豬傳染病診斷技術進展

1、30年來我國豬病發(fā)展變化與根治展望,何啟蓋 教授，陳煥春 院士 華中農業(yè)大學動物醫(yī)學院武漢，430070,取得的成績,感謝幾代獸醫(yī)科學家的努力，提高了我國動物疾病控制水平疫苗：我國生物制品數量達到200多種，其中某些弱毒疫苗達到了世界先進水平。 豬偽狂犬基因缺失疫苗，豬大腸桿菌病的基因工程疫苗已開始推廣應用。一批簡便適用的診斷試劑研制成功促進了養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展,主要內容,1、近年來我國豬病發(fā)展變化

2、 多病原混合感染 病原毒力增強 疾病種類增加：老病沒有消滅，新病增加 2、根治展望 消費者因素；養(yǎng)豬企業(yè)自身需求； 獸醫(yī)生物制品研發(fā)技術的進步； 國際交流；法律法規(guī)保障,一、豬病發(fā)展變化,1、單純感染向多病原混合感染發(fā)展細菌之間： 波氏桿菌－產毒性巴氏桿菌病毒之間： 豬瘟－偽狂犬

3、病毒混合感染細菌－病毒： 豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒 + 副豬嗜血桿菌 / 胸膜肺炎放線桿菌 / 鏈球菌,豬呼吸道綜合癥(PRDC), 豬高熱綜合癥 ？？？,,可能存在的原因,A. 免疫抑制疾病： 偽狂犬病 / 藍耳病 / 圓環(huán)病毒.... 破壞淋巴細胞,降低免疫力，使繼發(fā)感染容易發(fā)生B. 病原之間相互作用 PRRSV + 細菌毒素C. 使用霉變飼料,（2）病原毒力發(fā)生變異或增

4、強,圓環(huán)病毒: PCV2b的毒力大于PCV2a 原因：在PCV2a基因組的1042核甘酸發(fā)生胸苷激酶 ( Thymidine, T)的缺失即為PCV2b。 豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒 Nsp2基因的部分缺失 ORF5基因糖基化位點的增加,Kegong Tian1*，June，2007,30個氨基酸缺失,（3）疾病種類增加,老病得到有效控制 豬瘟

5、 豬丹毒，黃白?。ù竽c桿菌） 豬肺疫，仔豬副傷寒 偽狂犬病新病增加 傳染性胸膜肺炎 副豬嗜血桿菌病 藍耳病， 圓環(huán)病毒…..,A.種豬流動頻繁B.診斷技術更新水平提高明確疾病的種類,,二、豬病根治展望,(1) 公眾因素: 消費者食品安全的需求對豬病控制提出了更高的要求; 藥物殘留 人獸共患病病

6、原: 鏈球菌2型;乙型腦炎(2) 企業(yè)內部因素: 經濟效益的驅動，使豬病控制成為企業(yè)自身的追求；,(3) 高效疫苗的研發(fā)和使用,常規(guī)疫苗的改進 豬瘟疫苗: 細胞疫苗和脾淋苗,提高免疫劑量. 口蹄疫雙價苗: 傳染性胃腸炎-流行性腹瀉雙價苗 多血清型病原所致疾病 傳染性胸膜肺炎三價疫苗(血清型1,2,7) 副豬嗜血桿菌雙價疫苗(血清4和5型) 豬鏈球菌

7、滅活疫苗,基因(缺失)工程疫苗,偽狂犬病基因缺失疫苗 以該疫苗株為活載體構建的多價基因工程疫苗 偽狂犬病+乙型腦炎 細小病毒 口蹄疫(VP1) 藍耳病,細菌基因工程疫苗,胸膜肺炎放線桿菌弱毒疫苗 以此疫苗株為載體的呼吸道疾病多價基因工程疫苗沙門氏菌為載體的

8、預防腹瀉疾病的多價疫苗,(4)診斷技術進展,明確所發(fā)生的疾病 種類：傳染性因素：細菌、病毒、支原體、其它微生物； 非傳染性因素 單純感染 /混合感染 是否為人獸共患病利于制定及時合理的控制方案,診斷方法包含:,流行病學方法病理組織觀察血清學檢測病原學檢測分子生物學檢測,抗體檢測方法－血清學,凝集性反應

9、沉淀性反應標記抗體技術有補體參與的反應中和反應,檢測的目的,免疫狀況評估： 定性或定量測定免疫抗體水平診斷疾?。?區(qū)分疫苗免疫動物和自然感染動物；,常用的診斷方法,快速診斷：適用于個體診斷 平板凝集試驗： 乳膠凝集試驗： 免疫膠體金技術大量樣品篩選： 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）,平板凝集試驗,培養(yǎng)的菌體滅活后直接與血

10、清混合，觀察是否出現凝集顆粒，判定陰陽性。,乳膠顆粒（不同直徑大?。?,www.hull.ac.uk/scg/binks/Desforges%20project.htm,www.microgenics.com/Default.aspx?tabid=65,乳膠凝集試驗,病毒或蛋白致敏乳膠顆粒，制備成診斷抗原現場圈舍旁邊檢測抗體，主要是檢測IgM，使用于感染早期診斷

11、 偽狂犬病 細小病毒 乙型腦炎,www.rpi.edu/.../COURSES/NANO/renzo/nano2.html,www.medicine.uiowa.edu/.../modu

12、les.asp?testID=11,技術特點3-5分鐘出現結果實驗條件簡單，操作容易，樣品處理量大。適合于動物偽狂犬病毒感染的早期檢測 乳膠凝集的陰性和陽性反應,陽性結果,陰性結果,顆粒聚于液體邊緣,透明,呈原有的均勻乳狀,膠體金檢測技術,酶聯免疫吸附試驗,將病毒、純化的蛋白質等抗原包被在酶聯板上，通過間接法、競爭法等程序檢測抗體。,用 途,免疫(感染)抗體檢測： 偽狂犬病抗體檢測（gB-ELISA

13、, PrV-ELISA, 中和試驗,免疫熒光) 豬呼吸與繁殖障礙綜合癥：ELISA和IFA區(qū)分疫苗免疫與自然感染豬 偽狂犬病gE-ELISA鑒別診斷盒 傳染性胸膜肺炎ApxIV-ELISA鑒別診斷 口蹄疫3ABC-ELISA鑒別診斷試劑盒,鑒別診斷的原理,偽狂犬?。?gE基因缺失后，gE抗體不能在gE基因缺失疫苗免疫動物中檢測，而野毒感染豬可產生此抗體；傳染性胸

14、膜肺炎 毒素IV僅在感染動物體內表達，并誘導動物產生抗體，滅活苗不含有毒素IV,所以免疫動物不能產生針對毒素IV的抗體；口蹄疫: 口蹄疫病毒NS1為非結構蛋白，僅在病毒復制時產生；在滅活苗中不存在（或含量低），動物免疫后體內不產生抗NS1抗體，但活病毒感染動物可產生此類抗體。,抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗－適用于大規(guī)模樣本病毒抗原的檢測,www.gbichina.com/companynews.htm,,近

15、年來分子生物學與微電子學等多學科交叉融合而成的一項高新技術，用來快速、準確、高通量地檢測目的基因;,Betsy Pierson,發(fā)展高通量的檢測技術基因芯片技術,（DNA microarrays, DNA chips）,雜交(病毒檢測)結果,HZ-VP1-2A-3D,SX-VP1-2A-3D,DQ-VP1-2A-3D,LI-VP1-2A-3D,在PCR儀中熱穩(wěn)定的DNA聚合酶可使短鏈的雙股靶DNA很快地復制成千上萬倍，可以使DNA數

16、量急劇增長而達到檢測極限。理論上，可在2小時內將一個DNA分子擴增到106-109倍，從而大大提高了對其進行分析研究的速度。,聚合酶鏈反應（PCR）技術：,檢測豬呼吸道5種病原菌PCR方法,引物設計,檢測豬呼吸道5種病原菌PCR方法,Bb Mhp App,,Pm Hps,PRRSV-HCV-JEV 多重PCR,6、7、9 號血清樣品為PRSSV變異株單一感染；11，12號樣品為常規(guī)毒株和變異毒株混合感染；1，2，4，5，8，10，

17、13，14，15號樣品為PRRSV常規(guī)毒株單一感染；3，16號樣品為陰性,部分ORF-7 RT-PCR 陽性樣品中，變異毒株的檢出情況,多重PCR用途：,單獨感染多病原混合感染 胸膜肺炎－副豬嗜血桿菌－巴氏桿菌－支原體混合感染 偽狂犬?。毿〔《荆瓐A環(huán)病毒感染 豬瘟－藍耳?。倚湍X炎病毒感染,繁殖障礙的多重PCR,對流產死胎進行檢測對公豬精液進行實時監(jiān)控,(5) 加強國

18、際交流，結合我國實際情況，消化吸收國際先進經驗,制訂長期的防疫規(guī)劃 　　對一些危害嚴重的畜禽傳染病制訂長期的防疫規(guī)劃，達到最后消滅的目標。如美國通過制訂防疫規(guī)劃，自1962年至1976年經過14年的努力，終于消滅豬瘟，就是一個成功的經驗。,我國的豬瘟偽狂犬病根除與凈化計劃已經啟動,（6）.法律法規(guī)保障,2007年8月30日第十屆全國人民代表大會常務委員會第二十九次會議修訂 新的《中華人民共和國動物防疫法》將于2008年1月1號實施，

19、為動物疾?。òi?。┑念A防提供了法律保障,全國人大法律委員會副主任委員王以銘作關于《中華人民共和國動物防疫法（修訂草案）》審議結果的報告。中新社發(fā)廖文靜 攝,修訂的《動物防疫法》,第一章　總則     第二章　動物疫病的預防     第三章　動物疫情的報告、通報和公布     第四章　動物疫病的控制和撲滅 &

20、#160;   第五章　動物和動物產品的檢疫     第六章　動物診療     第七章　監(jiān)督管理     第八章　保障措施     第九章　法律責任     第十章　附則,豬病類型,一類動物疫病

21、     口蹄疫、豬水泡病、豬瘟、非洲豬瘟二類動物疫?。?豬乙型腦炎、豬細小病毒病、豬繁殖與呼吸綜合癥、豬丹毒、豬肺疫、豬鏈球菌病、豬傳染性萎縮性鼻炎、豬支原體肺炎、旋毛蟲病、豬囊尾蚴病二類動物疫病： 豬?。贺i傳染性胃腸炎、豬副傷寒、豬密螺旋體痢疾 ,豬病控制凈化的前景,前途是光明，道路是曲折的。需要全社會的共同努力感謝對獸醫(yī)行業(yè)的支持,鳴謝,國家“十