利用芝麻內(nèi)生細(xì)菌防治芝麻立枯病.pdf

1、由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)侵染芝麻引起的芝麻立枯病是一種嚴(yán)重的土傳病害，廣泛分布于我國(guó)各芝麻種植區(qū)。生產(chǎn)上控制該病害主要采用施用化學(xué)殺菌劑的方法，但對(duì)環(huán)境危害嚴(yán)重。目前，在尚缺乏有效抗病品種的情況下，利用內(nèi)生細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物對(duì)芝麻立枯病進(jìn)行生物防治，不僅能克服以上不足，而且具有防效穩(wěn)定、環(huán)保和安全等優(yōu)點(diǎn)。本研究以立枯絲核菌為靶標(biāo)菌，以從不同種植區(qū)芝麻苗根部分出的內(nèi)生細(xì)菌為研究對(duì)象，對(duì)內(nèi)生細(xì)菌的分離、生防細(xì)菌的篩

2、選、內(nèi)生細(xì)菌的定殖及內(nèi)生細(xì)菌的特性等進(jìn)行了初步的研究，篩選出對(duì)芝麻立枯病有生防效果的內(nèi)生菌。主要研究結(jié)果如下： 利用表面消毒涂布平板的方法，從大田72份不同品種健康芝麻苗根內(nèi)獲得內(nèi)生細(xì)菌399株，結(jié)果顯示，同一種植區(qū)不同芝麻品種中內(nèi)生菌的數(shù)量和種類存在差異；不同種植區(qū)同一芝麻品種中內(nèi)生菌的數(shù)量和種類存在差異。 通過(guò)平板對(duì)峙培養(yǎng)法，利用PDA、KBM和MYG等3種不同的培養(yǎng)基，以分離到的399株內(nèi)生細(xì)菌為出發(fā)菌株，篩選對(duì)立

3、枯絲核菌有拮抗性的菌株。結(jié)果在3種培養(yǎng)基上共獲得210株對(duì)立枯絲核菌(Rsolani)有拮抗性的菌株，占供試菌總數(shù)的52.6％。 溫室盆栽生防試驗(yàn)，初步建立了篩選芝麻立枯病拮抗菌的篩選體系，病原菌與土的添加比例為1:1000(W/W)。利用該體系，通過(guò)拌菌法活體篩選芝麻立枯病拮抗性菌株，以平板篩選出的210株菌為供試菌株，共獲得6株對(duì)芝麻立枯病有生防效果的拮抗菌株；編號(hào)分別為B16、b10、D31、e23、G10、110，其中菌

4、株G10的生防效果最高達(dá)52％。對(duì)菌株b10和G10進(jìn)行了田間小區(qū)生防試驗(yàn)，防效分別為31.8％和42.5％。 分別以殼聚糖(Chitosan)和幾丁質(zhì)(Chitin)作為唯一碳源，利用透明圈法測(cè)定了210株內(nèi)生細(xì)菌產(chǎn)殼聚糖酶(Chitosanase)和幾丁質(zhì)酶(Chitinase)的能力，結(jié)果顯示42株內(nèi)生細(xì)菌具有產(chǎn)殼聚糖酶的能力，5株菌具有產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的能力，分別占分離總數(shù)20％和2％；利用牛奶平板測(cè)定了拮抗菌產(chǎn)蛋白酶(Pro

5、lease)的情況，共165株產(chǎn)蛋白酶，占分離菌總數(shù)的78％。 對(duì)盆栽篩選出的6株生防菌的特性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示菌株G10有產(chǎn)殼聚糖酶的能力，I10有產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的能力，6株菌都具有產(chǎn)蛋白酶的能力；另外，測(cè)定了6個(gè)菌株在PDA平板上對(duì)于西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)，西瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)，小麥全蝕病菌(Gaeumannoyces grammis vat.trit

6、ici)，油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)等菌的抑制能力，結(jié)果顯示6株菌均表現(xiàn)出廣譜的抑菌活性；同時(shí)，對(duì)G10菌株進(jìn)行了KBM培養(yǎng)基液體搖瓶發(fā)酵，測(cè)定其發(fā)酵液中殼聚糖酶活，結(jié)果顯示，發(fā)酵24h時(shí)酶活最高達(dá)1.7U/mL活力單位。 通過(guò)水瓊脂法和灌根法兩種方式，利用膠體殼聚糖作為唯一碳源的選擇性培養(yǎng)基測(cè)定了G10菌株在芝麻根系內(nèi)部的定殖動(dòng)態(tài)，發(fā)現(xiàn)G10菌株在芝麻根部可以長(zhǎng)期定殖。分別利用培養(yǎng)特征、形