麻瘋樹(shù)遺傳多樣性的ISSR和SRAP分析.pdf

1、麻瘋樹(shù)（Jatropha curcas L.）隸屬于大戟科（Euphorbiaceae）麻瘋樹(shù)屬（Jatropha L.），多灌木，是一種具有多種用途的植物。因其種子含油量高、可以提煉生物柴油、能替代石化燃料這一重要經(jīng)濟(jì)特性，人們對(duì)這種應(yīng)用潛能巨大的油料作物越來(lái)越關(guān)注。本研究以13個(gè)居群的麻瘋樹(shù)植物為實(shí)驗(yàn)材料，在完成供試材料DNA提取的基礎(chǔ)上，對(duì)ISSR、SRAP-PCR反應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，用篩選出的多態(tài)較性好的13條ISSR引物和12對(duì)SR

2、AP引物對(duì)麻瘋樹(shù)材料進(jìn)行ISSR和SRAP分子標(biāo)記評(píng)價(jià)其遺傳多樣性，按Nei的方法計(jì)算其相似系數(shù)，并對(duì)13個(gè)居群的麻瘋樹(shù)材料進(jìn)行聚類(lèi)分析。結(jié)果如下：
　　1.用改良CTAB法提取的DNA質(zhì)量和純度都較高，符合實(shí)驗(yàn)要求。
　　2.用正交優(yōu)化設(shè)計(jì)確定了對(duì)PCR反應(yīng)體系影響較大的三個(gè)的因子（引物濃度、dNTPs濃度和Mg2+濃度），并對(duì)這三個(gè)因子進(jìn)行單因素試驗(yàn)，最終確定ISSR-PCR反應(yīng)體系：模板DNA40ng，Taq酶0.5U

3、，引物0.4μmol/L，dNTPs150μmol/L，Mg2+2.5mmol/L,1XBuffer。SRAP-PCR反應(yīng)體系：DNA60ngTaq酶0.5U，引物0.4μmol/L，dNTPs150μmol/L，Mg2+2.5mmol/L,1XBuffer。
　　3.ISSR標(biāo)記結(jié)果：13條ISSR引物共擴(kuò)增出158個(gè)標(biāo)記，其中多態(tài)性標(biāo)記149個(gè)，多態(tài)帶百分率為94.30％，麻瘋樹(shù)無(wú)論在物種水平（PPB=94.30％，Ht=0.

4、3834,I=0.5531）還是在群體水平（PPB=61.59％,h=0.2759,I=0.3931）都表現(xiàn)出較高的遺傳多樣性。群體間分化巨大（Gst=0.2803），分子方差（AMOVA）分析表明，本研究中麻瘋樹(shù)居群間和居群內(nèi)的差異均達(dá)到極顯著水平（P<0.001）,在總的遺傳變異中有31.52％來(lái)自居群間，68.48％的變異發(fā)生在居群內(nèi)，遺傳變異主要存在于居群內(nèi)個(gè)體間。居群間有一定的基因流（Nm=1.2836）。基于Nei遺傳相似系

5、數(shù)聚類(lèi)，結(jié)果將13個(gè)居群分為三大類(lèi)。雙柏和隆林居群各自聚為一類(lèi)，其他11個(gè)居群聚成第三類(lèi)。
　　4.SRAP標(biāo)記結(jié)果：12對(duì)引物組合共檢測(cè)到361個(gè)標(biāo)記，多態(tài)性標(biāo)記為351個(gè)，多態(tài)帶百分比為97.23％。物種水平上，平均觀測(cè)等位基因數(shù)1.9723，平均有效等位基因數(shù)1.7925，Nei’s基因多樣性指數(shù)0.4365，Shannon信息指數(shù)0.6267。居群水平上，上述各項(xiàng)參數(shù)的值分別為1.7746、1.6133、0.3366、0.

6、4831。Gst為0.2320，居群間的變異占總變異的23.20％，居群內(nèi)變異是麻瘋樹(shù)遺傳多樣性的主要來(lái)源?；蛄鱊m為1.6555，說(shuō)明麻瘋樹(shù)居群間存在著一定的基因交流，防止了由于遺傳漂變導(dǎo)致的居群之間的遺傳分化。聚類(lèi)結(jié)果顯示，13個(gè)居群可以聚為三支。首先遺傳相似系數(shù)最大的會(huì)東和會(huì)理先聚在一起，然后與德昌、金陽(yáng)、鹽源、米易聚在一起，最后再與永勝一起聚成第一類(lèi)。羅甸、貞豐、望謨、冊(cè)亨和雙柏聚成第二類(lèi)。隆林居群?jiǎn)为?dú)聚成第三類(lèi)。
　　

7、5.居群間遺傳多樣性有較大差異，達(dá)顯著水平。兩種標(biāo)記均顯示永勝居群遺傳多樣性最大。雖然ISSR和SRAP兩種標(biāo)記所檢測(cè)的遺傳多樣性參數(shù)不同，聚類(lèi)分析的結(jié)果也有所差異，但對(duì)兩種方法進(jìn)行的相關(guān)性分析表明，他們之間仍存在極顯著相關(guān)性（r=0.852達(dá)極顯著水平（p<0.001）。兩種標(biāo)記復(fù)合聚類(lèi)與單一聚類(lèi)進(jìn)行比較，SRAP標(biāo)記結(jié)果與之比較接近，因此SRAP標(biāo)記在種質(zhì)資源遺傳多樣評(píng)價(jià)中可能更具可靠性。
　　6.兩種標(biāo)記的三個(gè)主要遺傳多樣性