三種早熟水稻變異株系的AFLP分析.pdf

1、利用離子束介導(dǎo)技術(shù)，將玉米“鄭單14”的DNA片段直接導(dǎo)入受體水稻“豫粳6號”中，獲得大量變異材料。經(jīng)多代選育，得到一批性狀差異明顯，且能穩(wěn)定遺傳的水稻變異株系。本實(shí)驗(yàn)選取3個(gè)成熟期比對照水稻“豫粳6號”提前25-28天，已穩(wěn)定遺傳4代的水稻早熟變異株系：09-6-121-6-1-1-1(用A表示)、09-6-121-6-1-1-2(用B表示)和09-6-121-10-7-5-1(用C表示)作為研究材料。
　　 利用多態(tài)性豐富、

2、靈敏度高、穩(wěn)定性好的AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，以64對選擴(kuò)引物對3種早熟變異株系及其陽性對照玉米和陰性對照水稻的基因組DNA進(jìn)行多態(tài)性分析。AFLP擴(kuò)增結(jié)果顯示，3種早熟變異株系與陰性對照豫粳6號的AFLP擴(kuò)增圖譜相似率分別為85.8．％、87.4％和84.6％，說明變異株系A(chǔ)、B和C與對照豫粳6號基因組DNA存在顯著差異。變異株系A(chǔ)共擴(kuò)增出966條DNA條帶，差異帶90條，差異帶中新增帶55條，缺失帶28條，目的帶7條，差異比例為9.3％

3、；變異株系B共擴(kuò)增出963條DNA帶，差異帶81條，差異帶中新增帶51條，缺失帶22條，目的帶8條，差異比例為8.4％；變異株系C共擴(kuò)增出974條DNA帶，差異條帶98條，差異帶中新增帶59條，缺失帶31條，目的帶8條，差異比例為10.1％。差異帶的出現(xiàn)，說明經(jīng)離子束介導(dǎo)玉米DNA轉(zhuǎn)化處理后變異株系基因組DNA發(fā)生了變化。通過相似性分析發(fā)現(xiàn)，變異株系A(chǔ)、B、C及陰性對照水稻CK2與陽性對照玉米CK1之間的AFLP擴(kuò)增圖譜相似率分別為19

4、.9％、20.1％、20.0和18.8％，表明變異株系與陽性對照玉米基因組之間的相似性高于陰性對照豫粳6號。
　　 將AFLP指紋圖譜中的部分新增帶進(jìn)行回收、克隆并測序，然后將得到的序列信息在NCBI基因組數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast檢索分析。選擴(kuò)引物P6M4在變異株系A(chǔ)中擴(kuò)增到一條長度為494bp的新增序列，在3′端檢索到一段覆蓋率為75％，相似率為100％，來自6號染色體的粳稻序列與之匹配，在5′端檢索到一段覆蓋率24％，相似率為

5、99％，來自11號染色體的粳稻序列與之匹配，這表明受體水稻發(fā)生了染色體易位，可能由于離子注引起DNA鏈斷裂，在DNA重組修復(fù)過程中導(dǎo)致染色體變異的發(fā)生?；厥盏钠渌略鰩г诨蚪M數(shù)據(jù)庫中都能檢索到高度匹配的水稻序列，且存在個(gè)別堿基的差異，出現(xiàn)單核苷酸多態(tài)性，這可能是離子束介導(dǎo)使受體水稻基因組DNA個(gè)別堿基發(fā)生變異的結(jié)果。
　　 克隆并測序了4個(gè)選擴(kuò)引物(P6M4、P6M8、P7M1和P8M4)中的目的帶，利用DNAman軟件對獲得

6、的序列進(jìn)行相似性比對分析，并在NCBI基因組數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast檢索分析。結(jié)果顯示，選擴(kuò)引物P6M8在3個(gè)變異株系A(chǔ)、B和C中均擴(kuò)增到一段長度為190bp的目的序列，該目的序列在基因組數(shù)據(jù)庫中分別檢索到相似率為97％的水稻序列和相似率為90％的玉米序列與之匹配，并且水稻和玉米中都編碼NADH脫氫酶相關(guān)亞基，表明引物P6M8在三種早熟變異株系中擴(kuò)增到的目的序列可能為水稻和玉米間的同源序列。3個(gè)變異株系中擴(kuò)增到的其他目的序列與陽性對照玉米