生物科學畢業(yè)論文產(chǎn)淀粉酶海洋放線菌的分離、篩選及初步鑒定

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　產(chǎn)淀粉酶海洋放線菌的分離、篩選及初步鑒定</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 生物科學 </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b&g

3、t;</p><p><b>　　摘要I</b></p><p>　　AbstractII</p><p><b>　　引言1</b></p><p><b>　　1材料與方法4</b></p><p>　　1.1分離純化4</p&g

4、t;<p>　　1.1.1實驗儀器4</p><p>　　1.1.2培養(yǎng)基4</p><p>　　1.1.3實驗方法4</p><p>　　1.2產(chǎn)淀粉酶菌株篩選5</p><p>　　1.2.1實驗儀器5</p><p>　　1.2.2培養(yǎng)基及實驗試劑5</p>&

5、lt;p>　　1.2.3篩選實驗5</p><p>　　1.3產(chǎn)淀粉酶放線菌的初步鑒定6</p><p>　　1.3.1形態(tài)觀察6</p><p>　　1.3.2生理生化特性7</p><p><b>　　2結果分析9</b></p><p>　　2.1分離純化結果9

6、</p><p>　　2.2篩選結果9</p><p>　　2.2.1淀粉透明圈結果9</p><p>　　2.2.2Yoo改良法測定酶活結果11</p><p>　　2.3形態(tài)觀察11</p><p>　　2.4生理生化特性15</p><p>　　2.5本章小結16&

7、lt;/p><p><b>　　小結17</b></p><p><b>　　參考文獻18</b></p><p>　　致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　[摘要] 從舟山東極、海濱公園、鴨蛋山碼頭等

8、地區(qū)的潮間帶、灘涂中采集泥樣、水樣，分離到63株放線菌菌株，并采用透明圈法篩選出產(chǎn)淀粉酶能力菌株，對其進行形態(tài)觀察，生理生化實驗及初步鑒定。結果表明共篩選到產(chǎn)淀粉酶的放線菌菌株6株，分別標記為：A7、A18、A27、A28、A30、A46。取淀粉酶酶活較高的2株菌株A46和A30進行相應形態(tài)觀察及生理生化實驗。通過查閱伯杰細菌鑒定手冊（第八版），初步鑒定結果顯示菌株A46可能為小單孢菌屬的一種，菌株A30可能為諾卡氏菌屬的一種。本文的研

9、究結果為舟山海域潮間帶海洋放線菌研究提供了參考。</p><p>　　[關鍵詞] 海洋放線菌；活性物質(zhì)；產(chǎn)淀粉酶；篩選與鑒定</p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　[Abstract]： we collected mud sample and water sample from the intertidal

10、 zones and tidal flats of Zhoushan East Pole, Seashore Park, and Duck Egg Mountain Dock, and separated them into 63 actinomycetes bacterial strains. We adopt the method of transparent loop to select bacterial strains tha

11、t possess the ability of producing amylase, observe their configurations, and process physiology and biochemistry experiment and preliminary appraisal. The result shows that the number of the selected actinom</p>

12、<p>　　[Key words]： marine actinomycete; active material; producing amylase; screen and identify </p><p><b>　　引言</b></p><p>　　酶(Enzyme)是生物體內(nèi)一類具有催化活性和特殊空間構象的生物大分子物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)和核酸。它廣泛存在

13、于各種生物體中，生物體內(nèi)的各種新陳代謝，其大部分的化學變化是在酶的參與下有控制、有秩序的進行的，所以沒有酶就沒有新陳代謝，也就沒有生命活動[1]。</p><p>　　淀粉酶(Amylase)是能催化淀粉水解轉化成葡萄糖、麥芽糖及其它低聚糖的一群酶的總稱，它廣泛存在于動植物和微生物中。淀粉(Starch)作為農(nóng)業(yè)第一大產(chǎn)品，其原料深加工是糧食與食品加工中的重要組成部分。淀粉是發(fā)酵工業(yè)的主要原料,通過發(fā)酵可以生產(chǎn)出

14、眾多產(chǎn)品,如乙醇、甘油、有機酸、氨基酸、酶等,也可以生產(chǎn)高附加值的生物制劑和藥品。通過對淀粉的生化處理可以提高淀粉產(chǎn)品的附加值,這些都需要淀粉酶的參與。淀粉酶是最早用于工業(yè)化生產(chǎn)并且迄今仍是用途最廣、產(chǎn)量最大的酶制劑產(chǎn)品之一，早在數(shù)前年前，人類就已利用高溫與中溫淀粉酶的作用從事釀酒、制飴糖等[2，3]。</p><p>　　酶是由生物體產(chǎn)生的，現(xiàn)在有實用價值的酶一般來自動物、植物和微生物，其中工業(yè)上的酶大多來自微

15、生物產(chǎn)生的酶。</p><p>　　而地球表面積71％的海洋是生命的發(fā)源地，海洋生物處于低溫、高鹽、高壓、寡營養(yǎng)的特殊環(huán)境[4]，其生物多樣性遠遠超過陸地，許多海洋微生物產(chǎn)生多種類型的陸生生物所沒有的生物活性物質(zhì)。但有國外學者認為，海洋微生物中仍有99.5~99.9%卻至今仍未被認識[5]，因此，海洋微生物活性物質(zhì)有著巨大的開發(fā)潛力。同時開發(fā)海洋微生物農(nóng)藥具有發(fā)酵嫻熟、生產(chǎn)成本低廉以及無原料后顧之憂等優(yōu)勢。海洋放

16、線菌是一類特殊的、具有重要價值的微生物。由于海洋環(huán)境的特殊性，賦予生活在海洋中的放線菌在生理性狀和遺傳性的特殊性，因此海洋放線菌具有從中發(fā)現(xiàn)結構新穎的活性物質(zhì)的潛力。據(jù)不完全統(tǒng)計，50%以上新發(fā)現(xiàn)的海洋微生物活性物質(zhì)是由海洋放線菌這個龐大的分類群縮產(chǎn)生的，暗示了開發(fā)海洋放線菌的巨大潛力。微生物藥物是天然藥物極為重要的組成部分[6]。但是，經(jīng)過幾十年長時間的開發(fā)，從陸物找到新活性物質(zhì)的幾率越來越小，篩選的難度也越來越大。因此，開發(fā)生態(tài)環(huán)境

17、及布有別于陸地的海洋微生物資源、尋找新型微生物藥物成為研究的必然趨勢。</p><p>　　1. 幾種主要的放線菌</p><p>　　海洋放線菌是一類革蘭氏陽性（高G+C）海洋細菌，由于其生產(chǎn)豐富的次級代謝產(chǎn)物（如抗生素），因此具有很大的研究潛力和實用價值。海洋放線菌的分布特點如表1-2所示[7]：</p><p>　　表1-2海洋放線菌分布表</p>

18、<p>　　Table1-2 Marine actinomycosis distribution table</p><p><b>　　1.1海洋鏈霉菌</b></p><p>　　鏈霉菌屬也稱鏈絲菌，是放線菌門一個大屬，約有近千種。</p><p>　　鏈絲菌好氣，絕大部分腐生，其基質(zhì)菌絲不斷裂，氣生菌絲分化成直的、彎曲的或螺

19、旋狀的孢子絲，成熟的孢子絲生成鏈狀的分生孢子，故名鏈絲菌。菌落較小而致密，不易挑取，表面呈粉狀、絨狀，并有多種顏色。</p><p>　　鏈霉菌屬的不少菌種在代謝過程中，次級代謝產(chǎn)物為抗生素，如鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素和春雷霉素等；有的菌種可生產(chǎn)蛋白酶、葡萄糖異構酶。</p><p>　　常見于土壤及腐爛植物中，一般聞起來有泥土味道。相較于其他菌種，鏈霉菌屬繁殖較緩慢，但由于代謝過

20、程的抗生素能抑制其他菌種的生長，所以時間一長，鏈霉菌屬就會成為地盤上的優(yōu)勢菌種。</p><p>　　鏈霉菌屬同屬菌種之間大多具有交換RNA的特性，所以新的鏈霉菌屬菌種持繼不斷被發(fā)現(xiàn)。</p><p>　　1.2海洋小單孢菌屬</p><p>　　基因菌絲發(fā)育良好，形成致密小菌落，直徑約3毫米；菌絲纖細，直徑0.2～0.8微米，無鞘,有分枝，不斷裂；一般無氣生菌絲；

21、孢子單個生在基內(nèi)菌絲上， 時常在基絲表面形成褐黑色孢子層，孢子表面光滑、粗糙或有突起;菌落黃橙或橙紅,也有的為絳紅、褐色或綠藍等色；細胞壁化學組分Ⅱ型，即以內(nèi)消旋二氨基庚 二酸和甘氨酸為特征性組份，有時還有少量左旋或羥基二氨基庚二酸；含有阿拉伯糖和木糖；DNA中的G+C克分子含量為71.4～72.8％。 </p><p>　　木屬菌喜潮濕，常見于湖、河的水和泥中，能夠分解一些不易分解的有機質(zhì)，如纖維素、幾丁質(zhì)、木

22、聚糖等。產(chǎn)生多種抗生素，特別是氨基糖苷類，如對綠膿桿菌有特效的慶大霉素等。代表種為青銅小單孢菌。 </p><p>　　放線單孢菌屬 基內(nèi)菌絲上的長柄頂端形成單個大孢子，直徑2.5～3.0微米，無氣生菌絲。至今只記述葡萄牙放線多孢菌1種。</p><p><b>　　1.3 其他</b></p><p>　　諾卡氏菌屬,需氧革蘭氏染色陽性桿菌。

23、菌為多形態(tài)，有球狀、桿狀、絲狀,菌體大小0.6×(3～4)微米,無運動性，有 些菌種呈弱抗酸性，專性需氧,營養(yǎng)要求一般。在普通瓊脂平板上培養(yǎng)3天后有可見菌落，7～10天后菌落凸起,氣生菌絲形成后,表面呈絨毛狀。不同種的菌落 有黃、 橙、紅或這些色素的混合色。DNA中的G+C克分子含量為60～72％。大多為腐生菌,存在于土壤中。對人或動物致病的有星形諾卡氏菌、巴西諾卡氏菌、鼻 疽諾卡氏菌和豚鼠諾卡氏菌4種。</p>

24、<p>　　分枝桿菌（Mycobacterium）屬放線菌門。該屬細菌包括許多已知在哺乳類動物中造成嚴重疾病的病原菌，包括結核桿菌和麻風桿菌。而海洋分枝桿菌（學名Mycobacterium marinum）是一種存在于海水和淡水中的細菌，屬分枝桿菌類，與結核桿菌同屬。在28-32℃水溫最為活躍，超過37℃則較難生存[8]。所以，一但入侵人體，只會在人體的筋膜蔓延，不會入侵溫度較高的內(nèi)臟器官。然而，這并不代表它對人體的危害較輕

25、，因為一但被海產(chǎn)刺傷而感染了這種細菌，傷口只會不斷腫脹，而沒有明顯痛楚[9]。因此，患者可能因此而輕視問題，使病況拖延，而要經(jīng)歷長時間的治療周期（可長達6至9星期）。</p><p>　　本文通過對舟山沿海潮間帶泥樣水樣中分離篩選出的具有產(chǎn)淀粉酶能力的放線菌株的初步研究，為舟山海域潮間帶海洋放線菌研究提供參考。</p><p><b>　　材料與方法</b></

26、p><p><b>　　分離純化</b></p><p><b>　　實驗儀器</b></p><p>　　隔水式恒溫培養(yǎng)箱 GNP-9160型</p><p>　　電子天平 BS110S</p

27、><p>　　冰箱 海爾BCD-257</p><p>　　超凈工作臺 ZHJH-C1115C</p><p>　　干燥培養(yǎng)兩用箱 PHO7OA</p><p>　　電熱恒溫水

28、浴鍋 HHS型</p><p>　　BX數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌鍋 YXQ-LS-30SⅡ</p><p><b>　　培養(yǎng)基</b></p><p>　　高氏一號海水培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，K2HPO4 1g，F(xiàn)eSO4 0.01g，MgSO4?7H

29、2O 0.5g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，瓊脂20g，陳海水1000mL；調(diào)節(jié)pH7.2～7.4，121℃滅菌30min。</p><p><b>　　實驗方法</b></p><p><b>　　樣品處理</b></p><p>　　分別從舟山東極、海濱公園、鴨蛋山碼頭等地區(qū)潮間帶、灘涂，采集泥樣、水樣，為

30、了排除陸地微生物，最好選擇遠離人類干擾的所謂“原始天然海域”作為研究對象[10]。</p><p>　　用滅菌后的小鏟子采集泥樣或水樣。樣品置于塑料瓶,4℃保存。</p><p>　　樣品處理：用無菌藥勺稱取5g海泥樣本于95mL無菌水中，劇烈振蕩制成均勻的混懸液，最后稀釋到10-2、10-3、10-4。</p><p><b>　　分離培養(yǎng)</b&

31、gt;</p><p>　　樣品處理后用高氏一號瓊脂海水培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)，先采用涂布法將各個稀釋度的樣品進行涂布，每個稀釋度做3個重復平板，然后28-30℃培養(yǎng)3-5d，48h以后應經(jīng)常注意觀察平板中菌落生長情況，避免菌苔生成影響分離取樣。</p><p>　　3-5d后觀察平板中的菌落，對不同顏色、形狀的菌落進行劃線分離。劃線采用區(qū)域劃線法，繼續(xù)28-30℃培養(yǎng)48h，然后挑取單個菌落

32、，繼續(xù)重復劃線，重復上述步驟3-5次，基本可以得到較純菌株，然后接種到試管斜面中，于 4℃冰箱冷藏保種備用。</p><p><b>　　抑制劑</b></p><p>　　分離海洋放線菌一般都需要使用抑制劑,建議用放線菌酮(100或50mg/1,000mL)或制霉菌素(100mg/L)加萘啶酮酸(20~25mg/L,000mL)。也可以用放線菌酮(100或50mg/

33、1,000mL)或制霉菌加利富平5~10mg/L,000mL[11]。</p><p>　　本次實驗采用的抑制劑為重鉻酸鉀(150mg/L),能夠既有利于放線菌的生長,又能抑制真菌和細菌的生長。</p><p><b>　　產(chǎn)淀粉酶菌株篩選</b></p><p><b>　　實驗儀器</b></p><

34、;p>　　隔水式恒溫培養(yǎng)箱 GNP-9160型</p><p>　　電子天平 BS110S</p><p>　　冰箱 海爾BCD-257</p><p>　　超凈工作臺

35、 ZHJH-C1115C</p><p>　　干燥培養(yǎng)兩用箱 PHO7OA</p><p>　　電熱恒溫水浴鍋 HHS型</p><p>　　BX數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌鍋 YXQ-LS-30SⅡ</p>

36、<p>　　振蕩搖床 ZHWY-2102C</p><p><b>　　培養(yǎng)基及實驗試劑</b></p><p>　　高氏一號海水培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，K2HPO4 1g，F(xiàn)eSO4 0.01g，MgSO4?7H2O 0.5g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，瓊脂

37、20g，陳海水1000mL；調(diào)節(jié)pH7.2～7.4，121℃滅菌30min</p><p>　　盧氏碘液：1克碘，2克碘化鉀，300毫升水，先將碘化鉀溶于蒸餾水中，待全部溶解后再加碘，振蕩溶解。</p><p><b>　　篩選實驗</b></p><p><b>　　透明圈法</b></p><p&g

38、t;　　原理：淀粉是白色無定形粉末，由直鏈淀粉（占10—30%）和支鏈淀粉（占70—90%）組成。直鏈淀粉能溶于熱水而不呈糊狀，支鏈淀粉不溶于水，熱水與之作用則膨脹而成糊狀。其中溶于水中的直鏈淀粉，呈彎曲形式，并借分子內(nèi)氫鍵卷曲成螺旋狀。這時加入碘酒，其中碘分子便鉆入螺旋當中空隙，并借助范得華力與直鏈淀粉聯(lián)系在一起，從而形成包合物。這種絡合物能比較均勻地吸收除藍光以外的其它可見光（波長范圍為400—750鈉米），從而使淀粉變?yōu)樯钏{色。根

39、據(jù)該原理，可將菌株點種于含可溶性淀粉的固體培養(yǎng)基上，并通過碘液顯色反應產(chǎn)生的透明圈及菌落大小之比，來初步判斷菌株的產(chǎn)淀粉酶能力。該方法不具破壞性，簡單易用，節(jié)省勞動量。</p><p>　　方法：將63株舟山沿海潮間帶分離純化出的放線菌點種于高氏一號培養(yǎng)基的平板上，28℃培養(yǎng)3 d，滴加盧氏碘液，觀察其透明圈的有無及大小。用游標卡尺測量淀粉透明圈和菌落的直徑[12]，以其比值做表。</p><

40、p>　　Yoo改良法測定酶活[13-14]</p><p>　　取5ml 0.5%的可溶性淀粉溶液，在30℃水浴中預熱10min，然后加適當稀釋的酶液0.5ml（對A7、A18、A27、A28、A30、A46發(fā)酵液進行5000R/min離心7min，取上清液稀釋3倍），反應5min后，用5mL0.1mol/L硫酸溶液終止反應。取0.5mL反應液與5ml工作碘液顯色，在分光光度計于620nm進行吸光度的測定，

41、以0.5mL水代替0.5mL反應液為空白，以不加酶液加相同的水的管為對照管。酶活力計算公式： 酶活力（u/mL）=(R0-R)/R0*50*D式中R0，R表示對照的吸光度值，D為酶稀釋的倍數(shù)酶活力單位定義：在30℃，5min內(nèi)水解1mg淀粉（0.5%淀粉）的酶量為一個單位。</p><p><b>　　菌株保藏</b></p><p>　　保藏可以接種到試

42、管斜面中，保存于4℃冰箱冷藏保種備用。此方法比較簡單，適于短期保藏，但是要經(jīng)常轉接種（通常一個月一次）,因此，比較容易造成菌株活性降低、菌株易受污染等；實驗室常用保種方法還有液體石蠟封存法，即在試管斜面中覆蓋一層無菌液體石蠟，此方法優(yōu)點在于可在室溫和4℃冰箱保存并且保存時間較長，缺點在于不能保存可以利用液體石蠟的一些菌種。</p><p>　　產(chǎn)淀粉酶放線菌的初步鑒定</p><p>&l

43、t;b>　　形態(tài)觀察</b></p><p>　　將實驗菌株用區(qū)域劃線法劃線在高氏一號海水固體培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)，3d后觀察菌落形態(tài)。</p><p>　　采用插片法對目標放線菌進行形態(tài)觀察：先在營養(yǎng)瓊脂平板上進行劃線，再將滅菌好的蓋玻片以一定的角度沿著接種線斜插入營養(yǎng)瓊脂中，注意不要插到培養(yǎng)皿底部，25℃培養(yǎng)，分別在3d、5d、7d、取出，于光學顯微鏡下進行觀察。&l

44、t;/p><p><b>　　生理生化特性</b></p><p>　　使用非發(fā)酵細菌生化鑒定管</p><p>　　乳糖膽鹽發(fā)酵試驗：將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量分別為 10mL 、1mL、0.1 mL稀釋液，接種量在lmL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，lmL，及l(fā)mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3 管，置25℃溫箱內(nèi)

45、，培養(yǎng)24 h，如乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則說明該樣品為非發(fā)酵菌種。</p><p>　　對于具有產(chǎn)淀粉酶能力的放線菌株進行乳糖發(fā)酵試驗，判定其是否為發(fā)酵菌種，若為非發(fā)酵細菌，則可以利用非發(fā)酵細菌生化鑒定管進行生理生化特征的鑒定。</p><p>　　對于菌株的生理生化特征鑒定通過使用杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)的非發(fā)酵細菌生化鑒定管[14]進行。</p><p>

46、　　圖1-1 試驗所用鑒定管</p><p>　　Fig1-1. Identification of pipe used in the experiment</p><p><b>　　結果分析</b></p><p><b>　　分離純化結果</b></p><p>　　舟山沿海地區(qū)潮間帶泥樣水樣

47、進行分離純化后，得到未知菌株63株。菌落于高氏一號培養(yǎng)基上生長，顏色較為單一，多數(shù)為乳白，白色，土黃色色澤。形成的菌落質(zhì)地致密，表面干燥、多皺、絨狀，形態(tài)不規(guī)則。</p><p><b>　　篩選結果</b></p><p><b>　　淀粉透明圈結果</b></p><p>　　對點種于高氏一號培養(yǎng)基上的放線菌培養(yǎng)3d后

48、，使用盧氏碘液進行染色，得到透明圈較好的菌株6株。分別為：A7、A18、A27、A28、A30、A46。如下圖：</p><p>　　圖2-2 透明圈形態(tài)</p><p>　　Fig. 2-2 Clear zone of starch morphology</p><p>　　菌株透明圈直徑與菌落直徑比值見表2-1：</p><p>　　表2

49、-1淀粉透明圈與菌落直徑比</p><p>　　Table 2-1 Comparison the diameter between clear zone and colony starch</p><p>　　Yoo改良法測定酶活結果</p><p>　　對透明圈較好的6株菌進行Yoo改良法測定酶活得到結果如下表2-2：</p><p>　　

50、表2-2 Yoo改良法測定酶活的結果</p><p>　　Table 2-2. The results of determination of enzyme activity by Yoo improved method</p><p>　　由表2-1得，菌落A7，A18，A27，A46數(shù)值較大，尤其是菌株A18和A27達到了5以上的比值。</p><p>　　由表

51、2-2得，菌株A7，A30，A46酶活較強，其中A30和A46達到了30 U/mL以上。</p><p>　　通過對兩表數(shù)值的比較，淀粉透明圈法測得的數(shù)據(jù)與Yoo改良法測得的酶活并不成正比，淀粉透明圈法可能表現(xiàn)的是菌株產(chǎn)酶量的大小，而不是菌株淀粉酶活力的大小。</p><p><b>　　形態(tài)觀察</b></p><p>　　海洋放線菌A46：

52、呈現(xiàn)銀灰色色澤，菌落質(zhì)地致密，干燥。培養(yǎng)一周后有金屬光澤，不產(chǎn)水溶性色素。</p><p>　　圖2-3海洋放線菌A46菌落形態(tài)</p><p>　　Fig. 2-3Marine actinomycetes A46’ colony morphology</p><p>　　菌株A46分別在培養(yǎng)3d、5d、7d、10d后將蓋玻片取出進行觀察，觀察結果如圖2-4所示&l

53、t;/p><p>　　圖2-4 A46在培養(yǎng)基中生長3、5、7天的顯微照（10×40）</p><p>　　Fig. 2-4 A46 growth of 3,5,7 days in medium micro photo</p><p>　　菌株A46在培養(yǎng)3d后可以觀察到長而彎曲的基內(nèi)菌絲及氣生菌絲，氣生菌絲帶有較多的長而彎曲的分叉。培養(yǎng)5d后，開始可以觀察到

54、孢子絲，同時菌絲開始斷裂。7d后菌絲斷裂加劇，菌絲末端可看見縱向的孢子鏈及游離的單個孢子。</p><p>　　海洋放線菌A30：呈現(xiàn)乳白色色澤。菌落結構呈粉狀，粘著力差，易挑取。中心有突起。</p><p>　　圖2-5海洋放線菌A30菌落形態(tài)</p><p>　　Fig. 2-5Marine actinomycetes A30’ colony morpholog

55、y</p><p>　　分別在培養(yǎng)3d、5d、7d、10d后將蓋玻片取出進行觀察，觀察結果如圖所示</p><p>　　圖2-6 A30在培養(yǎng)基中生長3、5、7天的顯微照（10×40）</p><p>　　Fig. 2-6 A30 growth of 3,5,7 days in medium micro photo</p><p>

56、　　培養(yǎng)3d后觀察到長而曲折的基內(nèi)菌絲，菌絲有分枝，且互相交錯。5d后菌絲數(shù)量明顯增多，菌絲彎曲加劇。7d后可看到茂密的氣生菌絲，菌絲逐漸斷裂。</p><p><b>　　生理生化特性</b></p><p>　　根據(jù)《細菌生化微量鑒定管及試紙試驗結果判定說明》，對菌株進行判定。</p><p>　　表2-3 生理生化實驗結果</p&g

57、t;<p>　　Table 2-3 The results of physiological and biochemical Experiment</p><p><b>　　本章小結</b></p><p>　　根據(jù)目的菌株的形態(tài)觀察及生理生化特性，通過查閱伯杰細菌鑒定手冊（第八版），初步鑒定為菌株A46可能為小單孢菌屬，菌株A30可能為諾卡氏菌屬。但

58、僅僅通過單純的形態(tài)觀察及生理生化法，并不足夠準確的對目的菌株進行鑒定，仍需要對目的菌株使用16SrDNA分子序列分析法等分子實驗方法，進行進一步的鑒定。</p><p><b>　　小結</b></p><p>　　舟山地處長江口南側，地理位置介于東經(jīng)121°30′～123°25′，北緯29°32′～31°04′之間，地理環(huán)境優(yōu)

59、越，生物資源豐富。特別是舟山海域潮間帶，所謂潮間帶，即是指大潮期的最高潮位和大潮期的最低潮位間的海岸，也就是海水漲至最高時所淹沒的地方開始至潮水退到最低時露出水面的范圍。由于潮間帶的特殊性質(zhì)使得潮間帶微生物環(huán)境中生長的放線菌就會具有非常獨特的生理生化性質(zhì)，可能在它們身上發(fā)現(xiàn)一些具有特殊作用的代謝產(chǎn)物。</p><p>　　本文對從舟山東極、海濱公園、鴨蛋山碼頭等地區(qū)潮間帶、灘涂，采集泥樣、水樣，首先使用高氏一號海

60、水培養(yǎng)基分離篩選出63株的未知放線菌菌株，再使用淀粉透明圈法初步篩選出具有產(chǎn)淀粉酶能力的放線菌株6株，經(jīng)Yoo改良法測定菌株的產(chǎn)淀粉酶活力之后，選取其中產(chǎn)淀粉酶能力較強的菌株A46，A30進行相關形態(tài)觀察，生理生化實驗，最后查閱伯杰細菌鑒定手冊（第八版），初步鑒定A46為小單孢菌屬放線菌，而A30為諾卡氏菌屬放線菌。僅僅通過單純的形態(tài)觀察及生理生化法，并不足夠準確的對目的菌株進行鑒定，仍需要對目的菌株使用16SrDNA分子序列分析法等分

61、子實驗方法，進行進一步的鑒定。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　張樹正.酶制劑工業(yè)(上下冊)[M].北京:輕工業(yè)出版社,1984</p><p>　　居乃琥.酶工程研究和酶工程產(chǎn)業(yè)的新進展[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2000,26(4):38-43</p><p>　　谷軍.α-淀粉酶的生產(chǎn)

62、與應用[J].生物技術,1994,4(3):1-5</p><p>　　周旭華,王勇,吳敏.舟山地區(qū)嗜鹽菌的分離和產(chǎn)胞外多糖菌株的篩選.浙江大學學報, 第34卷第3期</p><p>　　Davidson B S.New dimensions in natural products research: cultured marine microorganisms[J].Curr. Opin

63、. Biotechnol. 1995, 6, 284-291</p><p>　　Panlilio AL.Methicillin-resistant Staphyl-ococcus aureus in U.S.hospitals,1975～1991[J].Infect Control</p><p>　　Hosp Epidemiol,1992,13:582-586</p>&

64、lt;p>　　林永成,周世寧,等.海洋微生物及其代謝產(chǎn)物[M].北京:化學工業(yè)出版社,2003</p><p>　　馮國強,(2006年),不小心被海產(chǎn)刺傷 可感染海洋分枝桿菌,《都市日報》:健康情報專欄,2006年9月22日號,p.30</p><p>　　馮國強,(2007年),〈醫(yī)理:海洋分枝桿菌〉,《am730》:HEALTH版,2007年8月20日號,p.14</p&

65、gt;<p>　　姜怡,唐蜀昆,王永霞,等.海洋放線菌分離方法.《微生物學通報》2006年,第6期</p><p>　　徐穎,劉琦,王樂,等.一株耐高溫α2淀粉酶生產(chǎn)菌的分離鑒定及其產(chǎn)酶條件優(yōu)化.四川大學學報(自然科學版),2008</p><p>　　朱文優(yōu),王新惠. 產(chǎn)生淀粉酶真菌的分離篩選及初步鑒定. 釀酒科技2009年第2期（總第176期）,22</p>