煙草赤星病菌的抗藥性及替代藥劑的研究.pdf

1、赤星病是重要的煙草葉部病害，主要由交鏈格孢菌(Alternaria alternata)引起。目前，生產(chǎn)上的防治藥劑主要為二甲酰亞胺類等傳統(tǒng)的保護(hù)性殺菌劑。本研究檢測了采集自貴州福泉和興義兩地的煙草赤星病菌對常見殺菌劑的抗藥性，并研究了其對新型殺菌劑的敏感性，以為其科學(xué)防治提供依據(jù)。
　　采用區(qū)分劑量法測定了煙草赤星病菌對甲基硫菌靈和腐霉利的抗藥性，并對甲基硫菌靈的靶標(biāo)基因β-Tubulin進(jìn)行了擴(kuò)增和比較。結(jié)果顯示，所有菌株(n

2、=128)均對甲基硫菌靈表現(xiàn)耐藥性，β-Tubulin氨基酸序列第167位氨基酸為酪氨酸，這是赤星病菌對甲基硫菌靈表現(xiàn)耐藥性的主要原因。共檢測到9株對腐霉利表現(xiàn)低水平抗性的菌株，總的抗藥性頻率為8.3％。
　　評估了嘧菌酯對煙草赤星病菌的生物活性。結(jié)果無旁路氧化酶抑制劑水楊肟酸(SHAM)協(xié)同作用下，嘧菌酯抑制煙草赤星病菌菌絲生長的活性很低，但抑制孢子萌發(fā)的活性較高，平均EC50值分別為130.545μg/mL和10.556μg/

3、mL。當(dāng)有100μg/mL的SHAM時，嘧菌酯抑制煙草赤星病菌菌絲生長和孢子萌發(fā)的平均EC50值分別為17.760μg/mL和0.140μg/mL。采用離體葉片法測定了嘧菌酯對煙草赤星病菌的保護(hù)和治療作用。結(jié)果表明：提前0h、12h和24h施藥，嘧菌酯對煙草赤星病菌病斑組織擴(kuò)展抑制作用的EC50值分別為0.118、0.084和0.001μg/mL，嘧菌酯濃度為1μg/mL以上，煙草赤星病菌在煙草葉片上未能形成肉眼可見的病斑。接種48h后

4、施藥，嘧菌酯對抑制煙草赤星病菌病斑擴(kuò)展的EC50值為0.180μg/mL。測定了煙草赤星病菌群體(n=95)菌絲生長對嘧菌酯的敏感性(-SHAM)，結(jié)果顯示所有菌株的EC50值均＞5μg/mL，且74.7%的菌株的EC50值＞100μg/mL。測定了煙草赤星病菌群體(n=33)分生孢子萌發(fā)對嘧菌酯的敏感性(+SHAM)，結(jié)果顯示EC50范圍為0.004~2.416μg/mL，平均EC50為0.230±0.470μg/mL。
　　采

5、用菌絲生長速率法測定了煙草赤星病菌(n=102)對啶酰菌胺的敏感性。并對啶酰菌胺表現(xiàn)敏感和敏感性最低的12個菌株的琥珀酸脫氫酶亞基(Sdh B)基因進(jìn)行擴(kuò)增和比對分析。結(jié)果顯示：啶酰菌胺抑制煙草赤星病菌菌絲生長的EC50值在0.186~5.818μg/mL之間，平均為2.157±1.112μg/mL。分析顯示兩地菌株對啶酰菌胺的敏感性差異極顯著(p＜0.01)。所測Sdh B基因序列分析顯示，部分敏感菌株，在第224位和第226位氨基酸

6、分別出現(xiàn)C224R/G和S226P的替換。
　　進(jìn)一步進(jìn)行了煙草赤星病菌復(fù)配藥劑的篩選，結(jié)果顯示，不同比例吡唑醚菌酯：啶酰菌胺復(fù)配，除7:1比例復(fù)配混劑對豇豆黑斑病菌無增效作用外，其余不同比例復(fù)配對抑制鏈格孢菌孢子萌發(fā)均有增效作用。其中吡唑醚菌酯：啶酰菌胺按7:1比例復(fù)配，對煙草赤星病菌孢子萌發(fā)的抑制效果最佳。吡唑醚菌酯：抑霉唑按不同比例復(fù)配對抑制鏈格孢菌菌絲生長均具有增效作用，其中1:7的復(fù)配比例對煙草赤星病菌菌絲生長的抑制效果