倏逝波光纖免疫傳感器BTV抗體檢測方法的建立.pdf

1、藍(lán)舌病作為一種世界動物衛(wèi)生組織(OIE)必須上報的烈性動物傳染病，主要危害牛、羊等家畜，在世界范圍內(nèi)廣泛流行。國際組織和各國政府均將藍(lán)舌病列為動物疫病監(jiān)測和防控的重點，對動物和動物制品國際間貿(mào)易具有非常重要的影響。目前，世界各國尚無有效的藍(lán)舌病疫苗和防治措施，只能以免疫監(jiān)測為主，因此，建立一種快速、靈敏、方便、特異性強的BTV檢測方法就變得尤為重要。
　　 倏逝波光纖免疫傳感器是將倏逝波原理、熒光免疫分析原理及光纖檢測結(jié)合于一體

2、的檢測裝置，具有特異性強、靈敏度高、檢測速度快、操作簡便等優(yōu)點。因此，在爆炸性物品檢測、環(huán)境監(jiān)測、毒品和濫用藥品檢測、臨床疾病監(jiān)測、食品衛(wèi)生監(jiān)測及生物學(xué)檢測等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本研究利用BTV VP7單克隆抗體和BTV VP7蛋白(均為本實驗室制備)，進(jìn)行BTV抗體倏逝波光纖免疫傳感器檢測方法的研究。用BTV VP7蛋白作為光纖包被抗原，VP7單克隆抗體作為檢測樣品，Cy3標(biāo)記的羊抗鼠。IgG抗體作為檢測二抗，進(jìn)行

3、BTV抗體倏逝波光纖免疫傳感器檢測方法的建立。本研究借鑒ELISA常用的棋盤法，對光纖包被VP7蛋白濃度和Cy3標(biāo)記抗體濃度進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果證實VP7蛋白最佳包被濃度為150μg/ml，Cy3標(biāo)記抗體的最佳實驗濃度為20μg/ml。經(jīng)過初步優(yōu)化，得到的VP7單克隆抗體檢測下限為10 ng/ml。另外，在實驗后期對檢測步驟進(jìn)行了優(yōu)化，將原來的兩步法改為一步法，不僅簡化了檢測步驟，還縮短了檢測時間，使此檢測方法更加簡便、迅速。
　　

4、在倏逝波光纖免疫傳感器檢測實驗中，光纖再生問題一直難以解決。本研究用甘氨酸-HCl緩沖液(pH2.0)、TEA溶液(pH11.5)和0.5％的SDS(pH1.9)溶液進(jìn)行光纖的再生，結(jié)果顯示TEA溶液(pH11.5)的再生效果最好，可以再生至少10個循環(huán)；甘氨酸-HCl緩沖液(pH2.0)可以再生6個循環(huán)；而0.5％的SDS(pH1.9)溶液只能再生2個循環(huán)。因此，在本實驗中選用TEA溶液作為光纖再生液。
　　 最后，將此檢測方