用無(wú)載體無(wú)選擇標(biāo)記反義Cm-ACO1基因轉(zhuǎn)化甜瓜品種河套蜜瓜的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以植物雙元表達(dá)載體pPZP221(35S-nos)為構(gòu)建的最初載體,通過(guò)MssI、VspI雙酶切去除植物選擇標(biāo)記慶大霉素aacC1(gentamycin acetyltransferasegene)抗性基因,并在該位點(diǎn)重新插入CaMV35S啟動(dòng)子和nos終止子序列,獲得無(wú)選擇標(biāo)記載體pPZP201(35S-nos)。將ACC氧化酶(ACO1)基因cDNA編碼區(qū)709 bp核苷酸序列反向構(gòu)建到pPZP201(35S-nos)載體,得

2、到載體pPZP201-ACO1。PsyⅠ、PaeⅠ雙酶切載體pPZP201-ACO1,獲得無(wú)植物選擇標(biāo)記基因無(wú)載體骨架序列的35S-ACO1-nos線性表達(dá)盒。通過(guò)花粉管導(dǎo)入法轉(zhuǎn)基因技術(shù)將表達(dá)盒DNA片段導(dǎo)入受體材料河套蜜瓜中,經(jīng)選育獲得了T1代轉(zhuǎn)基因耐貯藏品系。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1)導(dǎo)入20朵花,收獲18顆果實(shí),通過(guò)PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),有4顆果實(shí)中的T0代種子的陽(yáng)性率較高。
　　 2)經(jīng)連續(xù)兩代田間篩選

3、,獲得表現(xiàn)為耐貯特性的4個(gè)耐貯藏株系。耐貯藏株系的T0、T1代果實(shí)貯藏到30d時(shí),其果實(shí)硬度平均值分別為4.9 kg/cm2、4.95kg/cm2,而非轉(zhuǎn)基因河套蜜瓜已經(jīng)腐爛。折光糖測(cè)定指標(biāo)表明轉(zhuǎn)基因河套蜜瓜T0、T1代果實(shí)與非轉(zhuǎn)基因河套蜜瓜無(wú)明顯差別。T0、T1代果實(shí)內(nèi)源乙烯含量為非轉(zhuǎn)基因河套蜜瓜的3％-4％。
　　 3)對(duì)具有耐貯特性的T1代河套蜜瓜的蔓粗、蔓長(zhǎng)和葉片大小進(jìn)行分析,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)反義ACO1基因河套蜜瓜與非轉(zhuǎn)基因