豬肌肉生長(zhǎng)抑制素基因啟動(dòng)子區(qū)不同單倍型遺傳效應(yīng)的研究.pdf

1、肌肉生長(zhǎng)抑制素（myostatin，簡(jiǎn)稱抑肌素，又稱GDF8）是骨骼肌發(fā)育的負(fù)調(diào)節(jié)因子。在哺乳動(dòng)物中，myostatin對(duì)于控制骨骼肌的量發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。其啟動(dòng)子區(qū)的多態(tài)有可能影響轉(zhuǎn)錄及生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)用定點(diǎn)突變的方法構(gòu)建了8種單倍型載體，覆蓋豬myostatin基因啟動(dòng)子區(qū)435、447和879三個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠的C2C12細(xì)胞，在體外水平上分析了myostatin基因啟動(dòng)子區(qū)不同單倍型對(duì)基因表達(dá)的影響。以全同胞魯萊

2、黑豬為試驗(yàn)對(duì)象，以GAPDH基因?yàn)閮?nèi)標(biāo)，運(yùn)用qRT-PCR方法，比較了背腰最長(zhǎng)肌、半膜肌、半腱肌3種骨骼肌中BC和CC基因型豬myostatin基因mRNA表達(dá)量的差別。并分別用qRT-PCR和制作石蠟切片的方法進(jìn)一步分析了myostatin基因啟動(dòng)子區(qū)不同單倍型對(duì)MyHCs的表達(dá)以及肌纖維直徑和密度的影響。通過對(duì)myostatin啟動(dòng)子區(qū)3個(gè)SNT的綜合分析，找出對(duì)豬肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育乃至體重的增長(zhǎng)具有有利效應(yīng)的單倍型，進(jìn)而對(duì)豬的育種和生

3、產(chǎn)工作做出指導(dǎo)。研究結(jié)果如下：
　　 1.構(gòu)建了8種單倍型載體，其中4種單倍型（對(duì)應(yīng)載體為pGL3-A，pGL3-B，pGL3-C和pGL3-D）是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的單倍型（其中C和D單倍型為本實(shí)驗(yàn)室首次發(fā)現(xiàn)），其它4種為假設(shè)單倍型。
　　 2.體外試驗(yàn)表明，單倍型A（pGL3-A）啟動(dòng)報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄的水平顯著高于其它單倍型（P<0.01）。在4種已經(jīng)鑒定的單倍型中，pGL3-A的轉(zhuǎn)錄活性最高，pGL3-D最低。pGL3-C的活性

4、大于pGL3-B和pGL3-D。體內(nèi)試驗(yàn)表明，在半腱肌和半膜肌這兩種骨骼肌中，BC型豬myostatinmRNA的表達(dá)量低于CC型豬，且在半膜肌中達(dá)到顯著水平（P<0.01）。綜合結(jié)果表明，B單倍型對(duì)于肌肉的生長(zhǎng)具有有利效應(yīng)。
　　 3.除此之外，BC基因型豬骨骼?。òū逞铋L(zhǎng)肌、半腱肌和半膜肌）中4種肌球蛋白重鏈坳HyHCⅠ、MyHⅡa、MyHCⅡb和MyHCⅡx mRNA的表達(dá)水平都高于CC型。對(duì)肌纖維的直徑和密度的分析結(jié)