2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、水稻是單子葉模式植物,同時(shí)也是世界上重要的糧食作物。水稻植株在其生長(zhǎng)發(fā)育過程中受到多種外部脅迫,如病原物感染,干旱脅迫等多種生物和非生物脅迫;這些脅迫信號(hào)被植物接受,并通過信號(hào)網(wǎng)絡(luò)傳遞,最后引起細(xì)胞乃至組織的脅迫反應(yīng)。促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)作為絲/蘇氨酸類蛋白激酶在真核生物中廣泛存在,在植物生長(zhǎng)發(fā)育及生物非生物脅迫中發(fā)揮重要功能。由MAPK-MAPKK-MAP

2、KKK組成級(jí)聯(lián)系統(tǒng),MAPK類激酶在細(xì)胞中主要通過特異的磷酸化機(jī)制以實(shí)現(xiàn)其功能。MAPKK作為特異的絲/蘇氨酸激酶,在級(jí)聯(lián)途徑中起到十分重要的作用,將信號(hào)從上游MAPK傳遞到下游MAPKKK,使其發(fā)揮作用激活下游反應(yīng)。 本研究從表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)和cDNA的數(shù)據(jù)比對(duì)搜尋到水稻OsMKK家族,克隆了六個(gè)水稻促分裂原活化蛋白激酶激酶((mitogen-activated protein kinases kinases,MAPKK

3、)基因。使用ClustalX對(duì)MAPKK家族的預(yù)測(cè)氨基酸序列進(jìn)行了比對(duì)分析,并調(diào)查標(biāo)記其中11個(gè)主要的結(jié)構(gòu)域,其中特異的絲/蘇氨酸(T/SXXXXXS/T)結(jié)構(gòu)位于第七和第八結(jié)構(gòu)域之間。并根據(jù)預(yù)測(cè)的氨基酸序列繪制了系統(tǒng)進(jìn)化樹。同時(shí)發(fā)現(xiàn)克隆的六個(gè)基因分屬于不同的亞族,其中OsMKK1和OsMKK6屬于A亞族,OsMKK4和OsMKK5屬于C亞族,OsMKK9和OsMKK10-2屬于D亞族。 構(gòu)建了超表達(dá)載體,其中OsMKK1和Os

4、MKK6連接到pCAMBIA1304載體中,通過把載體中的GUS基因通過酶切去除,用目的基因取代以后在CaMV35S強(qiáng)啟動(dòng)子后超量表達(dá)。在相同的原理下將OsMKK4,OsMKK5,OsMKK9連接到pCAMBIA1323載體,OsMKK10-2連接到pCAMBIA1321載體中。把其中的五個(gè)導(dǎo)入農(nóng)桿菌,并成功轉(zhuǎn)化水稻,獲得了T0代轉(zhuǎn)基因植株。對(duì)T0代植株進(jìn)行高通量快速的轉(zhuǎn)基因檢測(cè),使用快速PCR的方法,結(jié)合潮霉素浸泡葉片,檢測(cè)轉(zhuǎn)基因陽性

5、植株。 對(duì)獲得的陽性轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行研究分析,利用嵌入法接種紋枯病,檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株的抗病性,并統(tǒng)計(jì)形成病斑的長(zhǎng)度,OsMKK3和OsMKK6對(duì)紋枯病表現(xiàn)出一定抗性,而OsMKK10-2則與對(duì)照無顯著性差異。同時(shí)利用指甲油影印法觀察轉(zhuǎn)基因植株的氣孔,與對(duì)照相比轉(zhuǎn)基因植株的氣孔數(shù)量變小,葉表面維管束發(fā)達(dá),表明轉(zhuǎn)基因植株的生長(zhǎng)發(fā)育發(fā)生受到一定影響。另外還檢測(cè)了轉(zhuǎn)基因植株離體葉片的失水速率,結(jié)合葉表面觀察結(jié)果,不同的轉(zhuǎn)基因株系失水速率有一

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