氰戊菊酯降解菌的篩選及其降解酶的初步純化.pdf

1、氰戊菊酯是一種應(yīng)用廣泛的擬除蟲菊酯類殺蟲劑，具有高效、廣譜、低毒和能生物降解等特性，但同時(shí)由于大量的使用必然造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。利用微生物或微生物酶制劑來降解殘留農(nóng)藥是近年來的一個(gè)主要研究方向。 本研究從長期受農(nóng)藥污染的農(nóng)田土壤中分離、篩選獲得一株能夠降解氰戊菊酯農(nóng)藥的細(xì)菌，命名為FDB。該菌顯微鏡觀察為桿狀，菌體較??；革蘭氏染色為陰性；在無機(jī)鹽培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)3d形成白色、扁平、表面光滑的菌落；在溫度25℃-35℃和pH5.0

2、-pH9.0范圍內(nèi)生長良好，最適生長溫度觀察值為35℃，最適生長pH觀察值為8.0。該菌能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸；能利用檸檬酸鹽，能液化明膠；不能利用淀粉；MR、V.P.試驗(yàn)陰性；接觸酶和氧化酶陽性。根據(jù)其形態(tài)特征、生理生化特征初步鑒定該菌株屬于假單胞菌屬(Pseudomonas)。 氰戊菊酯具有四個(gè)同分異構(gòu)體：SR、RS、SS、RR，本試驗(yàn)采用氣相色譜(FID檢測器)檢測到SR+RS總量和SS+RR總量的兩個(gè)峰。FDB菌在以氰戊菊酯農(nóng)

3、藥為唯一碳源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，3d后對氰戊菊酯異構(gòu)體的降解率分別為42.25％(SR+RS)、40.67％(SS+RR)，繼續(xù)培養(yǎng)5d后降解率分別為69.06％、64.32％。 提取FDB菌的胞內(nèi)粗酶液，經(jīng)硫酸銨沉淀，DEAE-Sepharose Q Fast Flow陰離子交換柱層析，Sephacryl S-100凝膠層析，最后所得氰戊菊酯降解酶FDE相對于粗酶液純化了16.71倍，比活力為1.60 U·mg-1，經(jīng)SDS-P