DgDREB1A基因分離及對切花菊的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、切花菊Cut Chrysanthemum(Dendranthema grandiflorum(Ramat.)Kitam)是世界4大切花之一,具有色彩豐富、花型多樣、瓶插壽命長等優(yōu)點(diǎn),是國際商品花卉總產(chǎn)值最高的花卉種類。在切花菊的栽培生產(chǎn)中,水資源的缺乏和冬季生產(chǎn)能耗成本高等因素嚴(yán)重影響著切花菊的周年生產(chǎn)規(guī)模與供應(yīng)范圍。為解決菊花冬季生產(chǎn)的能耗問題,采用現(xiàn)代分子生物學(xué)手段培育耐低溫菊花新品種,完善菊花周年生產(chǎn)和穩(wěn)定的供應(yīng)技術(shù)體系意義重大。

2、
　　 采用PCR的方法,從菊花中克隆到了DgDREB1A基因,利用DNAMAN進(jìn)行序列比對,所獲序列與已知報道序列同源性達(dá)到98％,利用酶切、連接的方法,構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體pBIG-DREB1A并通過凍融的方法轉(zhuǎn)入了農(nóng)桿菌LBA4404和EHA105中。
　　 以切花菊'神馬'為試材,建立了無菌培養(yǎng)系,以無菌苗幼嫩葉片為外植體,優(yōu)化了不定芽再生體系,葉片外植體在含有0.25mg/L2,4-D、1mg/LBA的MS培養(yǎng)

3、基中誘導(dǎo)培養(yǎng)15d后,轉(zhuǎn)入含有0.25mg/LNAA、1mg/LBA的分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)3周,再生率達(dá)到100％。
　　 在建立了切花菊高效再生體系的基礎(chǔ)上,優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化體系,并獲得了轉(zhuǎn)基因陽性植株,菊花葉片外植體預(yù)培養(yǎng)2d,用搖至OD600=0.5-0.7的農(nóng)桿菌稀釋10倍之后侵染10min.,黑暗條件下共培養(yǎng)2d,在5mg/L的kan.下連續(xù)篩選8周以上,將期間產(chǎn)生的抗性芽切下接種在含有7.5mg/L的生根培養(yǎng)中進(jìn)行二次篩選