規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病疫苗凈化措施研究學(xué)位論文

1、<p>　　四川農(nóng)業(yè)大學(xué)專業(yè)學(xué)位研究生</p><p><b>　　學(xué)位論文</b></p><p>　　論文題目：規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病疫苗凈化措施研究 </p><p>　　學(xué) 號(hào)： z2012004 </p><p>　　研究生 ：劉勁松

2、 </p><p>　　專業(yè)學(xué)位（類別）：獸醫(yī)碩士 </p><p>　　研究方向（領(lǐng)域）：預(yù)防獸醫(yī)學(xué) </p><p>　　所在學(xué)院：動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 </p>

3、<p>　　校內(nèi)導(dǎo)師：顏其貴 教授 </p><p>　　校外導(dǎo)師：張紹元 高級(jí)獸醫(yī)師 </p><p>　　提交時(shí)間： 2015-10-25 </p><p>　　四川農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生處制</p>

4、<p><b>　　論文獨(dú)創(chuàng)性聲明</b></p><p>　　本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示

5、了謝意。</p><p>　　研究生簽名： 2015年 月 日</p><p>　　關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明</p><p>　　本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存

6、、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。</p><p>　　研究生簽名： 2015年 月 日</p><p>　　導(dǎo)師簽名: 年 月 日</p><p&

7、gt;<b>　　摘 要</b></p><p>　　豬偽狂犬病是偽狂犬病毒（PRV）侵入機(jī)體后，導(dǎo)致豬群發(fā)熱、神經(jīng)癥狀及繁殖障礙一種烈性傳染病。該病是我國(guó)二類烈性傳染病，是造成養(yǎng)豬行業(yè)產(chǎn)生重大經(jīng)濟(jì)損失的疫病之一。2012年前后在我國(guó)北方與南方部分省份流行，就給養(yǎng)豬業(yè)造成很大的損失。</p><p>　　本研究使用PRVgE抗體檢測(cè)試劑盒篩查4個(gè)候選種豬場(chǎng)豬群的PRV

8、gE抗體水平，獲得PRVgE抗體陽(yáng)性率較低(≤10%)的陽(yáng)性豬場(chǎng)，作為PRV凈化豬場(chǎng)進(jìn)行試驗(yàn)。4個(gè)種豬場(chǎng)的所有種豬進(jìn)行Bartha-K61株基因缺失苗免疫4周后，分批次對(duì)全部種豬(含后備種豬)、部分仔豬進(jìn)行偽狂犬PRVgE抗體、PRVgB抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，淘汰PRVgE抗體陽(yáng)性豬，補(bǔ)免PRVgB抗體陰性豬只；間隔4周后同法監(jiān)測(cè)，淘汰PRVgB抗體仍為陰性豬；通過重復(fù)檢測(cè)與淘汰，保留PRVgE抗體陰性與PRVgB抗體陽(yáng)性種豬，建立無(wú)PRV野毒

9、感染的穩(wěn)定健康豬群。通過采取綜合防控措施，如完善生物安全措施、強(qiáng)化生產(chǎn)管理、落實(shí)消毒制度、嚴(yán)格執(zhí)行疫苗免疫程序等凈化措施的實(shí)施，供試4個(gè)種豬場(chǎng)偽狂犬病凈化后，胎均產(chǎn)活仔數(shù)增加0.68頭，平均初生重增加0.11kg，胎均斷奶健仔數(shù)增加0.71頭，斷奶成活率提高0.7%。</p><p>　　抽樣監(jiān)測(cè)這4個(gè)穩(wěn)定健康豬群/種豬場(chǎng)，兩年內(nèi)核心一場(chǎng)、擴(kuò)繁一場(chǎng)、擴(kuò)繁二場(chǎng)和擴(kuò)繁三場(chǎng)所有種豬的PRVgE野毒抗體陽(yáng)性率從試驗(yàn)前的3

10、.3%、4.8%、3.6%和4.4%均降為0，成為穩(wěn)定的PRVgE野毒抗體陰性豬場(chǎng)，表明4個(gè)種豬場(chǎng)的豬偽犬病均凈化成功。</p><p>　　本研究表明，對(duì)于豬偽狂犬PRVgE抗體低陽(yáng)性率(≤10%)的豬場(chǎng)，實(shí)施凈化是可行的。該凈化措施的實(shí)施不但能提升豬場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)，而且能明顯提升豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益，為4個(gè)供試豬場(chǎng)節(jié)省預(yù)防治療費(fèi)用近30萬(wàn)元，節(jié)省飼料費(fèi)用76萬(wàn)元，提升豬場(chǎng)綜合經(jīng)濟(jì)效益120余萬(wàn)元。該研究也為豬場(chǎng)凈化其它嚴(yán)

11、重影響生產(chǎn)的疫病提供了參考。</p><p>　　關(guān)鍵詞：規(guī)?；N豬場(chǎng)；偽狂犬病；監(jiān)測(cè)；凈化措施</p><p>　　Research on the Pseudorabies vaccine purification in the industrialized pig farm</p><p>　　Jinsong Liu</p><p>　　

12、Directed by Professor Qigui Yan</p><p><b>　　ABSTRACT</b></p><p>　　The pig pseudo rabies is a deadly infectious diseases causing swine fever, itching, neurological symptoms and reprod

13、uctive disorders after the pseudo rabies virus (PRV) intrudes into the body. The disease is the second deadly infectious diseases, it is one of the diseases to leds to heavy economic losses in the pig industry. Around 20

14、12 in the northern and southern part of China's is popular, leds to great losses in pig industry. </p><p>　　This study used four PRVgE antibody detection kit to screen PRVgE antibody levels from four can

15、didates for breeding pig farm pigs, obtain PRVgE antibody positive rate is low (10%) or less positive pig farms, as PRV cleaning pig to experiments.</p><p>　　After 4 weeks of immunity, all swine from 4 breed

16、ing pig farm get Bartha - 61 gene deletion strains vaccine. Take PRV gE antibodies and ,PRV gB antibodies monitoring about All of swine (including backup swine)and part of the piglets. Eliminate PRV gE antibody positive

17、pigs, supplementary PRV gB antibody negative pigs. After 4 weeks with the same method to monitoring the herd of swine，eliminate PRVgB antibody negative pigs. By repeating detection and elimination, Keep PRV gE antibody n

18、egative and</p><p>　　Sampling to monitor these four stable and healthy pigs/breeding pig farm, In two years, the PRVgE wild poisonous antibody positive rate of all the pigs from the core asⅠ,the propagation

19、asⅠ,the propagation as Ⅱand, the propagation as Ⅲ from the test before the 3.3%, 4.8%, 3.6% and 4.8% were reduced to zero ,become the stable PRVgE wild poisonous antibody negative pig farms, Show four purification breedi

20、ng pig farm pig pseudo dog disease are successful.</p><p>　　This study shows that, for pig pseudo rabies PRVgE low antibody positive rate (10%) or less pig farms, the implementation of purification is feasib

21、le. The purification measures not only can promote the implementation of the pig production performance, and can significantly increase the economic benefit, The four selected farm could save preventive treatment costs n

22、early 300000 yuan, to save feed cost 760000 yuan, and raise the overall economic benefits of more than 120 120 yuan of pig farms. The</p><p>　　Key words: Large-scale breeding pig farm; Pseudorabies;Monitorin

23、g; purification measures</p><p><b>　　符號(hào)說(shuō)明</b></p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘 要I</b></p><p>　　ABSTRACTII</p><p><

24、;b>　　符號(hào)說(shuō)明IV</b></p><p><b>　　一、文獻(xiàn)綜述1</b></p><p>　　1偽狂犬病病原學(xué)1</p><p>　　1.1病毒基因組1</p><p><b>　　1.2病毒蛋白2</b></p><p>　　1.2.1

25、病毒結(jié)構(gòu)蛋白2</p><p>　　1.2.2病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2</p><p>　　1.3 培養(yǎng)特性3</p><p><b>　　1.4 抵抗力3</b></p><p>　　2偽狂犬病流行病學(xué)3</p><p><b>　　2.1 傳染源3</b></p

26、><p>　　2.2 傳播途徑3</p><p>　　2.3 易感動(dòng)物4</p><p>　　2.4 流行特點(diǎn)4</p><p>　　3 偽狂犬病臨床癥狀4</p><p>　　3.1 乳豬臨床癥狀4</p><p>　　3.2 仔豬臨床癥狀5</p><p>　

27、　3.3 中豬臨床癥狀5</p><p>　　3.4 母豬臨床癥狀5</p><p>　　3.4.1 懷孕母豬5</p><p>　　3.4.2 空懷母豬5</p><p>　　3.5公豬臨床癥狀5</p><p>　　4 偽狂犬病病理變化5</p><p>　　5 偽狂犬病診斷方法

28、6</p><p>　　5.1 臨床診斷6</p><p>　　5.2 實(shí)驗(yàn)室診斷6</p><p>　　5.2.1病毒分離6</p><p>　　5.2.2血清學(xué)診斷啃6</p><p>　　5.2.3 免疫熒光抗體試驗(yàn)6</p><p>　　5.2.4組織切片7</p&g

29、t;<p>　　5.2.5PCR7</p><p>　　5.2.6核酸探針診斷7</p><p>　　5.2.7 LAMP診斷8</p><p>　　5.2.8鑒別診斷8</p><p>　　6 偽狂犬疫苗及免疫程序8</p><p><b>　　6.1 疫苗8</b>&

30、lt;/p><p>　　6.1.1 基因工程缺失疫苗8</p><p>　　6.1.2亞單位疫苗9</p><p>　　6.1.3 DNA疫苗9</p><p>　　6.2 免疫程序9</p><p>　　6.2.1初生仔豬免疫程序9</p><p>　　6.2.2仔豬及商品豬免疫程序(0

31、/70模式)10</p><p>　　6.2.3種豬免疫程序10</p><p>　　6.3 免疫注意事項(xiàng)10</p><p>　　7我國(guó)豬偽狂犬病的流行現(xiàn)狀11</p><p>　　7.1豬偽狂犬病流行情況11</p><p>　　7.2豬偽狂犬病疫情上升的主要原因11</p><p&

32、gt;　　7.2.1頻繁引種11</p><p>　　7.2.2偽狂犬病疫苗免疫松懈12</p><p>　　7.2.3不重視生物安全措施12</p><p>　　7.2.4返飼自家苗導(dǎo)致了種豬帶毒率增高12</p><p>　　7.3當(dāng)前豬偽狂犬病的防控狀況12</p><p>　　7.4當(dāng)前豬偽狂犬病的防

33、控和凈化方案12</p><p>　　7.4.1良好的生物安全措施是前提12</p><p>　　7.4.2科學(xué)飼養(yǎng)管理是基礎(chǔ)12</p><p>　　7.4.3疫苗有效免疫接種是控制凈化該病的重要措施13</p><p>　　7.4.4果斷淘汰檢測(cè)陽(yáng)性豬是凈化本病的關(guān)鍵13</p><p>　　8 凈化研究

34、現(xiàn)狀13</p><p>　　8.1 歐洲各國(guó)的凈化方案13</p><p>　　8.2 美國(guó)的凈化方案14</p><p>　　8.3 國(guó)內(nèi)的凈化方案14</p><p>　　9.研究目的意義14</p><p>　　二、試驗(yàn)研究部分15</p><p><b>　　1材

35、料15</b></p><p><b>　　1.1動(dòng)物15</b></p><p>　　1.2試劑與儀器15</p><p><b>　　2 方法15</b></p><p>　　2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組15</p><p>　　2.2 試劑盒使用方法15&

36、lt;/p><p>　　2.2.1 gI(gE)檢測(cè)試劑盒使用方法16</p><p>　　2.2.2 gB抗體檢測(cè)試劑盒使用方法16</p><p>　　2.3 凈化具體流程16</p><p>　　2.3.1流行病學(xué)調(diào)查16</p><p>　　2.3.2能否進(jìn)行偽狂犬病凈化的判定17</p>

37、<p>　　2.3.3凈化檢測(cè)前偽狂犬疫苗加強(qiáng)免疫17</p><p>　　2.3.4全群種豬分組17</p><p>　　2.3.5凈化方確定后的豬場(chǎng)偽狂犬疫苗免疫程序18</p><p>　　2.3.6實(shí)施流行病學(xué)調(diào)查與凈化的時(shí)間安排18</p><p><b>　　3結(jié)果18</b></p

38、><p>　　3.1流行病學(xué)調(diào)查情況18</p><p>　　3.2凈化檢測(cè)結(jié)果19</p><p>　　3.2.1核心一場(chǎng)的凈化檢測(cè)結(jié)果19</p><p>　　3.2.2擴(kuò)繁一場(chǎng)的凈化檢測(cè)結(jié)果20</p><p>　　3.2.3擴(kuò)繁二場(chǎng)的凈化檢測(cè)結(jié)果22</p><p>　　3.2.4

39、擴(kuò)繁三場(chǎng)的凈化檢測(cè)結(jié)果23</p><p>　　3.3凈化監(jiān)測(cè)與淘汰24</p><p>　　3.3.1核心一場(chǎng)凈化監(jiān)測(cè)與淘汰情況24</p><p>　　3.3.2擴(kuò)繁一場(chǎng)凈化監(jiān)測(cè)與淘汰27</p><p>　　3.3.3擴(kuò)繁二場(chǎng)凈化監(jiān)測(cè)結(jié)果與淘汰29</p><p>　　3.3.4擴(kuò)繁三場(chǎng)凈化監(jiān)測(cè)結(jié)果與淘

40、汰31</p><p>　　3.4凈化成本與效益34</p><p>　　3.4.1凈化成本34</p><p>　　3.4.2凈化提升收益34</p><p>　　3.4.3進(jìn)口疫苗與國(guó)產(chǎn)疫苗評(píng)價(jià)36</p><p><b>　　4討論36</b></p><p&

41、gt;　　4.1豬場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查與檢測(cè)結(jié)果討論36</p><p>　　4.2豬場(chǎng)凈化技術(shù)要點(diǎn)37</p><p>　　4.2.1建設(shè)生物安全體系37</p><p>　　4.2.2 嚴(yán)格執(zhí)行消毒措施38</p><p>　　4.2.3 制定合理的免疫程序38</p><p>　　4.2.4 建立帶毒豬群的淘

42、汰制度38</p><p>　　4.3防治措施38</p><p>　　4.3.1一般的檢疫和控制措施38</p><p>　　4.3.2流行時(shí)的防治措施38</p><p>　　4.4維持豬場(chǎng)偽狂犬 凈化狀態(tài)的措施,39</p><p><b>　　結(jié)論39</b></p>

43、;<p><b>　　主要參考文獻(xiàn)40</b></p><p><b>　　致 謝43</b></p><p><b>　　一、文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　1偽狂犬病病原學(xué)</b></p><p>　　豬偽狂犬病(Po

44、rcine pseudorabies, PR)又名奧葉茲基病(Aujeszkys disease，AD)，本病由豬Ⅰ型皰疹病毒引起，是一種急性傳染病，可使多種動(dòng)物發(fā)病，主要發(fā)病癥狀為發(fā)熱、中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙等。1813年，本病首次在美國(guó)的牛群中發(fā)現(xiàn)，后來(lái)本病傳播到美洲及歐洲等40余個(gè)地區(qū)和國(guó)家。Aujeszky于1902年證實(shí)本病是由病毒引起的，故名奧葉茲基病，Sabin和Wright于1934年在實(shí)驗(yàn)室確診病原體為Ⅰ型皰疹病毒[1]。本

45、病流行于世界各地，一度對(duì)各國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。</p><p>　　自然界中豬和鼠類是病毒的主要貯存宿主和疫源動(dòng)物，豬更是原發(fā)感染宿主、病毒貯存者、長(zhǎng)期排毒者。豬在感染后，日齡不同，其臨床表現(xiàn)癥狀差異很大：哺乳豬多出現(xiàn)神經(jīng)癥狀和發(fā)熱，有的伴隨腹瀉，病死率可達(dá)80%以上；育肥豬癥狀較輕微，多為隱性感染；懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等繁殖障礙癥狀。通常情況，偽狂病的病死率及嚴(yán)重程度會(huì)隨著豬的日齡增加而降低。自劉永

46、純1948年在我國(guó)首次報(bào)道本病后，目前全國(guó)所有省市基本都流行過本病，本病為我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的重大疫病的二類傳染病，并給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失 [2,3] 。</p><p><b>　　1.1病毒基因組</b></p><p>　　偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus,PRV）的分類學(xué)名稱是豬皰疹病毒Ⅰ型，病毒粒子為直徑150～180nm的圓形，核衣殼為

47、直徑為105～110nm的二十面體對(duì)稱[3]，病毒粒子主要是由宿主細(xì)胞衍生而來(lái)，結(jié)構(gòu)為脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)，病毒囊膜為最外層。囊膜表面有長(zhǎng)約8～10nm纖突，呈放射狀排列。病毒核內(nèi)DNA為線狀雙股DNA，大小約150kb，存在形式是高分子質(zhì)量的連環(huán)體，有高達(dá)74.5%的G+C含量，組成部分包括：獨(dú)特短區(qū)段、內(nèi)部重復(fù)序列(IR) 、獨(dú)特長(zhǎng)區(qū)段、和末端重復(fù)序列(TR)，結(jié)構(gòu)特征符合皰疹病毒基因組的典型結(jié)構(gòu)。成熟的病毒粒子包含50多種蛋白質(zhì)，約有70

48、～100種蛋白質(zhì)可通過基因組包含的ORF編碼，而這些ORF數(shù)目可超過70個(gè)[4]。</p><p>　　多基因協(xié)同控制機(jī)制可影響PRV的毒力，機(jī)制主要包括TK、gI、gD和gE基因，其中TK基因是主要的影響因素，它的活性和PRV的毒力呈正相關(guān)關(guān)系，活性越強(qiáng)，病毒對(duì)宿主的毒力越強(qiáng)。因此，大多制備缺失基因疫苗。</p><p><b>　　1.2病毒蛋白</b></

49、p><p>　　1.2.1病毒結(jié)構(gòu)蛋白</p><p>　　通過測(cè)序可發(fā)現(xiàn)，其基因組由72個(gè)閱讀框組成，可編碼70種蛋白，目前已發(fā)現(xiàn)和命名的有g(shù)B 、gG、gH、gC、gE、gN、 gK、gD、gL、gI、gM l1種糖蛋白[5]，主要分兩大類：一類是必需糖蛋白，主要包括gD、gB、gL、g H；另一類是非必需糖蛋白，主要包括gC、gG、gE、gK、 gI、gN、gM，其中g(shù)G是外分泌蛋白，g

50、D、gC和gE的主要作用是病毒免疫誘導(dǎo)[6]。目前，主要的研究方法在對(duì)糖蛋白上突變株失活株的插入以及失活的研究。當(dāng)今，主要是進(jìn)行構(gòu)建缺失突變株。</p><p>　　gD主要作用是：幫助病毒穿透細(xì)胞、介導(dǎo)病毒與靶細(xì)胞的穩(wěn)定結(jié)合、病毒黏附細(xì)胞表面耐受肝素。缺失gD基因的毒株，無(wú)法在病毒粒子表面合成gD蛋白，無(wú)法不可逆吸附在細(xì)胞膜上，無(wú)法感染細(xì)胞。簡(jiǎn)而言之，gD蛋白主要作用在病毒的穿透過程，不是病毒在細(xì)胞間傳播過程。

51、同時(shí)gD具有中和保護(hù)能力，可刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗gD抗體，也是PR主要的免疫原性蛋白之一。</p><p>　　gC是主要但不是必須糖蛋白。gC在感染細(xì)胞中主要的形式存在為，92ku成熟糖蛋白形式以及具有N-糖基化的74ku前體形式。主要作用包括：結(jié)合肝素樣受體介導(dǎo)吸附作用、介導(dǎo)病毒的釋放以及中和抗原 [7]。</p><p>　　gE是非必需的，主要控制毒力的大小和病毒的復(fù)制。另外，gE基因

52、促進(jìn)PRV在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的擴(kuò)散，因此gE是PRV毒力的主要影響因素，但由于PRV的毒力是受多基因協(xié)調(diào)控制機(jī)制控制的， gE基因缺失的疫苗株往往有一定的毒力[8]。</p><p>　　1.2.2病毒非結(jié)構(gòu)蛋白</p><p>　　根據(jù)性質(zhì)以及對(duì)毒力的作用，可將這些非結(jié)構(gòu)蛋白分為3類：病毒編碼的與DNA代謝或磷酸化有關(guān)的酶、與病毒裝配有關(guān)的衣殼蛋白以及介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主體內(nèi)并擴(kuò)散的囊膜糖蛋白

53、。主要參與完成：宿主細(xì)胞的裂解和病毒的包裝、細(xì)胞出芽、基因調(diào)節(jié)使宿主細(xì)胞的復(fù)制中止以及復(fù)制起點(diǎn)結(jié)合等。另外，非結(jié)構(gòu)蛋白直接的影響病毒的毒力強(qiáng)弱。</p><p>　　編碼胸苷激酶（TK）基因是在PRV中首先發(fā)現(xiàn)的，與毒力有關(guān)的基因，主要對(duì)毒力和持續(xù)感染有重要影響，呈正相關(guān)關(guān)系[9]。因此，通過改造PRV的基因組，獲得TK基因變異株，具有重要意義。此外，由于插入有PK的突變株，會(huì)使得毒力有明顯的變化，認(rèn)為影響病毒毒

54、力的另一基因是蛋白激酶PK基因。研究表明，PK酶活性不是主要影響病毒復(fù)制的因素，但它有可能通過對(duì)體外一個(gè)主要的磷酸蛋白磷酸化來(lái)有效促進(jìn)組織培養(yǎng)中的病毒生長(zhǎng)。</p><p><b>　　1.3 培養(yǎng)特性</b></p><p>　　PRV的血清型唯一，不同點(diǎn)主要體現(xiàn)在毒力和生物學(xué)特征等方面。病毒可在雞胚和細(xì)胞中培育。病毒具有泛嗜性，能在多種組織培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)增殖，其中以兔

55、腎和豬腎細(xì)胞(包括原I代細(xì)胞和傳代細(xì)胞系)最易引起明顯的細(xì)胞病變，表現(xiàn)為：細(xì)胞腫脹變圓，開始呈散在的灶狀，隨后逐漸擴(kuò)展，直至全部細(xì)胞圓縮脫落，同時(shí)有大量多核巨細(xì)胞形成[10]。當(dāng)接種量大時(shí)，細(xì)胞可在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)典型病變。最早的病毒增殖和傳代的方法是接種到雞胚絨毛尿囊膜上，但雞胚不是偽狂犬病毒的敏感培養(yǎng)組織。也可用其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)[11]，常采用抵抗力較成年鼠低的1日齡小鼠培養(yǎng)，也可用兔組織代替 [12]。</p>

56、;<p><b>　　1.4 抵抗力</b></p><p>　　偽狂犬病毒對(duì)外界環(huán)境如低溫、干燥抵抗力較強(qiáng)。在污染的豬舍及雜物上能存活30天左右，肉中可存活5W以上，3%的來(lái)蘇兒，2%的火堿能很快殺死病毒，常用消毒劑及紫外線照射可殺滅病毒，對(duì)甲醛、石炭酸及脂溶性有機(jī)溶劑如氯仿、乙醚等較敏感[13]。</p><p><b>　　2偽狂犬病流行

57、病學(xué)</b></p><p><b>　　2.1 傳染源</b></p><p>　　豬和鼠類為本病毒的貯存宿主，其他哺乳動(dòng)物的感染和接觸患病的豬、鼠相關(guān)。感染豬可垂直和水平傳播本病，并不斷排毒，造成豬群循環(huán)感染，是本病流行時(shí)間長(zhǎng)、短時(shí)間較難清除的主要原因。</p><p><b>　　2.2 傳播途徑</b>

58、</p><p>　　豬場(chǎng)中，病豬及帶毒豬、污染的物品及接觸疫源的人員在本病的流行中起著媒介作用。經(jīng)現(xiàn)在研究，空氣傳播為本病的主要傳播途徑，牛、羊在發(fā)病豬場(chǎng)附近放牧曾發(fā)生過感染本病的報(bào)道。在豬群中病毒主要通過豬的鼻分泌物、接觸疫源的人員、污染病原的飼料、飲水等物品傳播。有報(bào)道，感染本病的種豬的精液和乳汁也能傳播本病。</p><p><b>　　2.3 易感動(dòng)物</b>

59、;</p><p>　　偽狂犬病毒可發(fā)生于多種哺乳動(dòng)物和鳥類，本病毒廣泛分布世界各地。本易感動(dòng)物種類較多，如：豬、羊、犬、馬、貓、兔、貂、狐、鼠及多種野生物。人類感染本病毒的報(bào)道較少，但世界各地都有零星的報(bào)告：如土耳其、波蘭、歐洲和我國(guó)臺(tái)灣都曾有報(bào)道的案例。</p><p><b>　　2.4 流行特點(diǎn)</b></p><p>　　本病能發(fā)生垂

60、直傳播，通過母豬，胎兒及所生仔豬可發(fā)生感染，病毒豬群之間通過接觸、空氣及污染物可發(fā)生水平傳播，造成本病流行時(shí)間長(zhǎng)、清除困難。本病的發(fā)病率與死亡率與日齡呈負(fù)相關(guān)，即日齡越小病死率越高，日齡越大病死率越低。本病一年四季都可能發(fā)生，但多在發(fā)生在寒冷的冬春季節(jié)。豬場(chǎng)生物安全措施不到位，飼養(yǎng)流程管理混亂，環(huán)境衛(wèi)生差，預(yù)防保健疫苗免疫不到位、各種應(yīng)激因素都容易誘發(fā)本病。</p><p>　　3 偽狂犬病臨床癥狀</p&

61、gt;<p>　　該病對(duì)豬的危害最為嚴(yán)重，主要引起妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死白胎或木乃伊胎等；公豬睪丸萎縮、陰囊水腫、出現(xiàn)死精、無(wú)精等無(wú)法使用而淘汰；哺乳仔豬病死率極高、多出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、高熱、呼吸困難及少部分發(fā)生腹瀉；育肥豬一般呈不表現(xiàn)癥狀的隱性感染；母豬多表現(xiàn)繁殖障礙癥狀：流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎及死胎，并且母豬流產(chǎn)后會(huì)發(fā)生屢配不孕的現(xiàn)象，多會(huì)持續(xù)半年時(shí)間；種公豬感染后會(huì)出現(xiàn)陰囊炎、睪丸炎，從而出現(xiàn)死精、無(wú)精、精子活力低、畸形率高而無(wú)法

62、正常使用。</p><p>　　本病還會(huì)造成免疫抑制現(xiàn)象，造成其它疫苗免疫失敗，同時(shí)增加其它疫病的易感性，造成混合感染，增加豬病的復(fù)雜性與豬群的病死率。</p><p>　　3.1 乳豬臨床癥狀</p><p>　　乳豬感染本病后，因日齡不同，癥狀與病死率差異較大。1周以內(nèi)的病死率可達(dá)100%；多表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀、吐白色泡沫、嗜睡、眼瞼發(fā)紅腫脹，體溫40℃～42℃，多

63、數(shù)在41℃左右，聽到刺激聲可出現(xiàn)倒地尖叫、抽搐等。豬可出現(xiàn)眼瞼、嘴角、頜下水腫。腹部皮現(xiàn)出現(xiàn)米粒大小不一的紫色斑點(diǎn)，嚴(yán)重呈全身敗血癥狀，豬只站立不穩(wěn)，共濟(jì)失調(diào)，角弓反張，持續(xù)時(shí)間4到10分鐘。病情最短為幾小時(shí)，最長(zhǎng)5~7天。出現(xiàn)典型神經(jīng)癥狀與拉黃色稀便的豬只，多預(yù)示預(yù)后不良，少數(shù)耐過豬只多為僵豬。</p><p>　　3.2 仔豬臨床癥狀</p><p>　　仔豬臨床表現(xiàn)癥狀與乳豬相似，但

64、癥狀要輕得多，發(fā)病率20%到40%，死亡率10%到20%不等。患病仔豬多出現(xiàn)尖叫、站立不穩(wěn)、口吐白沫等明顯的神經(jīng)癥狀，后期多表現(xiàn)為嗜睡，急性病例多24~48h死亡，一般多3到5天死亡。耐過豬常出現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育受阻而變?yōu)榻┴i。</p><p>　　3.3 中豬臨床癥狀</p><p>　　2月齡以上的豬只多為隱性感染而臨床癥狀輕微，低熱、結(jié)膜潮紅、流鼻涕、有的鼻液呈膿性；有些表現(xiàn)為咳嗽、精神萎靡

65、不振，有的呈犬坐勢(shì)呼吸，大多采食量下降，部分出現(xiàn)拉黃色稀便及嘔吐，大部分豬只在7天左右可以康復(fù)，嚴(yán)重者病情可長(zhǎng)達(dá)至20天左右。若表現(xiàn)僵直、驚厥、行走困難、共濟(jì)失調(diào)、間歇性倒地后四肢痙攣等神經(jīng)癥狀，常預(yù)示著預(yù)后不良。</p><p>　　3.4 母豬臨床癥狀</p><p>　　3.4.1 懷孕母豬</p><p>　　懷孕母豬多表現(xiàn)為繁殖障礙癥狀，分娩延遲或提前無(wú)規(guī)

66、律，產(chǎn)死胎、木乃伊胎、活仔弱仔居多，初生重小，流產(chǎn)后不發(fā)情或?qū)遗洳辉械?。母豬發(fā)病沒有明顯的季節(jié)性，便以天氣較冷的冬春季多發(fā)，極少數(shù)懷孕母豬也可能發(fā)生死亡。</p><p>　　3.4.2 空懷母豬</p><p>　　空懷母豬多癥狀不明顯，有部分出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、便秘、采食量減少等，也有個(gè)別的出現(xiàn)敗血癥狀。也有的體溫持續(xù)在40℃～42℃之間，最后衰竭死亡。感染母豬屢配不孕，返情率增高。<

67、/p><p><b>　　3.5公豬臨床癥狀</b></p><p>　　公豬臨床上多表現(xiàn)為隱性感染，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)睪丸炎、陰囊積液，精液可能帶毒，檢測(cè)精液出現(xiàn)無(wú)精、死精或精從活力低下，無(wú)法種用而淘汰</p><p>　　4 偽狂犬病病理變化</p><p>　　感染偽狂犬病毒而流產(chǎn)的母豬，主要發(fā)生胎盤炎。</p>

68、<p>　　流產(chǎn)胎兒全身淋巴結(jié)可出現(xiàn)壞死；急性死亡的乳豬，扁桃體有壞死灶，喉頭有白色纖維素性偽膜，喉粘膜有出針尖狀的出血點(diǎn)；肺部有水腫、有散在小的壞死點(diǎn)與出血點(diǎn)、有的呈小葉性肺炎；腦膜有充血、水腫現(xiàn)象，腦膜下大量積液；胃、腸、膀胱粘膜有充血出血現(xiàn)象；有些病豬會(huì)出現(xiàn)結(jié)膜炎癥狀；肝、脾有大小不一的白色壞死灶，腎臟表面有針尖狀出血點(diǎn)。組織學(xué)病變主要是：中樞神經(jīng)系統(tǒng)的彌散性非化膿性腦膜腦炎及神經(jīng)節(jié)炎，有明顯的血管套及彌散性局部膠質(zhì)細(xì)

69、胞壞死。</p><p>　　5 偽狂犬病診斷方法</p><p><b>　　5.1 臨床診斷</b></p><p>　　根據(jù)本病的臨床癥狀，結(jié)合流行病學(xué)，可做出初步鑒別診斷，確診必須依據(jù)實(shí)驗(yàn)室診斷。</p><p><b>　　5.2 實(shí)驗(yàn)室診斷</b></p><p>

70、;<b>　　5.2.1病毒分離</b></p><p>　　通過實(shí)驗(yàn)室分離鑒定到偽狂犬病病毒是確診本病準(zhǔn)確的方法。病料多采集病豬的扁桃體、腦組織，病料處理后接種于豬、倉(cāng)鼠腎傳細(xì)胞或雞胚成纖維細(xì)胞上，進(jìn)行接種培養(yǎng)鑒定。無(wú)法進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，可將病料接種在家兔了身上，家兔會(huì)出現(xiàn)劇癢癥狀。通過實(shí)驗(yàn)室分離到病毒后用中和試驗(yàn)以確診本病[14]。</p><p>　　5.2.2血

71、清學(xué)診斷啃</p><p>　　檢測(cè)偽狂犬血清抗體的方法主要有：列為國(guó)際貿(mào)易中抗體檢測(cè)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA) 、血清中和試驗(yàn)(SNT)、瓊脂免疫擴(kuò)散、乳膠凝集試驗(yàn)等。王隆柏等[15]推薦經(jīng)典中和試驗(yàn)檢測(cè)豬血清中PRV中和抗體，該方法耗時(shí)長(zhǎng)( 72h以上)，但可靠性高、靈敏度高，特異性強(qiáng)，適合于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。</p><p>　　5.2.3 免疫熒光抗體試驗(yàn)</p>

72、<p>　　Stewart等首先應(yīng)用熒光抗體染色法檢查病毒和病料接種的豬腎傳PK-15培養(yǎng)物，取得了成功。</p><p>　　Allan GM等建立了檢測(cè)PRV實(shí)驗(yàn)感染豬和自然感染豬腦及咽喉的間接免疫熒光技術(shù)，可在取得病料2小時(shí)內(nèi)得出結(jié)果，病毒抗原最低檢出量為101.3TCID50/g的腦壓印片。Sabo等建立了豬臟器冰凍切片的直接FA技術(shù)，腦組織中病毒抗原的最小檢出量為104.5TCID50/g。&

73、lt;/p><p><b>　　5.2.4組織切片</b></p><p>　　組織切片熒光抗體檢測(cè)法：取病豬腦或扁桃體的冰凍切片或壓片，用直接免疫熒光檢測(cè)，在幾小時(shí)就能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。該方法對(duì)于乳仔豬較敏感，對(duì)于成年豬病毒分離效果要敏感些。</p><p>　　黃駿明[16]等建立了 (FA)技術(shù)，取病豬腦組織，作冰凍切片進(jìn)行FA檢查，可直接檢測(cè)

74、出試驗(yàn)感染、組織培養(yǎng)及自然感染病料中的PRV，能在2h內(nèi)得到結(jié)果，現(xiàn)場(chǎng)偽狂犬病的診斷非常實(shí)用。</p><p><b>　　5.2.5PCR</b></p><p>　　PCR檢測(cè)豬偽狂犬病病毒，利用PCR可從患病動(dòng)物的組織病料或分泌物中擴(kuò)增豬偽狂犬病病毒的基因，確診本病。PCR方法能進(jìn)行活體采樣，同時(shí)可進(jìn)行大批量的樣本檢測(cè)，具有敏感、快速特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，特別適合于臨

75、床診斷。</p><p>　　田云[17]等根據(jù)偽狂犬病毒的gE基因的特點(diǎn)，建立了PRV野毒的熒光定量PCR方法。該方法可以區(qū)分疫苗毒與野毒感染，對(duì)于豬場(chǎng)偽狂犬病的凈化提供了一種有效的檢測(cè)方法。</p><p>　　楊雪[18]等建立了一種基于偽狂犬病病毒gE基因的檢測(cè)偽狂犬病病毒的PCR方法，能夠檢測(cè)到的最低DNA模板量為10pg。劉園園[19]等根據(jù)偽狂犬病病毒gE基因的保守序列建立了

76、檢測(cè)偽狂犬病病毒的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。李明鳳[20]等利用PCR技術(shù)擴(kuò)增PRV gH基因的187bp片段，建立了SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。Huang[21]等建立了快速檢測(cè)偽狂犬病病毒的多重PCR方法。Lee等[22]建立了檢測(cè)豬偽狂犬病病毒、圓環(huán)病毒的多重PCR方法。Yue等[23]建立了檢測(cè)豬細(xì)小病毒、藍(lán)耳病毒、偽狂犬病病毒臨床樣品的多重PCR方法。這些方法都可用于偽狂犬病的凈化檢測(cè)。</p>

77、<p>　　5.2.6核酸探針診斷</p><p>　　郭萬(wàn)柱[24]等用斑點(diǎn)雜交法，能檢測(cè)到10pg的 PRV-DNA，且有很高的準(zhǔn)確性。Brown等建立了檢測(cè)感染豬體內(nèi)PRV-DNA的原位雜交法。Mase等用生物素和地高辛標(biāo)記探針技術(shù)、魏偉等用光敏生物素標(biāo)記PRV特異性糖蛋白GP50克隆重組顆粒PUP作為探針都能有效地檢測(cè)偽狂犬病毒。證明通過PCR和分子克隆技術(shù)制備的PRV特異性糖蛋白基因片段的光

78、敏生物探針能有效地用于檢測(cè)偽狂犬病。</p><p>　　5.2.7 LAMP診斷</p><p>　　Fang等[25]根據(jù)PRV的DNA結(jié)合蛋白DBP基因設(shè)計(jì)引物，建立了最低可檢測(cè)DNA的含量為10fg的檢測(cè)方法。楊睿等[26]根據(jù)PRV gE基因的保守序列設(shè)計(jì)4條引物，建立了偽狂犬病病毒LAMP檢測(cè)方法。該方法特異性，靈敏度為普通PCR的100倍，最低可檢測(cè)出質(zhì)量濃度為6.2

79、5;10-9g/mL的病毒DNA，并且該方法僅用時(shí)40分鐘左右。</p><p><b>　　5.2.8鑒別診斷</b></p><p>　　本病母豬易發(fā)生繁殖障礙，臨床上注意與藍(lán)耳病、乙腦、細(xì)小、豬瘟、布病、弓形體病相區(qū)別。</p><p>　　6 偽狂犬疫苗及免疫程序</p><p><b>　　6.1 疫

80、苗</b></p><p>　　由于部分豬場(chǎng)對(duì)疫苗免疫的重視不夠，加上豬只流動(dòng)頻繁，免疫程序不科學(xué)等原因，造成偽狂犬病仍在流行。</p><p>　　我國(guó)偽狂犬疫苗生產(chǎn)廠家較多，有活苗與滅活苗兩種。單純就免疫效價(jià)來(lái)說(shuō)弱毒苗優(yōu)于滅活苗。滅活疫苗雖能激發(fā)比弱毒疫苗更高的抗體，但據(jù)抗體水平的高低來(lái)判斷疫苗的效價(jià)是不夠全面的。因?yàn)闄C(jī)體有多種免疫機(jī)制抵抗病毒的感染，主要有細(xì)胞免疫、體液免

81、疫、干擾素、局部免疫和超感染占位競(jìng)爭(zhēng)等。弱毒疫苗能激發(fā)機(jī)體多種免疫機(jī)制對(duì)機(jī)體提供全面而迅速的保護(hù)。 體液免疫在中和病毒方面作用重大，但有有其缺點(diǎn)，免疫效果受其到達(dá)部位的限制，這就需要依賴于細(xì)胞免疫和其它免疫機(jī)制來(lái)協(xié)作。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞免疫在抗病毒感染中占最重要的地位，但起效較慢，但體液免疫及其它免疫起效十分快，因此弱毒疫苗多用于緊急免疫接種。近年來(lái)研究和開發(fā)的趨勢(shì)主要是發(fā)展基因工程弱毒疫苗。</p><p>　　6

82、.1.1 基因工程缺失疫苗</p><p>　　通過基因工程技術(shù)，插入或切除一段序列，使得PRV的基因不能完全表達(dá)，減弱PRV的毒性但不改變它的免疫原性。一些糖蛋白（gG、gE、gC、gD）、胸苷激酶和蛋白激酶等是主要的缺失目標(biāo)。目前，已經(jīng)構(gòu)建了多種缺失疫苗。</p><p>　　1986年，由Kit等[27]制成被美國(guó)批準(zhǔn)為上市的第1個(gè)基因工程疫苗。該毒株是在BUK株作用下缺失148bp

83、的 TK基因，它對(duì)鼠和兔的毒力致弱但同時(shí)又保持其較強(qiáng)的免疫原性，可抵抗強(qiáng)毒，縮短強(qiáng)毒排出時(shí)間。Marchioli等[28] 構(gòu)建的TK－/gG－雙基因缺失株，包括缺失276bp的TK基因和缺失gG的基因。接種動(dòng)物后，結(jié)果表明不適合接種犬、貓、牛，但接種小鼠和豬后，可產(chǎn)生較好的免疫性。Quint等[29]和Van oirschot等[30] 分別構(gòu)建了不同親本的TK－/gE－雙基因缺失株，該疫苗接種的豬有較強(qiáng)的抵抗力。陳煥春[31] 等篩

84、選獲得的TK－/gE－/LacZ+基因缺失株，不會(huì)返強(qiáng)、遺傳穩(wěn)定。接種不同日齡的豬后，用gE－ELISA檢測(cè)，免疫效果較為明顯。接種疫苗后的動(dòng)物，在試驗(yàn)期內(nèi)均表現(xiàn)正常。顯示生物安全性極高，可用于病毒的防制。</p><p>　　6.1.2亞單位疫苗</p><p>　　亞單位疫苗是高效表達(dá)病原保護(hù)性抗原基因的疫苗，利用基因工程方法制成。亞單位疫苗為結(jié)構(gòu)蛋白，目前發(fā)現(xiàn)，機(jī)體中糖蛋白中的gB、

85、gC、gD均產(chǎn)生中和抗體，這些抗體無(wú)論在任何情況下都有中和病毒的能力。因此gB、gC、gD是研制的首選糖蛋白。Marchioli等在以pSV-DHFR為載體的人巨細(xì)胞病毒（HCMV）中，在立即早期啟動(dòng)子的下游插入克隆的PRV保護(hù)性抗原基因gD，然后在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)中轉(zhuǎn)入，通過氨喋呤，篩選出1株細(xì)胞株，可以表達(dá)gD蛋白的CHO gD-17，擴(kuò)大培養(yǎng)后，得到表達(dá)產(chǎn)物配，免疫豬經(jīng)鼻內(nèi)接種，可使得免疫豬產(chǎn)生抗體，增強(qiáng)抵抗力。陳振海等

86、[32]得到的純的高效價(jià)Adv-gC病毒液，此重組病毒通過間接免疫熒光試驗(yàn)證明，可以表達(dá)PRV gC蛋白，對(duì)免疫BALB/c小鼠進(jìn)行肌肉注射，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。攻毒試驗(yàn)表明，此重組病毒能提供100%的免疫保護(hù)。</p><p>　　6.1.3 DNA疫苗</p><p>　　DNA疫苗（核酸疫苗），宿主細(xì)胞吸收直接接種的細(xì)菌免疫原性基因和有病毒的質(zhì)粒。在細(xì)胞中，免疫原性基因表達(dá)，病毒

87、抗原合成，機(jī)體的免疫應(yīng)答被激活。Gerdts等[33] 構(gòu)建了DNA疫苗。PRV-75V19毒株的毒力可完全被表達(dá)gC的核酸疫苗抵抗，部分接種豬能抵抗強(qiáng)毒NIA-3株，但PRV強(qiáng)毒株可繼續(xù)攻擊接種表達(dá)gD的核酸疫苗的豬。肌肉或皮下注射3次1μg的gC核酸疫苗，抗gC的抗體能在血清中檢測(cè)到，部分注射后的豬可以對(duì)NIA-3產(chǎn)生抵抗，以及特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。</p><p><b>　　6.2 免疫程序<

88、;/b></p><p>　　6.2.1初生仔豬免疫程序</p><p>　　PRV可感染各種年齡的豬，本病可在豬群中可水平傳播與垂直傳播[34]。并且我國(guó)多數(shù)的豬場(chǎng)未采取分點(diǎn)式飼養(yǎng)，豬場(chǎng)生物安全制度措施不完善、免疫程序設(shè)計(jì)不合理、從業(yè)人員整體素質(zhì)不高，造成偽狂犬病毒在豬群之間、豬場(chǎng)之間不斷傳播[35]。本病造成損失的大小與豬場(chǎng)的管理狀況與疫苗免疫水平有很大的相關(guān)性。國(guó)外研究表明，母

89、豬免疫狀況良好，母源抗體對(duì)仔豬保護(hù)能達(dá)到8W～14W，我國(guó)測(cè)定的母源抗體保護(hù)的時(shí)間多為8~10周。</p><p>　　仔豬超前免疫：一般都是乳豬出生后立即進(jìn)行滴鼻免疫，免疫后1~2小時(shí)吃初乳。這種方式可以有效地阻斷野毒的感染，但母源抗體會(huì)影響疫苗的效果。</p><p>　　二免時(shí)間的確定：現(xiàn)在多是根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)仔豬的抗體水平而確定一般在70日齡左右，原因有二：首先，仔豬此時(shí)已斷奶20d以

90、上，已渡過了對(duì)應(yīng)激很敏感的斷奶期，并適應(yīng)的飼新的飼養(yǎng)方式和環(huán)境，此時(shí)免疫疫苗，應(yīng)激相應(yīng)較??；再者，由于存在免疫記憶機(jī)制，免疫后會(huì)迅速地產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，抗體約在70日齡前達(dá)到高峰，產(chǎn)生可靠的免疫保護(hù)力(疫苗免疫有效保護(hù)期約為4個(gè)月左右)，并一直維持到仔豬的育肥期結(jié)束。</p><p>　　6.2.2仔豬及商品豬免疫程序(0/70模式)</p><p>　　超前免疫程序：仔豬出生后立即用偽狂

91、犬基因缺失苗滴鼻，每個(gè)鼻孔0.5 ml，頸部肌肉注射1 ml[36]，接種后1.5～2h后食初乳。</p><p>　　二免程序：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)抗體水平情況決定二免日齡，一般多在70天左右,每頭仔豬頸部肌注射1頭份。</p><p>　　6.2.3種豬免疫程序</p><p>　　免疫母豬一是為了使母豬免受偽狂犬野毒的感染，同時(shí)要讓仔豬從母乳中獲得較高的母源抗體。感

92、染上野毒的母豬會(huì)長(zhǎng)期帶毒與排毒，免疫感染過的母豬能縮短其帶毒與排毒的時(shí)間，將有助于控制疫情的擴(kuò)散。</p><p>　　母豬一般是在配種前與產(chǎn)前各免疫一次，公豬每年免疫接種4次。</p><p>　　孫建華，宋迎春[37] 在未曾發(fā)生過豬偽狂犬病的豬場(chǎng)，針對(duì)一起免疫偽狂犬疫苗而發(fā)生流產(chǎn)的案例得到了的車結(jié)論可以看出，對(duì)妊娠母豬的免疫一定要慎重。妊娠母豬接種PRV疫苗后較短的時(shí)間內(nèi)會(huì)產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的

93、免疫力，但也會(huì)出現(xiàn)短時(shí)間的排毒。為了防止病毒水平傳播，建立定期檢測(cè)制度，淘汰陽(yáng)性豬只，這樣最終才能建立偽狂犬病陰性群。</p><p>　　6.3 免疫注意事項(xiàng) </p><p>　　豬群免疫前必須先做免疫監(jiān)測(cè)，否則極易對(duì)豬場(chǎng)造損失，并且會(huì)存在潛在危險(xiǎn)。疫苗都是在豬群健康的情況下接種才會(huì)起到保護(hù)作用，而實(shí)際生產(chǎn)中，豬群的亞臨床狀態(tài)不易發(fā)現(xiàn)。不進(jìn)行檢測(cè)免疫，豬只的抗體干擾和免疫抑制會(huì)使疫苗免

94、疫效果降低[38]。</p><p>　　從理論上來(lái)講，一個(gè)豬場(chǎng)接種不同基因缺失的活疫苗，可發(fā)生基因重組的風(fēng)險(xiǎn)，但是在生產(chǎn)實(shí)踐中還未發(fā)現(xiàn)這種情況的發(fā)生。在條件允許的情況下盡可能地一個(gè)豬場(chǎng)只使用一種弱毒苗。</p><p>　　在針對(duì)偽狂犬病的防控方面，要定期檢測(cè)豬群，淘汰陽(yáng)性豬只，并執(zhí)行合理的免疫程序讓種豬群長(zhǎng)期保持偽狂犬病野毒陰性[39]。一定要做到實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)豬群的抗體水平。</p&

95、gt;<p>　　7我國(guó)豬偽狂犬病的流行現(xiàn)狀</p><p>　　7.1豬偽狂犬病流行情況</p><p>　　我國(guó)曾于2000年左右暴發(fā)過大面積偽狂犬病疫情，隨著科技的發(fā)展、檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，通過疫苗免疫、檢測(cè)淘汰陽(yáng)性豬只，成功的在部分地區(qū)的豬場(chǎng)實(shí)現(xiàn)了偽狂犬病的凈化。2012年冬天起，山東、河南、河北等地都有發(fā)生豬偽狂犬病案例的報(bào)道，具體情況如下： </p>&

96、lt;p>　　發(fā)病豬群表現(xiàn)明顯的偽狂犬病臨床癥狀，部分場(chǎng)的野毒陽(yáng)性率升高，甚至100%，有的呈爆發(fā)性流行，有的僅表現(xiàn)亞臨床癥狀，部分豬場(chǎng)gB抗體陽(yáng)性率偏低。</p><p>　　發(fā)病豬群主要表現(xiàn)為10日齡以上哺乳仔豬出現(xiàn)頑固性腹瀉、個(gè)別仔豬有嘔吐或神經(jīng)癥狀，病死率60%-70%；保育豬、肥育豬表現(xiàn)呼吸道癥狀、長(zhǎng)長(zhǎng)緩慢，病死率10%-30%左右不等。</p><p>　　解剖癥狀主要為

97、：淋巴結(jié)呈廣泛性水腫、腎與肺有小出血點(diǎn)、用脾臟及扁桃體都有壞死灶。通過病料送檢，經(jīng)PCR鑒定確診為偽狂犬病病毒陽(yáng)性。</p><p>　　豬群表現(xiàn)偽狂犬病的臨床癥狀后，全群進(jìn)行偽狂犬疫苗緊急免疫接種，很快就能控制病情，一般2周左右恢復(fù)正常。</p><p>　　7.2豬偽狂犬病疫情上升的主要原因</p><p><b>　　7.2.1頻繁引種</b&

98、gt;</p><p>　　豬場(chǎng)引種頻繁：由于生產(chǎn)條件的限制，部分豬場(chǎng)無(wú)法培育足夠數(shù)量的后備種豬，或無(wú)法培育后備種豬，根據(jù)生產(chǎn)的需要，淘汰生產(chǎn)成績(jī)不好的種豬，引進(jìn)新的后備種豬成為必須，而且大部分豬場(chǎng)未對(duì)引入的后備種豬進(jìn)行偽狂犬野毒的檢測(cè)，造成疫病的引入。 </p><p>　　7.2.2偽狂犬病疫苗免疫松懈</p><p>　　免疫程序不規(guī)范：由于近年來(lái)養(yǎng)豬行情不是

99、特別好，為了節(jié)省費(fèi)用，部分豬場(chǎng)對(duì)偽狂犬疫苗，只免疫種豬不免疫商品豬。未免疫疫苗的豬只成了病毒的“保種基地”。部分豬場(chǎng)免疫程序不合理，造成漏免或豬群抗體水平不整齊，而造成豬群發(fā)病。</p><p>　　7.2.3不重視生物安全措施</p><p>　　部分豬場(chǎng)生產(chǎn)管理混亂、生物安全制度落實(shí)不到位，消毒工作是應(yīng)付，導(dǎo)致外源性感染。場(chǎng)內(nèi)未進(jìn)行有效地滅鼠，部分場(chǎng)還飼養(yǎng)了犬、貓等寵物。</p&

100、gt;<p>　　7.2.4返飼自家苗導(dǎo)致了種豬帶毒率增高</p><p>　　2011年冬季以來(lái)，我國(guó)大面積流行傳染性胃腸炎、流行性腹瀉，疫情不易控制。部分豬使用病料如小腸及內(nèi)容物、稀便等返飼懷孕母豬，若病料中含有PRV將會(huì)造成疫病的感染，部分豬場(chǎng)取小豬的病料做“自家苗”滅活不完全也極易造成偽狂犬病的流行。</p><p>　　7.3當(dāng)前豬偽狂犬病的防控狀況</p&g

101、t;<p>　　據(jù)報(bào)道，2012年分離到PR具有某種變異，但是現(xiàn)有的疫苗仍能有效地控制病情。證明加強(qiáng)疫苗免疫，仍是控制本病的重要手段。</p><p>　　7.4當(dāng)前豬偽狂犬病的防控和凈化方案</p><p>　　7.4.1良好的生物安全措施是前提</p><p>　　良好的生物安全措施是控制本病的前提：豬場(chǎng)人員、物品、車輛的進(jìn)出應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，生產(chǎn)

102、區(qū)與生活區(qū)分開，并定期進(jìn)行消毒。場(chǎng)內(nèi)禁止飼養(yǎng)其他動(dòng)物、定期滅鼠。制訂嚴(yán)格的引種計(jì)劃，定點(diǎn)引種，引種后進(jìn)行隔離30天以上，并對(duì)所引的種豬進(jìn)行全群檢測(cè)，淘汰偽狂犬野毒陽(yáng)性豬只，隔離結(jié)束后，檢測(cè)全為陰性的豬只才能入群。</p><p>　　7.4.2科學(xué)飼養(yǎng)管理是基礎(chǔ)</p><p>　　保證豬舍內(nèi)空氣質(zhì)量，注意保溫與通風(fēng)，合理的飼養(yǎng)密度，實(shí)行全進(jìn)全出制度，控制豬舍內(nèi)環(huán)境溫濕度，讓不同的豬只生活

103、在溫、濕度適宜的豬舍。采取綜合措施降低對(duì)豬只的各種應(yīng)激。</p><p>　　7.4.3疫苗有效免疫接種是控制凈化該病的重要措施</p><p>　　通過有效地免疫疫苗，可預(yù)防本病導(dǎo)致的仔豬感染死亡和母豬繁殖障礙癥狀，縮短排毒時(shí)間與減少排毒量，控制疫情的繼續(xù)發(fā)展，降低死淘損失。種豬每年免疫4次。商品豬一般多按照“0~70”模式，即初生滴鼻、70日齡左右肌注。每季度進(jìn)行一次疫苗抗體（gB）檢

104、測(cè)，對(duì)疫苗抗檢測(cè)陰性豬補(bǔ)注疫苗，以提高抗體水平。</p><p>　　7.4.4果斷淘汰檢測(cè)陽(yáng)性豬是凈化本病的關(guān)鍵</p><p>　　豬場(chǎng)偽狂犬凈化最大障礙是豬場(chǎng)存在患病豬只和隱性感染者。對(duì)于需要凈化的場(chǎng)，每年進(jìn)行3~4次野毒抗體各疫苗抗體檢測(cè)，抽樣檢測(cè)的方法為：種母豬按照10~15%比例，種公豬及后備種豬全部抽檢，商品豬按5~10%比例抽檢，有繁殖障礙的種豬全部抽檢。對(duì)檢測(cè)出野毒陽(yáng)性的

105、豬只，全部淘汰，疫苗抗體陰性豬重新免疫一次疫苗，再次檢測(cè)，合格者留下，不合格者淘汰。</p><p>　　綜上所述，嚴(yán)格的生物安全措施，嚴(yán)格控制引種，檢測(cè)和淘汰陽(yáng)性種豬、制訂科學(xué)的免疫程序，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，選用優(yōu)質(zhì)高效的疫苗免疫等是控制和凈化偽狂犬病的的必須考慮的。</p><p><b>　　8 凈化研究現(xiàn)狀</b></p><p>　　本病為

106、全球養(yǎng)豬業(yè)重要的傳染病之一，也是我國(guó)的二類傳染病。許多國(guó)家采取多種措施進(jìn)行防控，經(jīng)濟(jì)和養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家都投入巨大進(jìn)行凈化方案的研究與實(shí)施。20世紀(jì)初歐洲確診本病后，高度重視，20世界前半葉本病流行于東歐及巴爾干半島，20世紀(jì)后半葉，本病由于毒力增強(qiáng)在西歐多次爆發(fā)。由于當(dāng)時(shí)技術(shù)限制，較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)只有滅活疫苗，無(wú)法區(qū)分野毒與疫苗毒，對(duì)凈化無(wú)從下手。后來(lái)研制出基因缺失苗，才使凈化成為可能。</p><p>　　目前，現(xiàn)行

107、的主要商品化的偽狂犬疫苗為：基因缺失弱毒苗與滅活苗?；驕缁蠲缬捎谄浯_診的免疫效果，占很大的市場(chǎng)占有率，在歐美及我國(guó)應(yīng)用較多；滅活苗由于不存在排疫苗毒的問題，安全性相當(dāng)高，但其免疫效力次于弱毒苗[40]。一些國(guó)家和地方利用基因缺失苗成功地凈化了本病。</p><p>　　8.1 歐洲各國(guó)的凈化方案</p><p>　　各國(guó)采用的凈化方案都是結(jié)合自身國(guó)情，量身訂制的。英國(guó)采取的是撲殺與隔離、

108、嚴(yán)格執(zhí)行合群檢測(cè)來(lái)實(shí)施凈化，在上世紀(jì)80上代末成功凈化本病[41]，荷蘭、比利時(shí)等國(guó)也基本成功凈化了本病，1990年開始，法國(guó)政府強(qiáng)行在全國(guó)推行本病的凈化計(jì)劃，根據(jù)不同區(qū)域制訂不同的凈化策略，經(jīng)過近6年時(shí)間，54%豬場(chǎng)達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，其他豬場(chǎng)或區(qū)域豬群的感染率呈下降趨勢(shì)。</p><p>　　8.2 美國(guó)的凈化方案</p><p>　　從1998年開始，美國(guó)用15年時(shí)間成功凈化本病，采用的方

109、法為免疫基因工程缺失苗結(jié)合血清學(xué)檢測(cè)方法。凈化計(jì)劃主要分為五個(gè)階段：</p><p>　　第一階段：1989～1998年，建立實(shí)施根除偽狂犬病項(xiàng)目(Pseudorabies Eradication Program)。首先對(duì)豬群進(jìn)行偽狂犬病野毒檢測(cè)，確定是否作為凈化豬群，然后注射疫苗，再進(jìn)行野毒檢測(cè)，淘汰陽(yáng)性豬和建立陰性群。</p><p>　　第二階段：1999年至2001年，在第一階段基

110、礎(chǔ)上，全群撲殺陽(yáng)性豬群，防止本病的擴(kuò)散。</p><p>　　第三階段：強(qiáng)制撲殺確診感染豬,控制偽狂犬病的流行率在10%以下。</p><p>　　第四階段：禁止使用疫苗，執(zhí)行嚴(yán)格的監(jiān)控手段，達(dá)到12個(gè)月內(nèi)不出現(xiàn)新的感染豬群。</p><p>　　第五階段：維持野毒陰性群狀態(tài)。</p><p>　　8.3 國(guó)內(nèi)的凈化方案</p>

111、<p>　　我國(guó)偽狂犬病根除計(jì)劃由陳煥春[42]等人提出。通過ELISA方法檢測(cè)野毒抗體、淘汰陽(yáng)性豬只，重復(fù)免疫與檢測(cè)，配合基因缺失疫苗免疫，不斷重復(fù)免疫與檢測(cè)，最終達(dá)到凈化的目標(biāo)。任慶海[43]等人利用ELISA方法檢測(cè)野毒抗體，配合免疫gE基因缺失苗也成功對(duì)豬場(chǎng)實(shí)施了凈化。在經(jīng)過為期1年的的監(jiān)測(cè)和凈化工作成功將山東某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的核心豬群豬偽狂犬病病毒帶毒率由8.82%下降到3.23%，大幅度的提高了該場(chǎng)的生產(chǎn)水平和經(jīng)濟(jì)