實(shí)驗(yàn)六病毒的觀察與培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)方法與形態(tài)觀察

1、實(shí)驗(yàn)六　病毒的觀察與培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)方法與形態(tài)觀察,,醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn),,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.病毒的觀察：形態(tài)觀察及生長(zhǎng)狀況觀察2.病毒的培養(yǎng)3.真菌的培養(yǎng)、形態(tài)觀察（真菌的單染法）和淺部真菌病臨床標(biāo)本檢查,,1.病毒的觀察（1）病毒的形態(tài)觀察（2）病毒的生長(zhǎng)狀況觀察,,?病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu),痘病毒 脊髓灰質(zhì)炎病毒 鼻病毒,上為模式圖，下為電子顯微鏡下觀察結(jié)果,,煙草花葉病毒 狂犬病毒 噬菌

2、體,上為模式圖，下為電子顯微鏡下觀察結(jié)果,,（2）病毒的生長(zhǎng)狀況觀察病毒在細(xì)胞中生長(zhǎng)繁殖的指標(biāo)：1) 細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE）: 有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)可引起細(xì)胞發(fā)生特有的形態(tài)學(xué)變化（細(xì)胞病變），稱為細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE ）。2）包涵體 (inclusion body)：3）紅細(xì)胞吸附：4）干擾現(xiàn)象：,正常細(xì)胞,細(xì)胞病變效應(yīng)CPE,示教：病毒感染細(xì)胞CPE/正常細(xì)胞,Negri bo

3、dy in a neuron,示教：病毒包涵體,2.病毒的培養(yǎng),病毒的培養(yǎng)方法包括： （1）動(dòng)物接種 （2）雞胚培養(yǎng) （3）細(xì)胞培養(yǎng),（1）動(dòng)物接種,（2）雞胚培養(yǎng)：目前主要用于流感病毒的分離培養(yǎng)。,,,,（3）細(xì)胞培養(yǎng)：將人或動(dòng)物離體組織塊或分散的活細(xì)胞，模擬體內(nèi)的生理?xiàng)l件在試管或培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加以培養(yǎng)，使之生存和生長(zhǎng)，稱為組織培養(yǎng)。目前一般所指的組織培養(yǎng)多指單層細(xì)胞培養(yǎng)。 是目前最常用的方法。常用的細(xì)胞有：①原代培養(yǎng)細(xì)胞：

4、采用機(jī)械或胰蛋白酶等處理離體的新鮮組織器官，制成分散的單個(gè)細(xì)胞懸液，加入生長(zhǎng)液后，分裝于培養(yǎng)管中培養(yǎng)，活細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)繁殖，數(shù)天后形成單層細(xì)胞，稱原代細(xì)胞培養(yǎng)。 ②二倍體細(xì)胞株：原代細(xì)胞經(jīng)過多次傳代仍能保持二倍體特性，稱為二倍體細(xì)胞株。 ③傳代細(xì)胞系或株：來源于腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞株在傳代過程中變異的細(xì)胞系，是能在體外無限傳代的細(xì)胞系。,動(dòng)物細(xì)胞原代培養(yǎng)過程圖,示教：原代細(xì)胞培養(yǎng)錄像,,3.真菌的培養(yǎng)與形態(tài)觀察（1）真菌的培養(yǎng)方法（2）

5、真菌的形態(tài)觀察（3）淺部真菌病臨床標(biāo)本檢查,（1）真菌的培養(yǎng),真菌的營(yíng)養(yǎng)要求不高；　常用沙保弱培養(yǎng)基(Sabouraud′s　medium)：　　　　　　　蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。　溫度：22～28℃，但某些深部感染的真菌為37℃?！H：4.0～6.0　生長(zhǎng)速度:較慢,可出現(xiàn)三種菌落：（1）酵母型菌落：與細(xì)菌菌落相似，圓形，表面光滑、濕潤(rùn)、柔軟而致密、乳白或奶油色。（2）類酵母菌落：菌落表面同酵母型菌落，在菌落根

6、部有假菌絲伸向培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)，乳白色。（3）絲狀菌落：是多細(xì)胞真菌的菌落形式，由許多疏松的菌絲體構(gòu)成，菌落呈棉絮狀，絨毛狀或粉末狀、菌落中央有皺褶，外圍有放射狀溝，多為茶褐色。,白假絲酵母(血平板),黃曲霉,示教：酵母、類酵母型菌落和絲狀真菌菌落,小培養(yǎng)法：小培養(yǎng)法是采用真菌培養(yǎng)板或普通載玻片進(jìn)行真菌培養(yǎng)。培養(yǎng)物可直接于顯微鏡下檢查，也可經(jīng)染色后觀察。,（2）真菌的形態(tài)觀察,單細(xì)胞真菌：白假絲酵母，卵圓形，革蘭染色陽性，著色不一，可見

7、假菌絲。多細(xì)胞真菌：絲狀菌或霉菌，有菌絲和孢子。,煙曲霉,白假絲酵母,,真菌的單染法（白假絲酵母菌）實(shí)驗(yàn)步驟：①制片（同革蘭染色）②染色：滴加結(jié)晶紫（或堿性亞甲藍(lán)）染色1min，水洗，吸干，油鏡觀察。,,（3）淺部真菌病臨床標(biāo)本檢查淺部真菌病臨床上極為常見，包括手癬、足癬、甲癬、頭癬、體癬和股癬等，其在檢查方面多采用直接鏡檢。示教：皮膚真菌,,實(shí)驗(yàn)材料：白假絲酵母菌一管/小組，結(jié)晶紫1瓶/小組，玻片1個(gè)/人