雙價抗蟲轉基因水稻的育成和鑒定.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物之一，隨著人口的增加和耕地面積的減少，進一步提高水稻產量有極其重要的意義。蟲害是限制水稻增產的主要原因之一，利用轉基因技術培育抗蟲水稻可以有效解決水稻蟲害問題。近年來，水稻抗蟲基因工程取得了很大的進展，相繼獲得了一系列抗蟲基因工程植株。但隨著抗蟲轉基因植物的大規(guī)模種植，抗蟲譜相對狹窄及害蟲易產生抗性等問題也越來越受到人們的關注。因此，轉雙價或多價抗蟲基因植物成為植物抗蟲基因工程研究的熱點之一。
　　

2、本論文主要包括如下工作：
　　 1.采用根癌農桿菌介導法將兩個抗蟲基因sbk和sck轉入水稻品種Dular中。通過常規(guī)PCR檢測，獲得18份去選擇標記的轉基因陽性植株。Southern雜交分析結果表明，其中15份為單拷貝插入。對這15份單拷貝轉基因植株進行RT-PCR分析，結果表明，抗蟲基因都能正常表達。同時利用Dular本身的廣親和基因(S5-n)標記和抗條紋葉枯病基因(qSTV-11b和qSTV-11c)標記進行分子檢測，結

3、果表明，這15份單拷貝轉基因植株都具有廣親和基因和抗條紋基因的特征帶；與不同秈稻及粳稻配組，雜種目的結實率和條紋葉枯病及抗蟲性在田間自然發(fā)病狀況下的調查結果表明，這些單拷貝植株不但保留了廣親和性與抗水稻條紋葉枯病能力，而且抗螟蟲能力顯著提高。將抗蟲基因與廣親和基因及抗條紋葉枯病基因聚合在一起，為抗病蟲雜交稻育種提供資源基礎。
　　 2.用含有雙價抗蟲質粒的農桿菌感染南粳45的愈傷組織，再生獲得植株，通過對56個再生植株的PCR分

4、析，篩選到去選擇標記且具有雙價抗蟲基因的陽性單株42株。通過Southern雜交分析，發(fā)現(xiàn)其中38株為單拷貝插入，3株為2個拷貝，1株為3個拷貝。對單拷貝的單株進行RT-PCR、Bt基因檢測試紙條鑒定表明，外源基因能正常表達。人工接蟲結果也表明，轉基因株對螟蟲的毒殺效果達97％-100％。通過轉入sbk和sck雙價抗蟲基因，大大提高了南粳45的抗蟲能力。篩選出T45-2、T45-11和T45-14優(yōu)良株系。不但為粳稻抗蟲育種提供了有利資