亞慢性接觸TCDD對SD大鼠海馬區(qū)學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白NMDAR2B和CREB的影響.pdf

1、背景和目的：
　　2，3，7，8-四氯代二苯-并-二噁英(TCDD)是一種典型的持久性環(huán)境有機(jī)污染物，具有較強(qiáng)的脂溶性，難降解性，急性或大劑量暴露可對人類及動物的神經(jīng)系統(tǒng)造成損害，影響其學(xué)習(xí)記憶能力。目前認(rèn)為海馬在學(xué)習(xí)記憶過程中起到非常重要的作用，前期通過多種實(shí)驗(yàn)也證實(shí)TCDD對海馬的影響與學(xué)習(xí)記憶能力的下降有密切關(guān)聯(lián)，但具體影響機(jī)制尚不完全明確。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，探索亞慢性接觸TCDD對大鼠海馬區(qū)學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白NMDA

2、R2B和CREB的影響，以進(jìn)一步揭示TCDD的神經(jīng)毒性作用機(jī)理。
　　材料和方法：
　　選取1月齡SD大鼠120只，隨機(jī)分為4組，每組30只，雌雄各半。設(shè)3個TCDD劑量組(2ng/kg/日，10ng/kg/日，50ng/kg/日)，一個對照組(玉米油)。13周后取大鼠雙側(cè)海馬組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)，檢測海馬各區(qū)NMDAR2B、p-CREB和CREB蛋白表達(dá)；進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn)，檢測三種蛋白在海馬組織中的含量。數(shù)

3、據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)后，采用單因素方差分析、協(xié)方差分析、兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和Wilcoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析，組間多重比較采用LSD法。P≤0.05表示差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1亞慢性TCDD染毒大鼠基本情況
　　TCDD處理組未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，大鼠體重在各組間差別均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　形態(tài)觀察：鏡下可見各組大鼠海馬均有大量免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元，CREB和p-CREB主要定位

4、于神經(jīng)細(xì)胞胞核，呈棕黃色。NMDAR2B陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜上，呈棕黃色。
　　2.1 NMDAR2B免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　CA1區(qū)各組間分析結(jié)果：10ng/kgTCDD和50ng/kg TCDD組NMDAR2B表達(dá)低于對照組(P<0.05)和2ng/kgTCDD組(P<0.05)，但對照組和2ng/kgTCDD組之間，10ng/kg和50 ng/kgTCDD組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　CA3

5、區(qū)各組間分析結(jié)果：50ng/kg TCDD組免疫陽性表達(dá)均低于對照組(P<0.05)和2ng/kgTCDD組(P<0.05)，對照組和2ng/kgTCDD組以及10ng/kgTCDD組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　海馬CA2區(qū)、CA4區(qū)和DG區(qū)各劑量組之間NMDAR2B表達(dá)均顯示差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，尚不能認(rèn)為TCDD處理使NMDAR2B在這三區(qū)的表達(dá)有差別。
　　2.2 CREB免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)分

6、析結(jié)果
　　CA1區(qū)各組 CREB表達(dá)情況：50ng/kg TCDD組低于對照組、2ng/kgTCDD組和10 ng/kgTCDD組(P<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但對照組、2ng/kgTCDD、10ng/kg TCDD組三組之間，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　CA2區(qū)各組CREB表達(dá)情況：50ng/kg TCDD組CREB蛋白表達(dá)低于對照組(P<0.05)，其他三組之間CREB表達(dá)無差別(P>0.05)。

7、r>　　CA3區(qū)各組CREB表達(dá)情況：50ng/kg TCDD組低于對照組(P<0.05)和2ng/kg TCDD組。對照組、2ng/kg TCDD組、10ng/kg TCDD組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　海馬 CA4區(qū)與DG區(qū) CREB表達(dá)結(jié)果相同，即蛋白表達(dá)在各劑量組之間并無差異(P>0.05)。
　　2.3 p-CREB免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　CA1區(qū)各組p-CREB表達(dá)情況：10 ng/k

8、gTCDD和50 ng/kgTCDD蛋白表達(dá)均低于對照組(P<0.05)，但對照組和2ng/kgTCDD組之間，10 ng/kgTCDD和50 ng/kgTCDD組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　CA2區(qū)各組p-CREB表達(dá)情況：10ng/kgTCDD和50ng/kg TCDD組均低于對照組(P<0.05)和2ng/kgTCDD組(P<0.05)，但對照組和2ng/kgTCDD組之間，10ng/kg和50 ng/kgT

9、CDD組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　海馬CA3區(qū)50 ng/kg TCDD組p-CREB表達(dá)低于對照組(P<0.05)，其他三組之間表達(dá)則未顯示有差別(P>0.05)。CA4與DG區(qū)四組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3 Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　3.1 NMDAR2B WB數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　同一劑量組大鼠兩性別CREB表達(dá)的結(jié)果顯示，任一劑量組雌鼠與雄鼠之間相比，差別均

10、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　同一性別各組間 NMDAR2B蛋白表達(dá)比較發(fā)現(xiàn)：(1)雌性大鼠10ng/kgTCDD和50 ng/kgTCDD組蛋白表達(dá)低于對照組和2ng/kgTCDD組(P<0.05)，而對照組和2ng/kgTCDD組之間，10ng/kgTCDD和50 ng/kgTCDD組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)雄性大鼠50 ng/kgTCDD組蛋白表達(dá)顯著低于其余三個 TCDD劑量組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

11、P<0.05)；而對照組、2ng/kgTCDD組和10 ng/kgTCDD之間蛋白表達(dá)無差異(P>0.05)。
　　在不區(qū)分性別的整體組間比較中，10 ng/kgTCDD組和50 ng/kgTCDD組NMDAR2B蛋白表達(dá)均低于對照組和2ng/kgTCDD組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。10 ng/kgTCDD組和50 ng/kgTCDD組之間，對照組和2ng/kgTCDD組之間，差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

12、　　3.2 CREB WB數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　同一劑量組大鼠兩性別CREB表達(dá)的比較顯示，任一劑量組的雌鼠與雄鼠之間CREB蛋白表達(dá)相比，差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　同一性別各組間CREB蛋白比較顯示：雌性大鼠CREB蛋白表達(dá)在四個劑量組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。雄性大鼠與雌性大鼠結(jié)果相同。
　　在不區(qū)分性別的整體組間比較中，對照組與三個TCDD劑量組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，不同劑量組

13、間未顯示CREB表達(dá)差異。
　　3.3 p-CREB WB數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　同一劑量組兩性別p-CREB表達(dá)的比較：(1)對照組、2ng/kgTCDD組、10ng/kg組雌鼠與雄鼠p-CREB蛋白表達(dá)量相比，差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)50ng/kgTCDD組雄鼠p-CREB蛋白表達(dá)量低于雌鼠，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　同一性別各組間p-CREB蛋白表達(dá)的比較：雌性大鼠四組之間相比，50ng

14、/kg TCDD組低于其余三組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；雄性大鼠與雌性大鼠有相似趨勢，也即50 ng/kg組蛋白表達(dá)最低(P<0.05)。
　　不區(qū)分性別的四組間比較中，50ng/kg TCDD組低于對照組(P<0.05)；對照組、2ng/kgTCDD組、10ng/kg組之間，差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；2ng/kgTCDD組、10ng/kg組與50ng/kgTCDD之間，也未顯示有差別(P>0.05)。
　　3.4 WB

15、實(shí)驗(yàn)p-CREB/CREB數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　同一劑量組兩性別p-CREB/CREB比值的比較：(1)對照組、2ng/kgTCDD組、10ng/kg組雌鼠與雄鼠的比值相比，差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)50ng/kgTCDD組雄鼠p-CREB蛋白表達(dá)量占CREB總量低于雌鼠，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　同一性別各組間p-CREB/CREB比值的比較：雌性大鼠四組之間相比，50ng/kg TCDD組低于其

16、余三組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而對照組、2ng/kgTCDD組、10 ng/kg組之間則顯示無差別；雄性大鼠與雌性大鼠有同樣趨勢，也即50 ng/kg組兩者比值最低(P<0.05)。
　　不區(qū)分性別的四組間比較中，50ng/kg TCDD組二者比值顯著低于對照組、2ng/kg組、10ng/kg組(P<0.05)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而對照組、2ng/kg組與10ng/kg組之間，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。