球孢蟲草(Cordyceps bassiana)生物學特性及活性成分研究.pdf

1、本文以球孢蟲草為實驗材料，利用菌種分離技術(shù)、PCR、高效液相色譜等技術(shù)和化學手段，對球孢蟲草的生物學特性和化學成分進行了研究，主要包括以下內(nèi)容：球孢蟲草無型性確定和生活史驗證，液體深層發(fā)酵條件及人工栽培條件優(yōu)化，球孢蟲草中蛋白質(zhì)、氨基酸、甘露醇、多糖和核苷類物質(zhì)的研究及多糖和小分子物質(zhì)的活性測定。研究結(jié)果如下： 1.球孢蟲草無型性確定和生活史驗證：采用形態(tài)學鑒定和分子生物學鑒定相結(jié)合，確定了球孢蟲草的無型性為球孢白僵菌。在此基礎

2、上對球孢白僵菌進行了生活史驗證，從而有力的證明了球孢蟲草與球孢白僵菌是同一物種的不同生長階段，球孢蟲草是有型性，而球孢白僵菌為無型性。 2.液體深層發(fā)酵條件及人工栽培條件優(yōu)化：以EPS和菌絲體生物量為指標，由單因素實驗和正交實驗確定了該菌株液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基的組成為：蔗糖25‰、蛋白胨39‰，(NH4)2SO41.5‰、K2HPO41.5‰、MgSO40.5‰；由單因素實驗確定了液體發(fā)酵條件為：初始pH7.0、溫度26℃、裝液量

3、75mL/250mL、接種量5％、培養(yǎng)時間3d。在最佳的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，該菌株產(chǎn)EPS量高達1.8279/L，菌絲體生物量達2.1359/100mL。 以子實體質(zhì)量和產(chǎn)量為指標，由單因素實驗和正交實驗，確定了人工栽培的最佳條件為：麥粒為原料，含水量70％，培養(yǎng)溫度22～24℃，PH值7.0。 3.活性成分分析：研究發(fā)現(xiàn)，球孢蟲草子座和菌絲體中蛋白質(zhì)含量分別為：35.32％、24.05％，低于野生冬蟲夏草，但氨基酸含量

4、高于冬蟲夏草，分別為25.96％、16.51％；球孢蟲草菌絲體中甘露醇含量高達12.05％，高于子座和野生冬蟲夏草。 采用GC和HPLC分別測定了球孢蟲草多糖的單糖組成和核苷類物質(zhì)的含量及組成，結(jié)果表明，球孢蟲草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖組成，摩爾比是1.2:1.0；胞內(nèi)多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖組成，摩爾比為5.4:4.0:1.0。球孢蟲草子座與發(fā)酵菌絲體中均含有鳥苷、腺苷和尿苷三種成分，且發(fā)酵菌絲體中三者

5、的含量高于子座及野生冬蟲夏草。通過五種活性成分測定，為綜合評價球孢蟲草內(nèi)在品質(zhì)和開發(fā)球孢蟲草提供了科學依據(jù)。 4.活性測定：通過對多糖體外抗氧化活性研究發(fā)現(xiàn)：IPS具有清除DPPH·、·OH、·O2－和螯合Fe2+的作用，有強的還原力；EPS僅可以清除·OH，螯合Fe2+，對DPPH·和·O2－均沒有清除作用，也沒有還原力。IPS和EPS對革蘭氏陽性菌的抑菌效果較好，對革蘭氏陰性菌基本沒有抑菌作用；乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對