、 旋光性、光譜特性等分析方法：總類成分：化學(xué)分析法、分光光度法單一成分：各種色譜法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、SFC等）,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,一、概述1、概念：生物堿是生物界除生物體必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和B族維生素等）之外的所有含氮有機(jī)化合物，因其結(jié)構(gòu)中氮原子上的未共享電子對而大多具有堿性。2、含生物堿成分的常用中藥：,藥物

3、分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,二、理化性質(zhì)1、溶解性 大多數(shù)生物堿難溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有機(jī)溶劑； 與酸結(jié)合成鹽后水溶性增加，但酸不同，生成的鹽水溶性有差異；季銨型生物堿、有氮氧配位鍵的生物堿易溶于水 液體生物堿及一些小分子固體生物堿則既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑；含有酸性官能團(tuán)或酯鍵的生物堿還可溶于一些堿液或熱苛性堿液。,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,二、理化性質(zhì)2、沉淀反應(yīng)大多數(shù)

4、生物堿在酸性水溶液中可以與某些試劑生成不溶于水的復(fù)鹽或分子復(fù)合物。生物堿沉淀劑：碘化物復(fù)鹽、重金屬鹽、大分子有機(jī)酸,馬錢子散中生物堿成分的鑒別取馬錢子散1g，加濃氨試液數(shù)滴及氯仿10ml，浸泡數(shù)小時，濾過，取濾液1ml蒸干，殘渣加稀鹽酸1ml使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴，即生成黃棕色沉淀。,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,二、理化性質(zhì)3、顯色反應(yīng)生物堿在一定pH條件下可與一些酸性染料（多為磺酸肽類）生成有色絡(luò)合物

5、，可被氯仿等有機(jī)溶劑定量提出 結(jié)構(gòu)中具有酯鍵的酯堿如烏頭堿等可與異羥肟酸鐵試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色； 這些特點可用于中藥制劑中生物堿成分的分析,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,二、理化性質(zhì)4、紫外光譜特性結(jié)構(gòu)中具有共軛體系的生物堿均有紫外吸收結(jié)構(gòu)中的氮原子與發(fā)色團(tuán)直接連接或參與發(fā)色團(tuán)的生物堿，其吸收峰位置與測定時溶劑的pH有關(guān)。,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,三、定性鑒別1、一般理化鑒別沉淀反應(yīng)是生物堿理化

6、鑒別常用方法，此反應(yīng)一般在酸性水溶液中進(jìn)行制備樣品供試液時必須凈化處理，防止假陽性結(jié)果,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,三、定性鑒別2、薄層色譜法①吸附劑：硅膠、氧化鋁；②展開劑：多以氯仿、苯等低極性溶劑，加入其他溶劑調(diào)整展開劑的極性；③由于硅膠顯弱酸性，強(qiáng)堿性的生物堿在硅膠色譜板上能形成鹽，使Rf值很小或拖尾、形成復(fù)斑等。④顯色劑：常用改良碘化鉍鉀試劑，有時噴碘化鉍鉀試劑之后再噴硝酸鈉試劑，可使樣品斑點更加

7、清晰。如有熒光，不用顯色⑤ 亦可用碘蒸汽、硫酸鈰、碘鉑酸等其他的試劑顯色。,討論：如何改進(jìn)？,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,三、定性鑒別3、紙色譜法可用于生物堿鹽或游離堿的鑒別 4、HPLC：保留時間定性5、GC：可用于小分子生物堿的鑒別,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量測定（一）總生物堿的含量測定1、化學(xué)分析法 ①主要使用酸堿滴定法。②強(qiáng)堿滴定生物堿鹽時，在70%~90%的乙醇介質(zhì)中

8、終點比在水中明顯，因此常將生物堿鹽溶于90%乙醇，再用標(biāo)準(zhǔn)堿乙醇液滴定。③若選擇的溶劑及指示終點方法合適，還可用非水滴定法進(jìn)行④要求：總生物堿的純度較高，用于藥味少成分簡單制劑的測定,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量測定（一）總生物堿的含量測定2、分光光度法 （1）直接測定法①不經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)、利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)行比色測定的方法。②一般用于藥味較少、干擾小的中藥制劑中總生物堿的含量測定。,藥物

9、分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量測定（一）總生物堿的含量測定（2）酸性染料比色法（例題P101）原理： BH++ In- → BH+·In-（水相）→ BH+·In-（有機(jī)相）關(guān)鍵：酸性染料的選擇：甲基橙、溴麝香草酚蘭（BTB）和溴甲酚綠等；pH值的選擇：與生物堿和酸性染料的性質(zhì)有關(guān)。有機(jī)溶劑的選擇：一般用氯仿、二氯甲烷水分的干擾及消除,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量

10、測定（一）總生物堿的含量測定（3）雷氏鹽比色法原理： BH++ [Cr(NH3)2(SCN)4]-→ BH [Cr(NH3)2(SCN)4]測定方法： （復(fù)鹽沉淀）復(fù)鹽沉淀→溶于丙酮（或甲醇）→直接比色測定樣品＋定量過量的雷氏鹽→過濾→濾液→比色測定λmax=520nm（4）異羥肟酸鐵比色法用于含有酯鍵結(jié)構(gòu)的生物堿的測定,藥物分析學(xué)科,

11、第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量測定（二）單體生物堿成分含量測定1、TLCS①生物堿不具有紫外吸收或揮發(fā)性時可用本法測定；②選用的吸附劑、展開劑及顯色方法與鑒別相似； ③使用改良碘化鉍鉀等作為顯色劑時，必須完全揮干展開劑后（尤其在堿性環(huán)境下展開的）才可噴灑，否則背景深、反差小，影響測定。,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量測定（二）單體生物堿成分含量測定2、HPLC(例題P105)①以反相高效液相色譜

12、應(yīng)用較多；②在反相高效液相色譜中，由于硅膠表面殘留硅醇基的影響，使生物堿分析易產(chǎn)生保留時間延長、峰形變寬、拖尾；③可在流動相中加入硅醇基抑制劑、離子對試劑等措施以克服游離硅醇基的影響，滿足定量分析的要求；④中藥制劑中生物堿成分進(jìn)行高效液相色譜法測定時，使用較多的是紫外檢測器。,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,四、含量測定（二）單體生物堿成分含量測定3、GC①只適用于有揮發(fā)性的，遇熱不分解的生物堿類，如麻黃堿、

13、檳榔堿、苦參堿和顛茄類生物堿等 ②制備供試品溶液時一般應(yīng)采用冷提取，凈化過程也要避免加熱以防成分的流失，最后需用氯仿等低極性有機(jī)溶劑為溶媒制備成供試液。,藥物分析學(xué)科,第一節(jié) 生物堿類成分分析,五、常見生物堿成分分析,第一節(jié) 生物堿類成分分析,五、常見生物堿成分分析,第一節(jié) 生物堿類成分分析,五、常見生物堿成分分析,藥物分析學(xué)科,第二節(jié) 黃酮類成分分析,一、概述1、定義：黃酮類化合物是指基本母核為2-苯基色原酮（2-p

14、henylchromone）類化合物，現(xiàn)在則是泛指兩苯環(huán)通過中央三碳鏈相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。2、含黃酮類成分的常見中藥,藥物分析學(xué)科,第二節(jié) 黃酮類成分分析,二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)1、結(jié)構(gòu)特征,藥物分析學(xué)科,第二節(jié) 黃酮類成分分析,二、理化性質(zhì)2、溶解度①黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或苷元、單糖苷、雙糖苷或三糖苷）不同而有很大差異。②游離苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶

15、劑及稀堿液中；③黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑中，但難溶或不溶于苯、氯仿等。,藥物分析學(xué)科,第二節(jié) 黃酮類成分分析,二、理化性質(zhì)3、酸堿性酸性：黃酮類化合物因分子中多有酚羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。酸性強(qiáng)弱：7,4‘- 二羥基> 7-或4‘- 羥基> 一般酚> 5-羥基堿性氧原子的性質(zhì),藥物分析學(xué)科,第二節(jié) 黃酮類成分分析,二、理化性質(zhì)4、顯色反應(yīng)鹽酸-

16、鎂粉（鋅粉）反應(yīng)金屬鹽類試劑的配合反應(yīng)可用于鑒別，但要避免假陽性結(jié)果 5、紫外光譜特征,藥物分析學(xué)科,第二節(jié) 黃酮類成分分析,三、定性鑒別1、理化鑒別鹽酸-鎂粉（鋅粉）反應(yīng)金屬鹽類試劑的配合反應(yīng)2、色譜鑒別吸附劑：硅膠、聚酰胺硅膠色譜分離弱極性化合物較好；聚酰胺色譜分離含游離酚羥基的黃酮及其苷為佳；纖維素薄層則適用于分離多糖苷混合物。顯色反應(yīng)：采用在紫外光下觀察熒光和噴顯色劑相配合的方法。,藥物分析學(xué)科,第二節(jié)

17、 黃酮類成分分析,四、含量測定1、總成分的含量測定直接測定：常用蘆丁作對照測定顯色測定：常用鋁鹽做顯色劑2、單體黃酮成分的含量測定TLCSHPLC（05版藥典全部使用此法）五、常見黃酮類成分（略）,藥物分析學(xué)科,第三節(jié) 三萜皂苷類成分分析,一、概述1、概念2、含三萜皂苷類成分的常用中藥,第三節(jié) 三萜皂苷類成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),1、溶解度：①可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇、熱甲醇和熱乙醇中，幾不溶于或難

18、溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑；②在含水丁醇或戊醇中溶解度較好,藥物分析學(xué)科,第三節(jié) 三萜皂苷類成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),1、溶解度皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙—可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇等，在丁醇、戊醇中溶解性較好。2、紫外光譜特征,藥物分析學(xué)科,第三節(jié) 三萜皂苷類成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),3、顯色反應(yīng)醋酐-濃硫酸反應(yīng)五氯化銻反應(yīng)三鋁醋酸反應(yīng)冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)氯仿-硫酸反應(yīng)金屬鹽類反

19、應(yīng)：+鉛、鋇、銅鹽→沉淀,藥物分析學(xué)科,第三節(jié) 三萜皂苷類成分分析,三、定性鑒別,1、理化鑒別 ①泡沫反應(yīng)：多用于檢驗含有皂苷的原料藥； ②化學(xué)顯色反應(yīng)：僅在組成藥物較少的中藥制劑中使用。2、TLC吸附劑：硅膠，氧化鋁、硅藻土等。展開劑：氯仿-甲醇-水（13：7：2）（10℃以下放置，下層）氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）（同上）顯色劑：不同濃度的硫酸乙醇液最常用。,藥物分析學(xué)科,第三節(jié) 三萜皂

20、苷類成分分析,四、定量分析,（一）總成分分析1、重量法 ①該法主要用于含皂苷的原料藥質(zhì)量控制。②在中藥制劑中，當(dāng)處方中藥味含皂苷類成分較多時，常用正丁醇作溶劑，測定正丁醇浸出物。2、比色法： ①常用顯色劑有：香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、濃硫酸以及亞甲藍(lán)等。②注意測定單體皂苷（或皂苷元）與總皂苷的換算系數(shù)。,藥物分析學(xué)科,第三節(jié) 三萜皂苷類成分分析,四、定量分析,（二）單體成分分析1、TLC

21、薄層洗脫-比色法薄層掃描法2、HPLCHPLC-UV：人參皂苷、三七皂苷等可利用其在紫外區(qū)的末端；有紫外吸收的甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷，靈敏度高。HPLC-ELSD：檢測三萜皂苷類成分的應(yīng)用日漸廣泛五、常見三萜皂苷類成分,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,一、概述1、概念：中藥中醌類化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類型可游離存在，也可與糖結(jié)合成苷，稱為蒽苷。2、含醌類成分的常用中藥,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分

22、分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),丹參醌I(xiàn)IA,大黃素,1、物理性質(zhì)：存在的形態(tài)，升華性，光不穩(wěn)定性2、溶解性：游離醌類多溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿等有機(jī)溶劑，微溶于或不溶于水。結(jié)合成苷后極性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在熱水中也可溶解，幾乎不溶于苯、乙醚、氯仿等非極性溶劑中。,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)3、酸性：酚羥基的酸性→堿提酸沉法4、顯色反應(yīng)羥基蒽醌+堿→橙，紅，紫紅，藍(lán)+Pb2+/Mg2+ →配

23、合物9、10位未取代的羥基蒽酮化合物+對亞硝基二甲基苯胺 →紫，綠，藍(lán)，灰,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,三、定性鑒別1、顯色反應(yīng)2、升華法3、TLC吸附劑：硅膠展開劑：乙酸乙酯-甲醇-水（100︰16.5︰13.5）適于分離蒽醌苷元和蒽醌苷，不含水或甲醇的混合溶媒適合于分

24、離蒽醌類的苷元。顯色方法：噴堿性試劑，噴醋酸鎂甲醇液、氨氣熏及在紫外燈下觀察熒光，可見光下直接觀察色斑。,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,四、含量測定1、游離蒽醌的測定：弱極性溶劑提取后，加堿比色2、結(jié)合蒽醌的測定：極性溶劑提取，水解測苷元 先酸水解后，非極性溶劑提取苷元后測定3、單體成分的含量測定TLCSHPLC-UV,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,四、含量測定例1、牛黃解毒片中游

25、離蒽醌和總蒽醌的測定—混合堿液比色法對照品溶液測定：以1，8-二羥基蒽醌為對照品，精密稱取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度（100µg/mL）。取1mL對照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿溶解并稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm波長處測定。樣品測定：⑴游離蒽醌的測定：取牛黃解毒片10片，刮去糖衣，精密稱定重量，研

26、細(xì)。稱取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，稱重，水浴上回流4小時，取下，加塞，放冷，稱重，用氯仿補(bǔ)充至原重量，濾過，吸取濾液50mL于分液漏斗中，用蒸餾水20mL洗滌數(shù)次，至水層無色，棄去水液。氯仿層用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數(shù)次，直至混合堿液無色，合并堿液，用20mL氯仿洗滌數(shù)次，至氯仿層無色，棄去氯仿層。將混合堿液在水浴上加熱數(shù)分鐘至氯仿?lián)]盡，冷卻，移入100mL量瓶中，并稀釋至刻度，放

27、置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm處測定，計算游離蒽醌的含量（相當(dāng)于1，8-二羥基蒽醌含量）。,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,四、含量測定例1、牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合堿液比色法⑵總蒽醌的測定：精密稱取游離蒽醌項下的牛黃解毒片粉一片置于150mL燒瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小時，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小時，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，

28、反復(fù)操作至氯仿無色為止。合并氯仿層液，用蒸餾水洗滌數(shù)次，至水層無色，棄去水液。氯仿液用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數(shù)次，至堿液無色，合并，用20mL氯仿洗滌數(shù)次，至氯仿層無色，棄去氯仿液。將堿液置水浴上加熱至氯仿?lián)]盡，冷卻，移入50mL量瓶中，用混合堿液稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨液為空白，在510nm處測定，計算游離蒽醌的含量（相當(dāng)于1，8-二羥基蒽醌含量）。 ⑶結(jié)合蒽醌的計算：

29、每片含結(jié)合蒽醌量=每片含總蒽醌量—每片含游離蒽醌量。,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,四、含量測定例2、復(fù)方丹參片中丹參酮ⅡA含量測定—高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（73：27）為流動相；檢測波長為270nm。對照品溶液的制備：精密稱取丹參酮ⅡA對照品10mg，置50mL棕色量瓶中用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，

30、即得（每1mL中含丹參酮ⅡA40µg）供試品溶液的制備：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10µL，注入液相色譜儀，測定，即得。,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,五、常見醌類成分,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分

31、分析,五、常見醌類成分,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,五、常見醌類成分,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,五、常見醌類成分,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,五、常見醌類成分,藥物分析學(xué)科,第四節(jié) 醌類成分分析,五、常見醌類成分,藥物分析學(xué)科,第五節(jié) 揮發(fā)性成分分析,一、概述揮發(fā)性成分是指中藥中一類具有芳香氣并易揮發(fā)的成分，其化學(xué)組成復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油類成分和其他分子量較小、易揮發(fā)的化合物。含揮發(fā)油成分的常

32、用中藥,藥物分析學(xué)科,第五節(jié) 揮發(fā)性成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),薄荷醇,桂皮醛,檸檬烯,1、溶解性：易溶于有機(jī)溶劑2、顯色反應(yīng)：酚類+三氯化鐵→藍(lán)，藍(lán)紫，綠羰基+苯肼、羥胺→結(jié)晶體醛類+硝酸銀胺→銀鏡內(nèi)酯類+亞硝酰鐵氰化鈉+NaOH→紅色并逐漸消失奧類+濃硫酸→藍(lán)，紫,藥物分析學(xué)科,第五節(jié) 揮發(fā)性成分分析,三、定性鑒別,TLC吸附劑：硅膠、氧化鋁展開劑：石油醚、正己烷（加少量乙酸乙酯或苯）顯色劑：茴香醛-濃硫酸試

33、劑（通用型）， 若干擾較多，選用專屬性強(qiáng)的顯色劑GC：對照品對照法定性GC-MSGC-FTIR,藥物分析學(xué)科,第五節(jié) 揮發(fā)性成分分析,四、定量分析,總成分分析：蒸餾法單體成分分析：GC（首選）HPLCTLCSGC-MSGC-FTIR,藥物分析學(xué)科,第六節(jié) 木脂素成分分析,一、概述木脂素是一類在生物體內(nèi)由二分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。含木脂素類成分的常用中藥：,藥物分析學(xué)科,第六

34、節(jié) 木脂素成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),牛蒡子苷(元),五味子甲素,,1、溶解性游離—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等成苷時—可溶于甲醇、乙醇等,藥物分析學(xué)科,第六節(jié) 木脂素成分分析,二、結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),2、紫外光譜特征λmax=250-350nm3、顯色反應(yīng)通用型顯色劑：磷鉬酸乙醇、硫酸乙醇Labat反應(yīng)：+硫酸+沒食子酸→藍(lán)綠 Ecgrine反應(yīng)：+硫酸+變色酸→藍(lán)紫,藥物分析學(xué)科,第六節(jié) 木脂素成分分析,三、

35、定性分析TLC吸附劑：硅膠展開劑：親脂性溶劑（苯、氯仿，加甲醇等）顯色：香草醛試液，濃硫酸試液，磷鉬酸乙醇溶液、碘熏四、含量測定總成分：變色酸比色法單體成分：TLCSHPLC,藥物分析學(xué)科,第六節(jié) 木脂素成分分析,五、常見木脂素類成分,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,一、香豆素類成分香豆素是具有苯駢吡喃酮母核的內(nèi)酯類衍生物廣泛存在于蕓香科和傘形科的植物中。1、主要結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì),補(bǔ)骨脂素,茵陳內(nèi)酯,異羥肟

36、酸鐵反應(yīng)：酚羥基-三氯化鐵顯色反應(yīng)：紫外光譜特性：λmax=300nm，母核有供電子基團(tuán)取代可產(chǎn)生熒光,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,一、香豆素類成分2、定性鑒別熒光法薄層熒光鑒別,七寶美髯顆粒中補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的鑒別取本品10g，研細(xì)，加醋酸乙酯20ml、鹽酸0.5ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作為供試品溶液。薄層條件：硅膠G薄層板，展開劑正已烷—醋酸乙酯（4:

37、1），顯色劑為10%氫氧化鉀甲醇溶液，紫外光燈365nm下檢視。,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,一、香豆素類成分3、含量測定可見-紫外分光光度法：熒光光度法：專屬性強(qiáng)TLCS：薄層熒光掃描HPLC：C18，甲醇-水，UVD or FDGC：分子量小，具有揮發(fā)性,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,一、香豆素類成分,烏蛇止癢丸中蛇床子素的含量測定色譜條件 固定相：OV-1，2m×3mmID玻璃柱；氣體

38、流速：N2 30ml/min，H2 50ml/min，Air 500ml/min；柱溫：200℃；進(jìn)樣器和檢測器溫度：260℃。供試品溶液和對照品溶液的制備 精密稱取內(nèi)標(biāo)物正廿三烷適量，加氯仿溶解，制成每1ml約含6mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。取烏蛇止癢丸適量，研成細(xì)粉，精密稱取約5g，置索氏提取器中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5.0ml，加氯仿80ml，回流至近無色。將提取液濃縮至數(shù)毫升，通過3g小型硅膠柱，用氯仿洗脫至10ml量瓶中，加氯仿

39、至刻度，搖勻，作為供試品溶液。稱取蛇床子素約25mg，加入內(nèi)標(biāo)溶液5.0ml，振搖使溶解，搖勻，作為對照品溶液。校正因子的測定 精密吸取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣3～5次，每次2μl，按峰面積計算校正因子。樣品測定 精密吸取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣3～5次，每次2µl，用校正因子計算樣品含量。,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,二、有機(jī)酸類成分1、定性鑒別吸附色譜分配色譜2、含量測定酸堿滴定法→總有機(jī)酸分光光度法

40、高效液相色譜法薄層色譜法其他方法,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,三、環(huán)烯醚萜類成分特殊的單萜物理性狀（存在的形態(tài)；多苦味；穩(wěn)定性差，易聚合）溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇薄層定性鑒別吸附劑：硅膠、聚酰胺顯色劑：硫酸乙醇，茴香醛試液，香草醛硫酸試液，對二甲氨基苯甲醛硫酸試液,龍膽苦苷,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,三、環(huán)烯醚萜類成分含量測定高效液相色譜法薄層掃描法熒光分光光度法

41、分光光度法,復(fù)方梔子沖劑中梔子甙的含量測定精密稱取本品3g，置索氏提取器內(nèi)，加甲醇回流提取6小時，回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，通過已處理好的活性炭-中性氧化鋁柱，用甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用2ml甲醇溶解，作為供試品溶液。薄層條件：硅膠GF254薄層板，展開劑氯仿—甲醇—25%氨水（4:1:0.1），檢測波長247nm，參比波長370nm。,,,藥物分析學(xué)

42、科,第七節(jié) 其他成分分析,四、單萜及二萜類成分1、含芍藥甙中藥制劑的分析薄層色譜高效液相色譜2、含穿心蓮內(nèi)酯中藥制劑的分析薄層色譜回滴法比色法—總內(nèi)酯薄層掃描或高效液相色譜法—單體成分,穿心蓮內(nèi)酯,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,五、多糖1、鑒別TLC：硅膠、纖維素、硅藻土 PC：展開劑：正丁醇、水混合體系 顯色劑：苯胺-鄰苯二甲酸的正丁醇飽和水溶液等CE：濾紙電泳、玻璃纖維紙電泳、醋酸纖

43、維薄膜電泳、凝膠電泳HPLC：氨基柱GC-MS：酸水解→中和→柱前衍生→GC-MS 2、提取分離：水提醇沉※防止水解，注意消除酶、酸、堿等的影響,藥物分析學(xué)科,第七節(jié) 其他成分分析,五、多糖3、含量測定1）總多糖的測定（例題P153）3,5-二硝基水楊酸比色法→棕紅色（550nm）苯酚-硫酸法→藍(lán)綠色（480-490nm）蒽酮-硫酸法→黃綠色（620nm）2）單體多糖的含量測定高效凝膠液相色譜法→確定分子量高效

44、液相色譜法→確定組成色譜柱：氨基鍵合相硅膠柱，或普通硅膠柱檢測器：示差折光檢測器,藥物分析學(xué)科,習(xí) 題,1、當(dāng)采用硅膠薄層色譜法鑒別生物堿成分時，為什么常有斑點Rf值較小或斑點明顯拖尾的現(xiàn)象？可采用哪些方法克服？ 2、酸性染料比色法測定中藥制劑中生物堿成分時，關(guān)鍵是什么？3、簡述聚酰胺薄層色譜分離黃酮類化合物的原理和特點。4、簡述HPLC-ELSD檢測人參皂苷等成分的優(yōu)點。5、總多糖的主要含量測定方法有哪些？ 6、設(shè)計：