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文檔簡介
1、梨分子遺傳圖譜的構建和農藝性狀的基因定位對于挖掘梨基因資源,促進梨分子輔助育種有重要意義。本文首先利用NCBI的GenBank數據庫和GDR數據庫中梨EST序列篩選SSR序列用于開發(fā)砂梨SSR引物;并用這些引物對砂梨‘西子綠×喜水’F1群體遺傳多樣性進行分析;再應用“雙假測交理論”(Double pseudo-testcross),利用砂梨雜交F1代群體(西子綠×喜水)構建砂梨基于SSR、EST-SSR和RAPD等3種分子標記的遺傳連鎖
2、圖譜;最后利用BSA法篩選控制砂梨褐皮性狀的分子標記,并對其進行了基因定位分析。主要的結果如下:
1、利用NCBI的GenBank數據庫和GDR數據庫中梨EST序列,篩選到60個SSR序列,分布于54條EST中,其中二核苷酸重復基元出現頻率最高達51.7%,三核苷酸重復基元占25%,六核苷酸重復基元最低,僅為1.7%。23種重復基序中AT重復基序出現頻率最高。根據54條含SSR序列的EST設計25對EST-SSR引物,其中
3、14對引物在‘西子綠×喜水’F1雜交群體中獲得有效擴增,9對引物呈現多態(tài)性,多態(tài)性引物占設計引物的36%。這些引物在F1群體中擴增產物的等位基因數(No)平均為2,有效等位基因數(Ne)平均為1.9324,平均雜合度觀察值(Ho)和期望雜合度(He)分別為1和0.4809.
2、以‘西子綠×喜水’的F1代群體為試材,對SSR、EST-SSR和RAPD標記在F1代群體中分離方式及分離比例進行了分析。結果表明:在P=0.01水
4、平上,SSR標記呈孟德爾分離和偏孟德爾分離的頻率分別為91.8%和8.2%;EST-SSR標記呈孟德爾分離、偏孟德爾分離和異常分離的頻率分別為66.7%、22.2%和11.1%;RAPD標記呈孟德爾分離與偏孟德爾分離的頻率分別為94.5%和5.5%.采用JoinMap3.0軟件,對120對SSR引物、9對EST-SSR引物和45條RAPD引物擴增所得的有效標記位點進行連鎖分析,構建了‘西子綠×喜水’的分子遺傳圖譜,含有162個分子標記,
5、其中SSR標記53個、EST-SSR標記2個、RAPD標記107個,分屬19個連鎖群(LG1-LG19),連鎖群LOD值在2.0~8.0之間,總長度覆蓋梨基因組901 cM,標記間平均距離為5.63 cM,圖譜覆蓋率為56.8%.
3、采用SSR標記篩選與砂梨果皮色澤性狀相連鎖的分子標記,從120對多態(tài)性SSR引物中篩選出CH05g02和NH015b在DNA池間存在差異;經后代群體驗證和遺傳連鎖分析證實,CH05g02位點
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