橘皮中檸檬苦素的提取工藝研究【畢業(yè)論文】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　橘皮中檸檬苦素的提取工藝研究</p><p><b>　　專業(yè)：應用化學</b></p><p>　　摘 要：柑橘屬蕓香科植物，是天然檸檬苦素類似物的主

2、要來源之一。本文旨在研究柑橘皮中提取檸檬苦素的工藝。通過單因素實驗對對橘皮中檸檬苦素的提取工藝進行優(yōu)化。結果表明：最佳提取工藝參數為用丙酮作為浸提法的提取試劑，選擇液料比為40:1，在恒溫50℃下，提取20h。</p><p>　　關鍵詞：橘皮；檸檬苦素；提??；工藝；單因素</p><p>　　Optimization of the technology for extracting li

3、monin from citrus peels</p><p>　　Abstract：Rutaceae citrus is one of the main sources of the natural limonoids. This paper illustrates the extraction condition of limonin which come from citrus peels. With Lh

4、e method of single factor experiment, the optimum extraction conditions of limonin were determined. Results show that the optimum extraction conditions of limonin are obtained sa follows: acetone as extraction solvent at

5、 50℃ for 20h, the ratio of meterial to solvent is 40:1(W/V).</p><p>　　Key words：orange peel; limonin; extraction; technology; single factor </p><p><b>　　目 錄 </b></p><p&g

6、t;<b>　　1引言1</b></p><p>　　1.1檸檬苦素的概述1</p><p>　　1.2檸檬苦素的應用1</p><p>　　1.2.1在農業(yè)中的應用1</p><p>　　1.2.2在醫(yī)藥中的應用1</p><p>　　1.2.3食品及功能性食品添加劑中的應用2<

7、;/p><p>　　1.3檸檬苦素的提取方法2</p><p>　　1.3.1有機溶劑浸提法2</p><p>　　1.3.2系統(tǒng)溶劑提取2</p><p>　　1.3.3超聲提取法2</p><p>　　1.3.4超臨界提取法2</p><p>　　1.4選題目的及意義3</p&

8、gt;<p><b>　　2實驗部分3</b></p><p>　　2.1儀器與試劑3</p><p>　　2.2檸檬苦素標準品的處理4</p><p>　　2.3檸檬苦素樣品的處理4</p><p>　　2.3.1提取溶劑的選擇4</p><p>　　2.3.2提取時間的

9、選擇4</p><p>　　2.3.3提取溫度的選擇4</p><p>　　2.3.4液料比的選擇4</p><p><b>　　3結果與分析5</b></p><p>　　3.1檸檬苦素標準曲線的繪制5</p><p>　　3.2檸檬苦素樣品的單因素試驗結果5</p>

10、<p>　　3.2.1溶劑對提取的影響5</p><p>　　3.2.2時間對提取的影響7</p><p>　　3.2.3溫度對提取的影響9</p><p>　　3.2.4液料比對提取的影響11</p><p><b>　　4結論13</b></p><p><b>

11、　　參考文獻13</b></p><p><b>　　致謝13</b></p><p><b>　　1引言</b></p><p>　　1.1檸檬苦素的概述 </p><p>　　檸檬苦素類似物是一類高度氧化的四環(huán)三菇類化合物，主要分布于柑橘屬和株科屬植物中。檸檬苦素類化合物是柑橘屬

12、植物的次生代謝產物，它不同于初級代謝產，在柑桔類植物生長過程中，并不直接發(fā)生作用。檸檬苦素及其類似物在抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗炎、改善睡眠、抗病毒、抗菌、抗焦慮，調節(jié)體內膽固醇含量、防止動脈粥樣硬化和除蟲等方面都具有顯著的效果，越來越受到人們的關注，因此，在功能食品、保健品以及植物天然活性物質的開發(fā)方面都具有廣闊的發(fā)展前景[1]。</p><p>　　我國對類檸檬苦素的研究還正處于初級階段，尤其對其生理性功能的研究尚未見

13、報道，而對檸檬苦素的提取優(yōu)化方案的報道則更少[2]。近年來對檸檬苦素生理性功能的研究以及水溶性檸檬苦素(檸檬苦素葡萄糖糖苷)的發(fā)現(xiàn)，進一步的引起了研究者的興趣，而檸檬苦素在商業(yè)上的需求也明顯增加了。就檸檬苦素在食品及食品添加劑中的應用方面來說，由于化學防腐劑的安全性已引起人們的質疑，越來越多的科技工作者將注意力轉向了天然食品防腐劑的開發(fā)。檸檬苦素易于溶酯性有機溶劑，難溶于水，在甲醇、乙醇中溶解度較大[3]。檸檬苦素的分子式為C26H30

14、O8，分子量為470，分子結構如圖1-1，</p><p><b>　　圖1-1 </b></p><p>　　1.2檸檬苦素的應用</p><p>　　1.2.1在農業(yè)中的應用</p><p>　　檸檬苦素在抑菌和殺蟲方面有理想的效果?？蛇x用檸檬苦素類似物配制成一定濃度的殺蟲劑，它是一種天然的、對人、畜無毒無害，殺蟲效

15、果好的理想生物性農藥。這樣既減少了對環(huán)境的污染，符合可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略，又減少了有毒殺蟲劑進入人和動物體內的機會，為人類的健康帶來福音。因此，在生物農藥的研究與應用上，檸檬苦素類似物具有良好的前景。</p><p>　　1.2.2在醫(yī)藥中的應用</p><p>　　將類檸檬苦素對豚鼠進行動物試驗，結果顯示具有明顯的抗癌作用[4-5]，其防癌抑癌作用主要體現(xiàn)：(1)誘發(fā)谷胱甘肽轉移酶 (GST

16、)活性。GST是人體中的解毒酶，可催化谷胱苷酞與致癌物質結合，從而使致癌物易于從體內排出。(2)直接抑制癌細胞的生長。實驗結果顯示類檸檬苦素對人的乳腺癌細胞(MCF-7)的生長有較強的抑制作用。(3)抑制和去除致癌因子。據文獻[6]報導至少已確定的有約1700種化學物質具有致癌作用，而檸檬苦素可以顯著的抑制某些致癌因子，如抑制苯并芘（benzopyrene）誘導實驗動物的腫瘤生長，對結腸癌和乳腺癌的抑制作用強于抗癌藥物他莫昔芬 (tam

17、oxifen)。鑒于類檸檬苦素防癌抑癌的作用，積極地使其轉化為醫(yī)藥產品，具有很好的開發(fā)前景。</p><p>　　1.2.3食品及功能性食品添加劑中的應用</p><p>　　食品的色香味及保存性是衡量食品質量的主要指標之一，現(xiàn)代食品加工過程中，為了使產品保持加工前的天然特色并保證所有批次產品的均勻性，通常都會使用各種天然的或合成的食品添加劑。隨著科學技術的發(fā)展，合成食品添加劑的危害性越來

18、越受到重視，而天然的食品添加劑以其自然、安全、無毒副作用、較高的營養(yǎng)價值或藥理價值等優(yōu)點倍受人們的青睞，適用于糕點糖果、飲料、乳品、酒類以及保健食品類等各種食品中[7]。</p><p>　　1.3檸檬苦素的提取方法 </p><p>　　1.3.1有機溶劑浸提法 </p><p>　　由于檸檬苦素類似物來源廣泛，而且分布于植物的不同組織中，在柑橘果實中主要存在于果

19、核和果皮中，所以其提取方法各異。浸提法是利用檸檬苦素類化合物與混入的雜質極性不同，選用不同溶劑萃取，可達到分離的目的[8-9]。此法一般主要包括兩個步驟：第一步是脫脂。干燥并粉碎果皮，使用石油醚、乙醚或正己烷進行脫脂，常用石油醚(60～90℃)脫脂6-24h或在室溫下處理足夠時間，也可根據具體的條件選擇多種復合脫脂溶劑，從而提高脫脂效果。第二步是浸提或萃取，常用的提取劑有：三氯甲烷、二氯甲烷、乙醇、甲醇、丙酮等進行浸提取4-12h，將所

20、得提取液過濾并濃縮得到檸檬苦素類似物粗產品[10]。</p><p>　　1.3.2系統(tǒng)溶劑提取 </p><p>　　用極性由小到大的溶劑依次進行提取，可以提取出大部分檸檬苦素類化合物[11]。例如先用石油醚或環(huán)己烷脫脂，再用二氯甲烷提取檸檬苦素類物質苷元，然后由極性強的甲醇提取檸檬苦素糖苷類。常用的萃取系統(tǒng)有：乙烷-二氯甲烷-甲醇；石油醚-三氯甲烷-甲醇；正己烷-乙醚；己烷-二氯甲烷-

21、甲醇；己烷-乙酸乙酷-丁醇等。但此方法目前僅限用于實驗室，很難實現(xiàn)工業(yè)化。</p><p>　　1.3.3超聲提取法 </p><p>　　超聲提取法是近年來應用到天然的產物提取分離中的一種提取方法，其原理是利用超聲空化等性質增大物質分子運動的頻率和速度，增加溶劑的穿透力，提高成分溶出速度和溶出次數，從而縮短提取時間的浸提方法[12]。與傳統(tǒng)的提取法相比，具有提取時間短（一般不超過30mi

22、n），提出率高(增大2-3倍)，低溫提取環(huán)境有利于保護有效成分等優(yōu)點。經研究采用超聲波提取法在室溫（25℃）下對材料提取30min，實驗發(fā)現(xiàn)此法和水浴加熱提?。ㄔ?0℃水浴回流提取60min）相比對檸檬苦素提取效率差別并不是很明顯，但提取時間和提取溫度占有較大優(yōu)勢。</p><p>　　1.3.4超臨界提取法 </p><p>　　該技術是80年代引入中國的一項新型提取技術。其原理是以一種

23、超臨界流體在高于臨界溫度和壓力的環(huán)境下，從目標物中萃取有效成分，當恢復至常溫常壓時，溶解在流體中的成分立刻以溶于吸收液的液體狀態(tài)與氣態(tài)流體分開。萃取的過程一般分為流體壓縮-萃取-減壓-分離四個階段。與傳統(tǒng)提取工藝比較，超臨界流體萃取法具有提取效率高，無溶劑殘留，活性成分和不穩(wěn)定成分不易分解破壞而保持其天然性等優(yōu)點，同時還可以通過控制臨界溫度和壓力的變化達到選擇性提取和分離純化的目的。但超臨界流體需要在較高的壓力下操作，設備的費用比較昂貴

24、，操作也比較困難，因此難以用于較大規(guī)模的生產，還尚未進行工業(yè)化大規(guī)模生產。目前，超臨界萃取檸檬苦素類化合物還處于研究階段，不同物料在萃取溫度、萃取壓力、萃取時間和夾帶劑的選擇上也各有不同，需要大量的試驗。</p><p>　　1.4選題目的及意義 </p><p>　　柑橘屬蕓香科植物，是天然檸檬苦素類似物的主要來源之一，但在國內有關于檸檬苦素的生物學活性以及療效的研究還處于初級階段，同時

25、也缺乏高效、完善的天然檸檬苦素類似物的提取、鑒定和檢測技術體系。柑橘是世界的第一大水果，世界年產量達8000多萬噸，我國的柑橘種植面積有128萬公頃，居世界的首位，年產量800多萬噸，皮渣250多萬噸。傳統(tǒng)的處理方法是將其進行填埋或加工成飼料，從環(huán)境和經濟角度分析，都不是科學合理的解決途徑。對柑橘皮渣功能性成分的利用，不僅能減少寶貴資源的浪費，保護生態(tài)環(huán)境，也帶動整個柑橘業(yè)的健康發(fā)展[13]?？梢?，如何有效的利用柑橘皮渣提取檸檬苦素類似

26、物具有重要的意義。</p><p>　　柑橘果皮中所含的香精油，檸檬苦素類化合物，黃酮類化合物，類胡蘿卜素，膳食纖維，果膠等在食品，醫(yī)藥等方面具有廣泛的用途。提取、分離植物活性成分時，一般根據“相似相溶”原理，用不同的溶劑提取分離，將主要的有效成分提取出來，然后用傳統(tǒng)的化學分析方法、現(xiàn)代儀器分析方法對植物提取物定性鑒定和定量分析。</p><p>　　本文旨在研究柑橘皮中提取檸檬苦素的工藝

27、，通過不同的提取工藝，比較檸檬苦素成分的含量，從而確定最佳脫脂工藝和提取工藝，為提高柑橘果皮的綜合利用率以及進一步開發(fā)利用檸檬苦素提供一定的理論依據。因此，將從以下幾個方面展開實驗:</p><p>　?。?）實驗中所采用的提取方法均采用浸提法。</p><p>　?。?）用高效液相色譜分析的方法[14-15]檢測檸檬苦素的含量。</p><p>　?。?）在對橘皮

28、進行提取檸檬苦素之前，先對橘皮粉進行脫脂處理。</p><p>　?。?）考察從柑橘皮中提取檸檬苦素的最佳提取方案。通過上述脫脂處理之后，再從影響提取的工藝條件出發(fā)，例如，提取溶劑，提取時間，提取溫度，溶劑液料比等對提取工藝的影響，對提取條件進行探索。</p><p><b>　　2實驗部分 </b></p><p><b>　　2.

29、1儀器與試劑</b></p><p>　　儀器：電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）、循環(huán)水真空泵（予華牌SH2-D3型）、鼓風干燥箱（上海圣科儀器設備有限公司）、旋轉蒸發(fā)儀(RE301(3L)河南一恒儀器有限公司)、生化培養(yǎng)箱（SHP-250鄭州南北儀器設備有限公司）、高效液相色譜儀(島津LC-20AT型)。</p><p>　　試劑：本實驗所用試劑均為分析純試劑<

30、/p><p>　　橘皮粉 Y20010083 毫州市藥材總公司中藥公司</p><p>　　石油醚（60-90℃） GB/T15894-1995 北京長?；S</p><p>　　丙酮 GB/T686-2008

31、 衢州巨化試劑有限公司</p><p>　　乙醇 GB/T678-2002 杭州長征化學試劑有限公司</p><p>　　甲醇 GB/T683-2006 上海振興化工一廠</p><p>　　二氯甲烷

32、 GB/T16983-1997 浙江杭州雙林化工試劑廠</p><p>　　三氯甲烷 GB/T682-2002 杭州煉油廠</p><p>　　氫氧化鈉 GB/ T11199-89 上海九鵬化工有限公司</p><

33、p>　　濃鹽酸 GB/T622-89 廣州飛獅化工有限公司</p><p>　　2.2檸檬苦素標準品的處理 </p><p>　　準確稱取檸檬苦素標準品2.5mg，用1mL乙腈溶解，置于50mL容量瓶中，用乙腈定容，得到檸檬苦素標樣儲備液。必要時可以在超聲振蕩器中處理，以確保檸檬苦素完全溶解。分別取適量該標準儲備液，

34、用乙腈稀釋，得到質量濃度為630mg/L、128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L的系列標準溶液。 </p><p>　　2.3檸檬苦素樣品的處理 </p><p>　　利用檸檬苦素類化合物與混入的雜質極性不同，選用不同溶劑萃取，可達到分離的目的。在進行提取之前，先將橘皮粉進行脫脂處理。先將10g橘皮粉放入燒杯中，以100mL石油醚（60-90℃）為脫脂溶劑在P

35、h值顯示中性，溫度為20℃下脫脂10h，取出脫脂后的粉末烘干備用。</p><p>　　2.3.1提取溶劑的選擇 </p><p>　　精確稱取干燥至恒重的橘皮粉3g 5份，分別以甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿為提取溶劑，選擇浸提法在相同條件下(液料比為20:1，提取時間為15h，提取溫度為40℃)，對脫脂后原料采用浸提法提取。以檸檬苦素得率為考察指標，并考慮成本、生產操作的方便性和安全

36、性，選擇最佳提取溶劑。</p><p>　　2.3.2提取時間的選擇 </p><p>　　精確稱取干燥至恒重的橘皮粉3g 6份，經脫脂后，選用篩選的最佳提取溶劑，在提取溫度為40℃條件下，液料比為20:1(mL/g)，分別提取5h、10h、15h、20h、25h、30h，測定最終提取液中檸檬苦素含量，選擇最佳提取時間。</p><p>　　2.3.3提取溫度的選擇

37、 </p><p>　　精確稱取干燥至恒重的橘皮粉3g5份，經脫脂后，選用篩選的最佳提取溶劑和提取時間，在液料比為20:l(mL/g)，提取溫度分別為30℃、40℃、50℃、60℃、70℃下提取。測定最終提取液中檸檬苦素含量，選擇最佳提取溫度。</p><p>　　2.3.4液料比的選擇 </p><p>　　精確稱取干燥至恒重的橘皮粉3g 5份，經脫脂后，選用上述

38、篩選的最佳參數，在液料比分別為10:l、20:l、30:1、40:l、50:l (mL/g)下提取。測定最終提取液中檸檬苦素含量，選擇最佳液料比。</p><p><b>　　3結果與分析 </b></p><p>　　3.1檸檬苦素標準曲線的繪制 </p><p>　　利用高效液相色譜分析的方法對檸檬苦素的含量進行檢測。選擇乙腈作為流動相，流

39、速1mL/min，柱溫為常溫，檢測波長為210nm。分別對濃度為630mg/L、128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L的檸檬苦素標準品進樣10μL，記錄出峰時間和出峰面積，并繪制檸檬苦素的標準曲線。測量數據見下表3-1：</p><p>　　表3-1 檸檬苦素標準品</p><p>　　根據以上檸檬苦素標準品的實驗數據繪制檸檬苦素標準曲線，見下圖3-1：<

40、;/p><p>　　圖3-1 檸檬苦素標準曲線</p><p>　　3.2檸檬苦素樣品的單因素試驗結果 </p><p>　　3.2.1溶劑對提取的影響 </p><p>　　根據檸檬苦素易溶于有機溶劑的溶解性能，按照相似相溶的原理，本實驗選用了甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿為提取溶劑在相同的條件下提取檸檬苦素，比較不同的溶劑的提取效果，從而選

41、擇最佳提取溶劑。實驗結果見下圖3-2：</p><p>　　圖3-2 提取溶劑與檸檬苦素得率的柱狀圖</p><p>　　實驗結果表明，丙酮對檸檬苦素的提取效果最好，得率為17.68mg/g，其中乙醇的提取效果最差，得率只有14.50mg/g，因此本次實驗選用丙酮作為浸提法的提取溶劑。實驗峰圖見組圖3-3：</p><p>　　圖3-3-1 丙酮提取實驗峰圖<

42、/p><p>　　圖3-3-2 乙醇提取實驗峰圖</p><p>　　圖3-3-3 甲醇提取實驗峰圖</p><p>　　圖3-3-4 二氯甲烷提取實驗峰圖</p><p>　　圖3-3-5 氯仿提取實驗峰圖</p><p>　　3.2.2時間對提取的影響 </p><p>　　通常情況下提取效果會

43、隨著提取時間的延長而提高，實驗結果見下圖3-4：</p><p>　　圖3-4 提取時間與檸檬苦素得率的曲線圖</p><p>　　由圖可知，隨著時間的延長檸檬苦素的得率有所增加，在提取時間為20h時，提取效果達到最佳，檸檬苦素得率為20.24mg/g，超過20h后，檸檬苦素得率有所降低，原因可能是因為提取的時間過長，導致部分檸檬苦素被破壞。因此本次實驗的提取時間選擇20h。實驗峰圖見組圖

44、3-5：</p><p>　　圖3-5-1 提取時間為5h的實驗峰圖</p><p>　　圖3-5-2 提取時間為10h的實驗峰圖</p><p>　　圖3-5-3 提取時間為15h的實驗峰圖</p><p>　　圖3-5-4 提取時間為20h的實驗峰圖</p><p>　　圖3-5-5 提取時間為25h的實驗峰圖&l

45、t;/p><p>　　圖3-5-6 提取時間為30h的實驗峰圖</p><p>　　3.2.3溫度對提取的影響 </p><p>　　提取溫度是提取過程中一個重要的因素。滲透、溶解和擴散能力都會隨著溫度的升高而增大。因此，提取過程中加熱能加強分子的運動，又能軟化組織，提高溶解度，加速擴散，從而提高提取率。實驗結果見下圖3-6：</p><p>　

46、　圖3-6 提取溫度與檸檬苦素得率的曲線圖</p><p>　　從上述實驗結果可知，隨著溫度的升高檸檬苦素的得率也有所提高，在溫度為50℃時檸檬苦素的得率達到最高，得率為19.00mg/g。溫度超過50℃后，檸檬苦素的得率反而下降，這是因為溫度過高，可能會破壞檸檬苦素，同時加速提取劑的揮發(fā)，降低液料比，從而影響提取效果。所以本次實驗選用50℃為提取溫度。實驗峰圖見組圖3-7：</p><p&g

47、t;　　圖3-7-1 溫度為30℃的實驗峰圖</p><p>　　圖3-7-2 溫度為40℃的實驗峰圖</p><p>　　圖3-7-3 溫度為50℃的實驗峰圖</p><p>　　圖3-7-4 溫度為60℃的實驗峰圖</p><p>　　圖3-7-5 溫度為70℃的實驗峰圖</p><p>　　3.2.4液料比對提取

48、的影響 </p><p>　　一般來說液料比越大，目標物質的提取也越徹底，提取效果也會越好。但溶液用量太大必然會造成濃縮工藝的延長，使得整體工作效率下降，工作成本上升，因此液料比要選擇適當。實驗結果見圖3-8：</p><p>　　圖3-8 液料比與檸檬苦素得率的曲線圖</p><p>　　根據上述實驗結果可知，液料比為40:1時提取效果最好，檸檬苦素的得率為20.

49、93mg/g，當液料比多于40:1時檸檬苦素的得率沒有提高反而有所下降。因此本次實驗選擇最佳的液料比為40:1。液料比為40:1時的實驗峰圖見組圖3-9：</p><p>　　圖3-9-1 液料比為10:1的實驗峰圖</p><p>　　圖3-9-2 液料比為20:1的實驗峰圖</p><p>　　圖3-9-3 液料比為30:1的實驗峰圖</p>&l

50、t;p>　　圖3-9-4 液料比為40:1的實驗峰圖</p><p>　　圖3-9-5 液料比為50:1的實驗峰圖</p><p><b>　　4結論 </b></p><p>　　本實驗中檢測部分是用高效液相色譜法（HPLC），對檸檬苦素的含量進行檢測的，與其他檢測方法比較，HPLC法具有檢測速度快、操作簡單、準確度高等優(yōu)點，因而日益受

51、到研究學者的青睞。通過本次實驗，探索出了提取橘皮中檸檬苦素的最佳工藝條件，用丙酮作為浸提法的提取試劑，選擇液料比為40:1，在恒溫50℃下，提取20h。</p><p>　　盡管檸檬苦素所具有的各種生物活性已經闡明，而且其功效明顯，但目前仍停留在小試研究階段，實際的應用還處于初級階段，并沒有進行產業(yè)化、規(guī)模化的進行生產，無法取得較好的經濟效益和使用價值，因此進行商品性的生產是檸檬苦素將來發(fā)展的途徑。展望未來，應加

52、強檸檬苦素在生物、醫(yī)藥、食品及畜牧等產業(yè)中的應用，發(fā)揮出其潛在的價值，對造福社會，保障人類健康具有十分重要的意義。</p><p><b>　　參考文獻： </b></p><p>　　[1]喬海鷗,丁曉雯,張慶祝.柑橘皮的綜合利用[J].浙江農業(yè)科學,2003,3:147-149.</p><p>　　[2]蘇東林,單楊.柑橘果皮中功能性成分

53、的作用概述[J].現(xiàn)代食品科技,2006,22(2):260-262.</p><p>　　[3]孫崇德,陳昆松,陳青俊,等.柑桔果實中天然檸檬苦素和諾米林的提取鑒別和檢測[J].中國食品學報,2004,4(1):6-11.</p><p>　　[4]徐貴華,胡玉霞,葉興乾,等.椪柑、溫州蜜桔果皮中酚類物質組成及抗氧化能力研究[J].食品科學,2007,28(11):171-174.<

54、;/p><p>　　[5]張虹,張艷萍.檸檬苦素類似物的研究進展[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2001,28:80-83.</p><p>　　[6]唐傳核,彭志英.柑橘類的功能性成分研究概況[J].四川食品與發(fā)酵,2000,4(1):1-6.</p><p>　　[7]李永紅,張毅,肖為民,等.比色法測印楝種仁提取物中檸檬苦素類物質的含量[J].西南農業(yè)大學學報,2003,

55、25(2):150-152.</p><p>　　[8]李福興,王建江.檸檬苦素類化合物研究現(xiàn)狀[J].國外醫(yī)學:中醫(yī)中藥分冊,2000,22(3):131-147.</p><p>　　[9]曾凡坤,鄒連生,焦必林，等.柑橘中類檸檬苦素的含量及分布研究[J].中國食品學報,2003,3(4):</p><p><b>　　79-81.</b>

56、</p><p>　　[10]田慶國,丁霄霖.甜橙種子中檸檬苦素類化合物的提取[J].林產化學與工業(yè),1999,19(3):71-74.</p><p>　　[11]吳桂蘋,蘇學素,焦必寧.柑橘活性成分檢測技術研究進展[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2006(9):116.</p><p>　　[12]LAM L Y,HASEG K T,LAWA S.Effect of c

57、itrus limonoids on glutathione transferase activity in mice[J].J Agric Food Chem,1989,37:878-880.</p><p>　　[13]Analysis of Limonoid Glucosides from Citrus by Electros pray Ionization Liquid Chromatography Ma

58、ss Spectrometry[J].Agric.Food Chem.2001,49,1102-1108.</p><p>　　[14]陳靜,高彥祥,吳偉莉,等.高效液相色法測定柑桔汁中檸檬苦素和柚皮苷[J].色譜,2005,24(2):</p><p><b>　　157-160.</b></p><p>　　[15]劉亮,戚向陽,董蓄燕,等