云南羊肚菌生長(zhǎng)土壤真菌群落結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、羊肚菌（Morehella esculenta）是一種著名的食藥用真菌，具有廣闊的開發(fā)利用前景，但至今羊肚菌的完全人工栽培還沒有很大的突破。近年來已有不少半人工栽培成功的案例，成功的羊肚菌半人工栽培常常要求覆蓋有羊肚菌發(fā)生過的土壤，這可能是由于覆土中存在刺激其結(jié)實(shí)的有益微生物，因此找到有助于其結(jié)實(shí)的關(guān)鍵微生物種類，盡可能模仿其野生環(huán)境，這或許是羊肚菌栽培成功的捷徑之一。
　　 本文對(duì)羊肚菌子實(shí)體進(jìn)行了組織分離，期望可以分離到與羊

2、肚菌緊密結(jié)合的其他種真菌，考察這些真菌與子實(shí)體形成生長(zhǎng)之間的關(guān)聯(lián)。另對(duì)六份羊肚菌栽培土樣，建立真菌28S rDNA文庫，利用現(xiàn)代分子生態(tài)學(xué)的方法快速準(zhǔn)確地對(duì)土樣中的真菌群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)分析各真菌類群，以期找出與羊肚菌生長(zhǎng)密切相關(guān)的優(yōu)勢(shì)種群。再與羊肚菌組織分離所得的真菌比較，尋求兩者間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，找到兩者間的異同，從而為今后實(shí)現(xiàn)羊肚菌人工栽培提供一定的參考依據(jù)，主要研究成果如下：
　　 1.對(duì)4個(gè)羊肚菌子實(shí)體進(jìn)行了組織分離，

3、得到39株菌株。對(duì)39株菌株的ITS區(qū)域進(jìn)行測(cè)序和分析比較，結(jié)果顯示供試的39個(gè)菌株中33株ITS區(qū)域長(zhǎng)度為738bp，經(jīng)過BLAST比對(duì)后均為羊肚菌菌株；另外的6個(gè)菌株編號(hào)分別為3、5、6、23、24、37，其中3號(hào)菌株比對(duì)結(jié)果為Talaromyces trachyspermus，相似度達(dá)100％，5、23、37三個(gè)菌株比對(duì)結(jié)果均為Botryotinia fuckeliana，剩下的6、24號(hào)菌株，比對(duì)結(jié)果分別為Cordyceps s

4、inensis、Mortierella alpina，相似度都達(dá)到99％以上。
　　 2.在云南維西縣以及迪慶州霞若鄉(xiāng)羊肚菌半人工栽培基地采集相應(yīng)土樣，提取土樣總DNA，PCR擴(kuò)增28S rDNA片段，再用PCR產(chǎn)物直接克隆建庫，通過大規(guī)模的測(cè)序比對(duì)，了解各土樣間真菌群落的差異。其中的WX-1、XR-1、XR-2、XR-3四個(gè)土樣，克隆子數(shù)目大于5的菌株中，比對(duì)后為子囊菌亞門盤菌綱，糞殼菌綱，錘舌菌綱真菌；還有部分為壺菌門真菌；

5、擔(dān)子菌、接合菌真菌。WX-1、XR-3土樣的多樣性指數(shù)接近，XR-1、XR-2兩土樣的多樣性指數(shù)接近；但是四個(gè)文庫之間數(shù)據(jù)相互比較，差別也不大。土樣XR-4、XR-5比較發(fā)現(xiàn)羊肚菌出菇土壤附近和不出菇土壤，雖相距僅10m左右，但是真菌群落豐度和種類存在明顯差異；連續(xù)兩年對(duì)同一羊肚菌栽培基地采樣，即文庫C和F，比較發(fā)現(xiàn)，文庫C的真菌群落多樣性明顯高于F，而且兩者豐度高的真菌類群存在明顯差異。其中文庫中Morchella conica的豐度

6、越高，所對(duì)應(yīng)土樣采集地的羊肚菌產(chǎn)量也高。
　　 3.羊肚菌子實(shí)體組織分離得到的6號(hào)菌株，在土樣XR-3中豐度為1.69％；分離到的24號(hào)菌株在土樣WX-1中豐度為4.88％；5、23、37比對(duì)后均在土樣WX-1中豐度為2.44％，在土樣XR-2中豐度為1.68％。這3個(gè)菌株在子實(shí)體中可以分離到，同時(shí)在土樣中也有相應(yīng)的克隆子出現(xiàn)，但是并不能形成良好的對(duì)應(yīng)關(guān)系，即來源于某子實(shí)體的真菌，并不一定會(huì)出現(xiàn)在與子實(shí)體對(duì)應(yīng)的土樣所建的文庫中。