油桐花牙分化期外源激素對Tung1fy表達(dá)特性及光合作用的影響.pdf

1、油桐(Vernicia.fordii(Hemsl.))是我國特有經(jīng)濟(jì)林木,栽培歷史悠久,桐油是重要工業(yè)用油。而花芽分化是植物生殖過程的基礎(chǔ),直接關(guān)系到果實的產(chǎn)量和質(zhì)量。本文研究了油桐花芽分化時期不同階段,成花關(guān)鍵基因Tunglfy表達(dá)特性對激素信號的響應(yīng)和不同激素刺激對光合作用的影響,為油桐花芽分化機制及外源激素調(diào)控提供了理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.通過比較不同濃度CTAB,不同抽提方法,不同沉淀方法,不同樣品用量對

2、油桐總RNA提取質(zhì)量的影響,提出了改良CTAB法。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測,18S、28S、5.8S清晰可見,28S:18S接近2:1；OD260/OD280在1.7～1.9之間。說明改良CTAB法提取的總RNA的純度和完整性較高。
　　 2.分析植物肌動蛋白(β-Actin)基因的保守區(qū)序列,設(shè)計引物。以油桐花芽總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA第一鏈為模板,利用RT-PCR擴(kuò)增出長為400bp左右的cDNA片段,克隆入 pMD18-T載體

3、。測序和序列分析表明,獲得了大小為396bp的cDNA片段,該片段與蓖麻等有較高的核苷酸同源性,達(dá)到了97％。
　　 3.以油桐肌動蛋白作為內(nèi)參基因,以油桐花芽分化關(guān)鍵時期不同階段,不同激素處理的油桐嫩芽的RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板,用 Tunglfy基因引物和肌動蛋白基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,以目的基因與內(nèi)參基因的電泳條帶亮度值的比值作為Tunglfy相對表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)100mg/L脫落酸對 Tun