砂梨分子遺傳圖譜的構建及其果皮色澤性狀的定位分析.pdf

1、梨分子遺傳圖譜的構建和農藝性狀的基因定位對于挖掘梨基因資源，促進梨分子輔助育種有重要意義。本文首先利用NCBI的GenBank數據庫和GDR數據庫中梨EST序列篩選SSR序列用于開發(fā)砂梨SSR引物；并用這些引物對砂梨‘西子綠×喜水’F1群體遺傳多樣性進行分析；再應用“雙假測交理論”（Double pseudo-testcross），利用砂梨雜交F1代群體（西子綠×喜水）構建砂梨基于SSR、EST-SSR和RAPD等3種分子標記的遺傳連鎖

2、圖譜；最后利用BSA法篩選控制砂梨褐皮性狀的分子標記，并對其進行了基因定位分析。主要的結果如下：
　　 1、利用NCBI的GenBank數據庫和GDR數據庫中梨EST序列，篩選到60個SSR序列，分布于54條EST中，其中二核苷酸重復基元出現頻率最高達51.7％，三核苷酸重復基元占25％，六核苷酸重復基元最低，僅為1.7％。23種重復基序中AT重復基序出現頻率最高。根據54條含SSR序列的EST設計25對EST-SSR引物，其中

3、14對引物在‘西子綠×喜水’F1雜交群體中獲得有效擴增，9對引物呈現多態(tài)性，多態(tài)性引物占設計引物的36％。這些引物在F1群體中擴增產物的等位基因數（No）平均為2，有效等位基因數（Ne）平均為1.9324，平均雜合度觀察值（Ho）和期望雜合度（He）分別為1和0.4809.
　　 2、以‘西子綠×喜水’的F1代群體為試材，對SSR、EST-SSR和RAPD標記在F1代群體中分離方式及分離比例進行了分析。結果表明：在P=0.01水

4、平上，SSR標記呈孟德爾分離和偏孟德爾分離的頻率分別為91.8％和8.2％；EST-SSR標記呈孟德爾分離、偏孟德爾分離和異常分離的頻率分別為66.7％、22.2％和11.1％；RAPD標記呈孟德爾分離與偏孟德爾分離的頻率分別為94.5％和5.5％.采用JoinMap3.0軟件，對120對SSR引物、9對EST-SSR引物和45條RAPD引物擴增所得的有效標記位點進行連鎖分析，構建了‘西子綠×喜水’的分子遺傳圖譜，含有162個分子標記，

5、其中SSR標記53個、EST-SSR標記2個、RAPD標記107個，分屬19個連鎖群（LG1-LG19），連鎖群LOD值在2.0～8.0之間，總長度覆蓋梨基因組901 cM，標記間平均距離為5.63 cM，圖譜覆蓋率為56.8％.
　　 3、采用SSR標記篩選與砂梨果皮色澤性狀相連鎖的分子標記，從120對多態(tài)性SSR引物中篩選出CH05g02和NH015b在DNA池間存在差異；經后代群體驗證和遺傳連鎖分析證實，CH05g02位點