豬健顆粒的研制及藥效毒性初步考察.pdf

1、在獸醫(yī)臨床上，豬、羊、牛、馬、犬等動物的消化系統(tǒng)疾病約占臨床總發(fā)病量的30％，而食欲不振、消化不良、便秘腹脹、瘤胃積食、胃腸弛緩等癥候，幾乎在動物的大部分疾病中伴發(fā)或繼發(fā)。對于該類癥候的處理，常選用氨甲酰膽堿、新斯的明等擬膽堿類西藥，但其毒性大、作用強烈。傳統(tǒng)的中獸醫(yī)對胃腸功能障礙的治療有著豐富的經(jīng)驗，且中獸藥藥源豐富、副作用小，運用中獸藥治療胃腸功能障礙性疾病已愈來愈受到重視。我國近幾年大力提倡與推動中藥現(xiàn)代化，其中一項重要內(nèi)容就是“

2、中藥制劑工藝研究，在傳統(tǒng)的湯、散、丸等劑型基礎(chǔ)上按西藥制劑原理增加新的劑型”。
　　 為此，我們從《中國獸藥典》(2005年版二部)中初選8種常用的健胃類中獸藥散劑，將其制備成相應(yīng)的顆粒劑，采用家兔離體腸管試驗，從8種顆粒劑中篩選出藥效作用相對于散劑最好的一種，將篩選出的顆粒劑作進一步的工藝、藥效、毒性等研究。本文分為五部分：
　　 第一部分，健胃類中獸藥處方篩選。本研究從《中國獸藥典》(2005年版二部)中初選8種常用

3、的健胃類中獸藥散劑，分別制備成顆粒劑，以家兔離體腸管為藥效篩選模型，篩選出藥效優(yōu)于散劑的顆粒劑。結(jié)果顯示，以龍膽草、蒼術(shù)、柴胡、干姜和碳酸氫鈉組成的豬健散所制備成的顆粒(暫命名為豬健顆粒，以下同)，能顯著增加腸管收縮張力，其藥效明顯優(yōu)于豬健散。為此，本文選取豬健顆粒作進一步的工藝、藥效、毒性和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等研究。
　　 第二部分，豬健顆粒單味藥提取工藝優(yōu)化及顆粒劑制備。(1)龍膽草有效成分的提取，以乙醇濃度、提取溫度、溶媒用量和提取

4、次數(shù)為考察因素，以龍膽苦苷的收率為指標(biāo)，結(jié)果最佳提取條件為：乙醇濃度為70％，提取溫度為80℃，溶媒用量為10倍，提取次數(shù)為3次；(2)蒼術(shù)有效組分的提取，以浸泡時間(h)、加水量(倍)和提取時間(h)為考察因素，以蒼術(shù)揮發(fā)油的收集量為指標(biāo)，結(jié)果蒼術(shù)揮發(fā)油的最佳提取條件為：浸泡時間12h，加水量10倍，提取時間為8h：(3)柴胡有效組分的提取，以浸泡時間(h)、加水量(倍)和提取時間(h)為考察因素，以柴胡揮發(fā)油的收集量為指標(biāo)，結(jié)果柴胡

5、揮發(fā)油的最佳提取條件為：浸泡時間12h，加水量10倍，提取時間為5h。
　　 豬健顆粒的制備：取干姜10g、碳酸氫鈉20g和提取后的龍膽草、蒼術(shù)和柴胡藥渣，依次加入8倍量、6倍量、4倍量的水煎煮2h，過濾，收集濾液，合并三濾液，濾液與上述蒼術(shù)、柴胡蒸餾后的水溶液合并，濾過。濾液加熱濃縮至約500ml，自然冷卻至室溫，分別加入濾液體積的40％、60％、80％乙醇，攪勻，靜置沉淀24h，濾過，收集濾液，將豬健散處方藥制成相對密度為1

6、.62的流浸膏。按流浸膏∶淀粉∶蔗糖(粉)=1:2:0.5的比例，混勻，制軟材；過50目篩(3號篩)制成濕顆粒；濕顆粒于55℃烘干18h，得干顆粒(水分含量控制在2.0％以內(nèi))；整粒分別過篩2次：第一次過14目篩，第二次過50目篩；蒼術(shù)和柴胡的揮發(fā)油用乙醇溶解后(揮發(fā)油∶乙醇=1:3)，均勻噴灑在整粒后的顆粒表面，適度混勻，陰干即得。工藝優(yōu)化前后豬健顆粒的藥效驗證：通過家兔離體腸管試驗，將工藝優(yōu)化前后的豬健顆粒進行藥效驗證，發(fā)現(xiàn)在相同濃

7、度下，工藝優(yōu)化的比未優(yōu)化的豬健顆粒藥效要好，如在0.1g/mL濃度下，工藝優(yōu)化后的顆粒對腸平均張力增率為0.765％，工藝優(yōu)化前的顆粒對腸平均張力增率為0.547％；在0.3g/mL濃度下，工藝優(yōu)化后的顆粒對腸平均張力增率為1.052％，工藝優(yōu)化前的顆粒對腸平均張力增率為0.826％；
　　 第三部分，豬健顆粒部分藥效試驗。(1)小腸推進試驗：散劑組按每只6.67g/kg、0.2mL/10g(體重)灌胃給藥，顆粒劑組按每只6.3

8、7g/kg、0.2mL/10g(體重)灌胃給藥，連續(xù)5日，禁食不禁水12h，于第6日給藥1h后，每只小鼠灌服炭末混懸液0.2mL，20min后處死，取出整個胃腸道，測量幽門至回盲部全長及幽門至炭末前沿的距離，計算炭末推進百分率。結(jié)果顯示，豬健顆粒促進小鼠胃腸蠕動作用優(yōu)于豬健散。(2)胃排空試驗：散劑組按每只6.67g/kg、0.2mL/10g(體重)灌胃給藥，顆粒劑組按每只6.37g/kg、0.2mL/10g(體重)灌胃給藥，連續(xù)5日。

9、禁食不禁水12h。于第6日給藥1h后，每只小鼠灌胃0.1％甲基橙溶液0.2mL。20min后處死，取胃內(nèi)容物用10mL蒸餾水稀釋后，用5％NaHCO3調(diào)pH至6.0～6.5，以2000r/min離心10min，取上清液在波長420nm下測定甲基橙光密度。以0.1％甲基橙溶液0.2mL加入10mL蒸餾水混勻后測其光密度作為基數(shù)甲基橙光密度。計算甲基橙胃殘留率。結(jié)果顯示，豬健顆粒對小鼠的胃排空作用優(yōu)于豬健散。
　　 第四部分，豬健顆

10、粒部分安全性試驗。(1)豬健顆粒急性毒性試驗：通過預(yù)試驗，一次給予小鼠灌胃豬健顆粒的最大濃度(7.06g/mL)和小鼠灌胃可承受的最大體積(0.4mL/10g)，每天給藥1次，連續(xù)灌胃14d，結(jié)果小鼠全部存活。因此，無法測出該顆粒的LD50，提示該顆粒是較安全的。進一步測定該顆粒對小鼠的最大耐受量：試驗組按每只小鼠0.4mL/10g的劑量灌胃7.06/mL濃度的豬健顆粒，按此劑量間隔6h灌胃1次，共灌胃3次，停止給藥，觀察小鼠狀態(tài)14d

11、；對照組用蒸餾水代替藥液，其灌胃體積、次數(shù)及間隔時間與試驗組同。結(jié)果顯示，在連續(xù)14d的觀察中，試驗組與對照組的小鼠均未出現(xiàn)抽搐、震顫等行為異常，呼吸、飲食正常、活動自如，給藥后14d未見死亡。豬健顆粒的小鼠最大給藥劑量為0.04mL/g×7.06g/mL×3×1000=847.2g/kg，相當(dāng)于獸藥典規(guī)定豬健散臨床最大給藥量6.67g/kg的127倍。(2)豬健顆粒長期毒性試驗：試驗組設(shè)高劑量組(266.80g/kg,臨床推薦劑量的4

12、0倍)、中劑量組(133.40g/kg，臨床推薦劑量的20倍)、低劑量組(66.70g/kg，臨床推薦劑量的10倍)，給藥容積10.0mL/kg體重，每天給藥1次，連續(xù)給藥60d；對照組用等體積蒸餾水代替藥液，其灌胃體積、次數(shù)與試驗組同。結(jié)果顯示，試驗組大鼠的一般情況檢查、血液學(xué)指標(biāo)和臟器系數(shù)各組與對照組相比均無顯著性差異(P＞0.05)，表明豬健顆粒無長期毒性。
　　 第五部分，豬健顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究。(1)一般檢查：對豬健