桃‘豫矮砧1號(hào)’矮化機(jī)理的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本研究以毛桃和其矮化變異后代豫矮砧1號(hào)不同生長(zhǎng)時(shí)期的葉片為材料，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)豫矮砧1號(hào)的矮化機(jī)理進(jìn)行研究，為闡明其矮化分子機(jī)理提供重要線索和依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下： ⑴利用改進(jìn)的O'Farrell雙向電泳體系探索適用于桃樹(shù)葉片蛋白質(zhì)的雙向電泳方法。通過(guò)比較兩種蛋白裂解液提取蛋白的效果，改進(jìn)雙向電泳參數(shù)，比較不同的蛋白上樣量，成功建立了桃葉片蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)，其樣品制備質(zhì)量好、蛋白質(zhì)斑點(diǎn)清晰、重復(fù)性高，完全適合進(jìn)一

2、步的蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 ⑵應(yīng)用建立的桃葉片蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)對(duì)豫矮砧1號(hào)和毛桃4個(gè)不同生長(zhǎng)時(shí)期的葉片蛋白進(jìn)行了分離，得到了兩種材料重復(fù)性較高的2-DE圖譜，并利用Image Master2D軟件對(duì)圖譜進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①在豫矮砧1號(hào)4月、6月、8月、9月葉片2-DE圖譜上分別檢測(cè)到781、638、621、516個(gè)蛋白點(diǎn)，在毛桃4月、6月、8月、9月材料2-DE圖譜上分別檢測(cè)到763、640、618、524個(gè)蛋白點(diǎn)，大多數(shù)蛋白點(diǎn)分

3、布在分子量（Mr）12～72KDa，等電點(diǎn)（pI）4～7之間。②通過(guò)對(duì)兩種材料不同時(shí)期2-DE凝膠中的蛋白點(diǎn)進(jìn)行散點(diǎn)圖分析發(fā)現(xiàn)，兩種材料8月、9月2-DE圖譜間的蛋白點(diǎn)相關(guān)系數(shù)較高，而4月、6月2-DE圖譜間的蛋白點(diǎn)相關(guān)系數(shù)相對(duì)較低。③經(jīng)Image Master軟件分析，在豫矮砧1號(hào)和毛桃4個(gè)不同生長(zhǎng)時(shí)期的2-DE圖譜中檢測(cè)出22個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中15個(gè)蛋白點(diǎn)在豫矮砧1號(hào)中特異表達(dá)，4個(gè)蛋白點(diǎn)在毛桃中特異表達(dá)，3個(gè)蛋白點(diǎn)的表達(dá)時(shí)期或表達(dá)

4、量在兩種材料間存在明顯差異。 ⑶從2-DE凝膠中切取20個(gè)差異蛋白，經(jīng)胰蛋白酶膠內(nèi)酶切，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOF-MS）進(jìn)行肽序列分析，獲得了這些蛋白點(diǎn)的一級(jí)質(zhì)譜（MS）和二級(jí)質(zhì)譜（MS/MS）數(shù)據(jù)后，通過(guò)MASCOT搜庫(kù)軟件檢索NCBInr（2008年11月）蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，共有18個(gè)蛋白點(diǎn)得到鑒定，分別對(duì)應(yīng)于以下13種蛋白質(zhì)：At1g17880/F2H15_10、高分子量熱激蛋白、1

5、，5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亞基、光系統(tǒng)Ⅱ放氧增強(qiáng)蛋白2、真核細(xì)胞起始因子iso4E、β-7微管蛋白、核小體組裝蛋白1類蛋白3、果糖二磷酸醛縮酶、At3g04620、光系統(tǒng)Ⅱ反應(yīng)中心PsbP家族蛋白、蛋白酶體β亞基前體6、甘氨酸脫氫酶（脫羧）、多酚氧化酶前體。這些蛋白質(zhì)參與光合作用、脅迫響應(yīng)、能量及氨基酸代謝、細(xì)胞周期調(diào)控及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)等一系列生化過(guò)程，并對(duì)這些蛋白質(zhì)在豫矮砧1號(hào)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中所起的作用以及今后應(yīng)繼續(xù)開(kāi)展的工作進(jìn)行了討