青島流清河灣扇貝養(yǎng)殖籠大型污損生物的掛板調(diào)查和櫛孔扇貝(Chlamys farreri)卵黃蛋白原基因cDNA全長(zhǎng)的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、海洋環(huán)境中，具有附著生長(zhǎng)習(xí)性的生物如藻類、海綿、水螅、藤壺、苔蘚蟲、貝類、海鞘等，經(jīng)常出現(xiàn)在船舶、浮筏、網(wǎng)籠、網(wǎng)箱及其它海中設(shè)施的表面上，給人類的生產(chǎn)和生活造成不利影響，故將這些生物稱為海洋污損生物(marinefoulingorganisms)。它產(chǎn)生的危害不可小覷，尤其在水產(chǎn)業(yè)中，海洋污損生物會(huì)影響?zhàn)B殖物種的正常生長(zhǎng)，甚至造成大量死亡，還會(huì)加速養(yǎng)殖設(shè)施的老化，所以有必要對(duì)其進(jìn)行廣泛而深入的研究。 2006年9月～2007年8

2、月，作者于青島流清河灣扇貝養(yǎng)殖籠上進(jìn)行了周年污損生物的人工掛板實(shí)驗(yàn)，共記錄大型污損生物65種，優(yōu)勢(shì)種有：石莼、緣管滸苔、多管藻、太平洋牡蠣、紫貽貝、大室膜孔苔蟲、莫氏二段海鞘。主要附著期在5～11月，月板最大濕重出現(xiàn)在9月，為637.46g/m2；季板最大濕重出現(xiàn)在秋季，為3121.28g/m2；半年板最大濕重出現(xiàn)在下半年(9～2月)，為5924.57g/m2；年板濕重為3551.58g/m2。從污損生物種類的垂直分布看，表層板以藻類、

3、端足類為主，底層板以雙殼類、海鞘等污損動(dòng)物為主；從全年的物種多樣性變化看，夏、秋季物種數(shù)多于冬、春季，秋季群落的均勻程度低于其它三季。本文還探討了下水季節(jié)、周期及物種依賴關(guān)系對(duì)污損生物群落的影響，初步擬出一年周期里污損生物群落的演替過(guò)程，認(rèn)為微生物粘膜形成后，污損生物群落開(kāi)始步入中期階段并繼續(xù)發(fā)展，它歷經(jīng)貝類、藻類、端足類、水螅等生物的相繼出現(xiàn)與消亡，在年板上形成以紫貽貝為優(yōu)勢(shì)的復(fù)雜群落，但該群落還未達(dá)到最終的穩(wěn)定階段。 卵黃蛋

4、白原(vitellogenin，VTG)是卵黃蛋白(vitellin，VT)的前體，一直以來(lái)備受人們的關(guān)注。對(duì)于卵生動(dòng)物來(lái)說(shuō)，卵黃物質(zhì)的形成與積累是卵子發(fā)生過(guò)程中的重要事件。卵黃蛋白是卵黃物質(zhì)的最主要成分，為卵母細(xì)胞和胚胎的發(fā)育提供了大量營(yíng)養(yǎng)，行使著重要的生物學(xué)功能，因此作為卵黃蛋白前體的卵黃蛋白原，具有很高的科研價(jià)值，并且在脊椎動(dòng)物、昆蟲、甲殼動(dòng)物中，業(yè)已得到廣泛而深入的研究。然而在軟體動(dòng)物中，相關(guān)的研究還顯不足，尤其是對(duì)卵黃蛋白原的

5、來(lái)源仍存在爭(zhēng)議。本研究選取我國(guó)重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)物種，櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)為研究對(duì)象，采用同源克隆的策略和cDNA末端快速擴(kuò)增(rapid-amplificationofcDNAends，RACE)技術(shù)獲得了櫛孔扇貝Cf-vtg全長(zhǎng)cDNA序列，對(duì)其序列特征進(jìn)行了分析，同時(shí)借助半定量RT-PCR和原位雜交技術(shù)研究了Cf-vtg基因的時(shí)空表達(dá)情況，并最終確定了Cf-vtg基因在成體櫛孔扇貝中的表達(dá)位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)最后，還對(duì)外源的

6、雌激素對(duì)Cf-vtg基因的誘導(dǎo)作用進(jìn)行了初步探索。 克隆得到的Cf-vtg基因cDNA序列全長(zhǎng)7604bp，開(kāi)放閱讀框(openreadingframe，ORF)長(zhǎng)6888bp，編碼2296個(gè)氨基酸殘基。存在一個(gè)被類枯草桿菌內(nèi)切蛋白酶(subtilisin-likeendoproteases)識(shí)別的R-X-R/K-R序列。由該基因推導(dǎo)的櫛孔扇貝VTG一級(jí)結(jié)構(gòu)與蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)VTG的相似性

7、最高，達(dá)89％，與其它軟體動(dòng)物、魚類、甲殼動(dòng)物和線蟲等的VTG也均表現(xiàn)出相似性，尤其在N-末端。 半定量RT-PCR分析顯示，Cf-vtg基因主要在卵巢表達(dá)，肝胰腺有微弱表達(dá)，精巢和其它組織均無(wú)表達(dá)，并且Cf-vtg基因表達(dá)量隨著卵巢的成熟而逐漸降低。原位雜交結(jié)果表明陽(yáng)性信號(hào)定位在卵母細(xì)胞周圍的濾泡細(xì)胞中，但在肝胰腺中沒(méi)有檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào)產(chǎn)生。故此我們得出結(jié)論櫛孔扇貝卵巢的濾泡細(xì)胞是Cf-vtg基因的表達(dá)位點(diǎn)。至于在肝胰腺RT-P